四川省应用基础研究计划项目(2008jy0014)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 相关作者：付光新周航宇夏德林刘道华贾娟更多>>
- 相关机构：西南医科大学附属口腔医院泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目四川省卫生厅科研基金泸州市科技局基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Triton X-100对脂质体介导的BMP-2基因转染大鼠BMSCs的作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨Triton X-100对脂质体介导的BMP-2基因转染大鼠BMSCs的作用。方法 8周龄Wistar大鼠1只,雄性,体质量120 g。取Wistar大鼠股骨、胫骨骨髓,采用贴壁培养法分离培养BMSCs并鉴定。取第3代BMSCs,采用MTT法筛选Triton X-100适宜浓度。实验分成3组,实验组:BMP-2+脂质体+0.010%Triton X-100+BMSCs,常规转染组:BMP-2+脂质体+BMSCs,空白对照组:BMSCs+血清培养基。转染后48 h,倒置荧光显微镜观察各组绿色荧光蛋白表达情况;转染后72 h,采用实时荧光定量PCR检测BMP-2 m RNA表达。结果 0.010%Triton X-100既能使BMSCs保持一定的活力,又可达到一定的作用效果,故确定其为适宜浓度。转染后48 h,倒置荧光显微镜下见实验组和常规转染组均有绿色荧光蛋白表达,空白对照组无绿色荧光蛋白表达。转染后72 h,实验组BMP-2 m RNA相对表达量为5.94±0.12,常规转染组为4.99±0.08,差异有统计学意义(t=360.28,P=0.02)。实验组转染效率较常规转染组平均提高了19%。结论 0.010%Triton X-100可以促进脂质体介导的BMP-2基因转染大鼠BMSCs,并提高其转染效率。
- 夏德林黄铭柯付光新马征吴双江周航宇
- 关键词：BMSCSTRITON脂质体
- 兔骨髓基质干细胞体外分离培养及生物学特性研究被引量：2
- 2011年
- 目的:研究兔骨髓基质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSC)体外分离、诱导培养及增殖特点,探讨其生物学特性。方法:抽取兔骨髓,密度梯度离心结合贴壁培养法分离BMSC,诱导培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化。倒置显微镜下观察细胞生长及增殖情况,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,免疫组织化学观察Ⅰ型胶原表达,并检测碱性磷酸酶活性及细胞矿化作用。结果:体外培养的兔BMSC贴壁生长,10～14天后形成克隆。细胞形态为均一的长梭形并呈漩涡状排列,流式细胞仪检测CD34,CD45阴性,CD44阳性。免疫组化可检测到Ⅰ型胶原表达,碱性磷酸酶活性明显增高,并且出现矿化结节。结论:密度梯度离心结合贴壁培养BMSC,操作简单,细胞易于成活,诱导条件下成骨能力肯定,适合作为骨组织工程的种子细胞。
- 夏德林刘道华贾娟付光新陈俊良周航宇
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞培养生物学特性
- 骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染骨髓基质干细胞的异位诱导成骨能力被引量：10
- 2017年
- 背景:应用骨形态发生蛋白2(BMP2)和血管内皮生长因子165(VEGF165)双基因转染骨髓基质干细胞诱导成骨,为组织工程骨的研究提供实验基础。目的:探讨BMP2和VEGF165双基因转染大鼠骨髓基质干细胞的异位诱导成骨能力。方法:4周龄SD大鼠4只,取股骨、胫骨骨髓,采用全骨髓贴壁法分离培养骨髓基质干细胞,取第3代骨髓基质干细胞分为5组,分别为未转染组、空载质粒组、BMP2单基因转染组、VEGF165单基因转染组、BMP2和VEGF165双基因共转染组,转染后48 h通过Western Blot检测BMP2和VEGF165蛋白表达变化,转染后7d检测各组细胞的碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)BMP2和VEGF165双基因共转染组和BMP2单基因转染组中有大量的BMP2分泌。BMP2和VEGF165双基因共转染组和VEGF165单基因转染组中有大量的VEGF165分泌。双基因共转染组中BMP2和VEGF165蛋白水平与单基因转染组比较,差异有显著性意义(P<0.05);(2)BMP2和VEGF165双基因共转染组中碱性磷酸酶活性最高,其次是BMP2单基因转染组,而VEGF165单基因转染组明显不如前两组,但是略高于空质粒转染组和未转染组。统计分析表明双基因共转染组与单基因转染组比较,差异有显著性意义(P<0.05);(3)结果表明,BMP2和VEGF165双基因转染促进骨髓基质干细胞异位成骨的能力更强。
- 周航宇夏德林甘生远邵学磊
- 关键词：干细胞骨形态发生蛋白质类骨髓基质干细胞BMP2VEGF165诱导成骨
- 硅酸盐基-Cu/Mg生物活性陶瓷促进成骨细胞的成骨性能被引量：2
- 2020年
- 背景:硅酸盐生物陶瓷作为组织工程骨支架时促成骨能力不足。研究发现铜、镁等人体所必需微量元素对成骨细胞和成血管细胞具有明显的诱导、刺激作用。目的:探讨掺杂铜、镁元素的多元硅酸盐生物活性陶瓷对成骨细胞增殖和成骨性能的影响。方法:将铜、镁加入硅酸盐生物活性陶瓷中,采用溶胶-凝胶法制备掺铜硅酸盐生物陶瓷、掺镁硅酸盐生物陶瓷与掺铜镁硅酸盐生物活性陶瓷(陶瓷中铜、镁的摩尔百分比均为5%),分别记为CS-5Cu、CS-5Mg、CS-5Cu/5Mg,以硅酸盐生物活性陶瓷为对照(记为CS),利用X射线衍射、傅里叶红外光谱对样本进行表征,检测生物陶瓷表面析晶情况。将成骨细胞分别与4组陶瓷共培养24 h,分析成骨细胞的增殖指数、碱性磷酸酶分泌量、骨桥蛋白和骨钙素基因表达及黏着斑和肌动蛋白表达。结果与结论:①陶瓷矿化结晶能力大小顺序为:CS-5Cu>CS>CS-5Cu/5Mg>CS-5Mg;②成骨细胞增殖指数的大小顺序为:CS-5Cu/5Mg>CS-5Cu≈CS-5Mg>CS;③碱性磷酸酶分泌量的大小顺序为:CS-5Cu/5Mg>CS-5Cu≈CS-5Mg>CS;④骨桥蛋白和骨钙素基因表达的高低顺序为:CS-5Cu/5Mg>CS-5Cu≈CS-5Mg>CS;⑤黏着斑和肌动蛋白表达多少的顺序为:CS-5Cu/5Mg>CS-5Cu≈CS-5Mg>CS;⑥结果表明,掺铜或掺镁硅酸盐生物活性陶瓷可促进成骨细胞的增殖、成骨相关基因表达及其黏附与铺展,且同时掺入两种离子硅酸盐生物活性陶瓷的促进效果最明显。
- 周航宇曾富海夏德林
- 关键词：成骨细胞成骨性能生物活性
