甘肃省自然科学基金(1308RJZA246)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- MiR-155与KLF4的靶向结合对肾小管上皮细胞MMPs表达的影响
- 2017年
- 目的研究miR-155是否通过下调靶基因Kruppel样因子4(KLF4)影响肾小管上皮细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9的表达。方法首先验证miR-155是否可以抑制肾小管上皮细胞中MMPs的表达和活性及其对KLF4表达影响:miR-155-mimic、miR-155mimic-对照(空质粒)、空白培养基转染离体培养的肾小管上皮细胞,6h后,荧光定量RT-PCR检测miR-155表达,免疫印迹试验(Western blot)检测细胞MMP-2、MMP-9、KLF4的表达,明胶酶谱检测细胞中MMP-2和MMP-9的活性。生物信息学预测miR-155潜在靶基因为KLF4后,验证miR-155是否是通过靶向抑制KLF4发挥其作用:肾小管上皮细胞用过表达miR-155的质粒转染后,再进一步转染KLF4过表达质粒或空质粒,6h后Western blot和明胶酶谱法再次检测上述指标。另取细胞,分别构建包含KLF4-3′-UTR野生型和突变型序列的荧光素酶质粒,与miR-155-mimic或者空质粒对照共转染肾小管上皮细胞,24h后荧光素酶试验检测miR-155对KLF4基因的靶向抑制。结果相比转染miR-155mimic-对照的细胞,转染了miR-155-mimic的细胞miR-155表达上调,KLF4的表达受到抑制,MMP-2、MMP-9的表达和活性下降。相比于转染miR-155质粒和转染miR-155+空质粒,转染过表达KLF4+miR-155质粒的细胞KLF4表达上调,MMP-2、MMP-9的表达和活性增加。荧光素酶试验验证miR-155可与KLF4靶向结合。结论 MiR-155可以通过靶向作用下调KLF4,从而抑制肾小管上皮细胞中MMP-2、MMP-9的表达和活性。
- 宁雅娴王俭勤王晓元
- 关键词：慢性肾功能不全基质金属蛋白酶
- miR-155对肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制研究被引量：1
- 2016年
- 目的·研究miR-155在慢性肾脏疾病(CKD)患者血清中的表达情况,探讨miR-155是否通过下调Kriippel样因子4(KLF4)影响肾小管上皮细胞转分化(EMT)。方法·收集126例CKDⅠ期患者、163例CKDⅢ期患者以及130例正常体检人员的血清,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组患者血清中miR-155的表达情况。在细胞实验中,用10μg/L TGF-β诱导肾小管上皮细胞EMT,通过转染miR-155 mimic和miR-NC至离体培养的肾小管上皮细胞中,光学显微镜下观察细胞形态变化。Transwell试验检测细胞的迁移侵袭能力,免疫印迹试验(Westernblotting)检测细胞中平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)、胶原蛋白Ⅳ(collagenⅣ)、钙黏着蛋白-E(E-cadherin)的表达情况。生物信息学预测miR-155潜在靶基因为KLF4,利用荧光素酶试验验证KLF4是miR-155的靶基因;再通过转染过表达KLF4的质粒至肾小管上皮细胞,检测细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ、E-cadherin、KLF4的表达情况。结果·相比于正常人群组和CKDⅠ期患者,miR-155在CKDⅢ期患者血清中的表达降低。在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-155 mimic后,肾小管上皮细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ、KLF4的表达减少,E-cadherin表达增加;荧光素酶试验结果显示,miR-155能够显著降低含KLF4-3'-UTR序列质粒的荧光素酶活性;转染过表达KLF4质粒后,肾小管上皮细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ表达增加,E-cadherin表达减少。结论·在CKD患者血清中,miR-155低表达;miR-155可以通过下调KLF4从而抑制肾小管上皮细胞EMT。
- 宁雅娴王俭勤王晓元
- 关键词：慢性肾功能不全MIR-155肾小管上皮细胞转分化
- 自拟宝肾方治疗慢性肾脏病2～3期患者的临床疗效观察被引量：2
- 2014年
