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江苏省卫生厅医学科技发展基金(Z200328): 作品数：9 被引量：30H指数：5; 相关作者：李湘鸣祝娉婷罗方妮陈春波吴玉娟更多>>; 相关机构：扬州大学更多>>; 发文基金：江苏省卫生厅医学科技发展基金教育部留学回国人员科研启动基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>; 相关领域：医药卫生环境科学与工程生物学农业科学更多>>

雌激素调控的绿色荧光蛋白在酵母细胞中的表达被引量：1: 2006年; 采用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,用酵母细胞构建环境雌激素(EEH)的评价体系,可敏感、快速、方便地筛选出EEH化合物。通过分子生物学技术,将GFP基因插入到pM P 206/ERE启动子CYC 1的下游,用GFP取代L ac Z基因,并转化于酵母细胞。DNA测序发现ERE-CYC 1-GFP框架正确。对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因(hER cDNA)和GFP基因特异条带,说明hER cDNA和GFP已重组于酵母细胞。荧光显微镜下发现大量的绿色荧光颗粒,表明GFP基因在酵母细胞中成功表达。酵母细胞经不同浓度雌二醇作用后,与GFP表达量有剂量效应关系。与其他酵母评价体系相比,以GFP为报告基因评价EEH不需要破坏细胞壁,也不需要底物,可在96孔板中完成,这为高通量筛选EEH化合物奠定了基础。; 李湘鸣罗方妮陈春波张唯立吴玉娟祝娉婷; 关键词：环境雌激素酵母细胞基因重组绿色荧光蛋白

重组酵母细胞快速筛选环境雌激素系统的建立被引量：12: 2006年; 目的建立环境雌激素的体外快速筛选方法。方法通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)插入LacZ(β-半乳糖苷酶)报告基因的上游,并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。观察了不同浓度的β-雌二醇(1×10-8、1×10-6、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10、100nmol/L)作用4和8h对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,以及3种重组酵母细胞细胞壁破碎法——冰冻法、超声波破碎法、氯仿化学裂解法对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,观察了不同浓度的苯甲酸雌二醇(200、1000、5000、25000、125000nmol/L)、β-雌二醇(0.0001、0.001、0.01、0.1、10、100、1000nmol/L)和双酚A(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10nmol/L)对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响。结果经PCR鉴定,雌激