- 目的：观察自拟宝肾方对慢性肾脏病（CKD ）2～3期患者的临床疗效及安全性。方法将65例明确诊断为CKD 2～3期患者随机分为治疗组（n＝34例）和对照组（n＝31例）。对照组给予西医常规基础治疗；治疗组在对照组基础上加用自拟宝肾方治疗。分别于6个月及12个月后观察两组疗效。检测血胱抑素C（Cys-c）、血肌酐（SCr）、肾小球滤过率（eGFR）、24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）以及胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（VDL）。结果①治疗6个月后，宝肾方组Cys-C水平明显降低（P＜0．05）；但与对照组比较，降低不明显（P＞0．05）。治疗12个月后，宝肾方组 Cys-C明显降低（P＜0.05）；与对照组比较，亦有明显降低（P＜0.05）。②宝肾方组治疗6个月后，Scr、eGFR水平均无明显变化（P＞0．05）；与对照组比较，变化不明显（P＞0．05）。治疗12个月后，宝肾方组Scr有降低趋势，eGFR有升高趋势，变化不明显（P＞0．05）；但与对照组比较，有明显变化（P＜0．05）。③治疗6个月后，宝肾方组24 h-UTP水平明显降低（P＜0．05）；但与对照组比较，降低不明显（P＞0．05）。治疗12个月后，宝肾方组24 h-UTP较治疗前明显降低（P＜0．05）；与对照组比较，亦有明显降低（P＜0．05）。④治疗6个月后，宝肾方组TC、TG、HDL以及VDL水平均无明显变化（P＞0．05）；与对照组比较，变化均不明显（P＞0．05）。治疗12个月后，宝肾方组血脂四项有明显变化（P＜0．05）；与对照组比较，亦有明显变化（P＜0．05）。结论宝肾方可改善CKD 2～3期患者的肾功能，降低尿蛋白，调节脂代谢，具有一定的肾脏保护和延缓CKD进展的作用。
- 李侠王俭勤陈红鹰王文革
- 关键词：慢性肾脏病肾功能尿蛋白血脂
- 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯与胰岛素抵抗的研究进展被引量：4
- 2018年
- 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)是一种广泛分布于日常生活中的塑化剂。流行病学研究表明,DEHP暴露与胰岛素抵抗相关,而胰岛素抵抗又影响2型糖尿病和代谢综合征的发生。DEHP可通过胰岛素信号转导通路、转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)途径、氧化应激、溶酶体-线粒体轴途径及其他代谢危险因素导致胰岛素抵抗。
- 张敏何继瑞
- 关键词：胰岛素抵抗胰岛素敏感性胰岛素信号转导
- 邻苯二甲酸二（2-乙基已）酯对胰岛MIN6β细胞毒性作用的研究
- 2017年
- 目的 观察邻苯二甲酸二（2-乙基已）酯（DEHP）对胰岛MIN6 β细胞生长活力、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 选用小鼠胰岛MIN6 β细胞作为研究对象,并将其分为DEHP组和对照组,DEHP组分别用0.25、0.5、1、2 mmol/L DEHP作用16、48、72 h.对照组用0.1％二甲基亚砜（DMSO）作用16、48、72 h.通过MTT实验检测细胞生长活力,流式细胞技术测定细胞凋亡率及细胞周期.结果 与对照组相比,在16、48及72 h随着DEHP浓度的增加,MIN6 β细胞生长活力受到抑制,细胞存活率明显下降（F=112.25、91.06、589.25,P均＜0.01）;0.25、0.5、1 mmol/L DEHP组MIN6 β细胞凋亡率明显升高[（5.00±0.22）％、（8.33±0.09）％、（19.62±0.44）％,F=3 006.09,P＜0.01];0.5、1 mmol/L DEHP组受到MIN6 β细胞周期进程受到干扰,G0/G1期细胞比例[（68.50±0.89）％、（73.63±0.96）％,F=242.46,P＜0.01]明显升高,S期细胞[（17.57±1.15）％、（14.40％±0.91）％,F=49.28,P＜0.01]与G2/M期[（13.93±0.42）％、（11.97±1.85）％,F=72.70,P＜0.01]比例明显降低.结论 DEHP可抑制胰岛MIN6 β细胞增殖、诱导细胞凋亡、导致细胞周期停滞在细胞间期.
- 赵紫婷孟颖飞徐坤何继瑞
- 关键词：MIN6Β细胞
- 高压氧治疗糖尿病足的临床疗效分析被引量：1
- 2017年
- 目的分析糖尿病足应用高压氧治疗的临床效果。方法任选90例该院2013年5月—2017年5月收治的糖尿病足患者,分为两组,对照组给予常规治疗,研究组在此基础上给予高压氧治疗,观察两组治疗效果。结果治疗后研究组空腹血糖为(3.9±1.3)mmol/L,对照组为(6.2±1.9)mmol/L,对比差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗C反应蛋白、白细胞、糖化血红蛋白等生化指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组与对照组有效率分别为93.3%和73.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对糖尿病足患者应用高压氧治疗的临床效果显著,且不会影响患者血生化指标,具有较高疗效和安全性,可推广。
- 徐坤何继瑞胡彩虹张晓敏
- 关键词：糖尿病足生化指标高压氧
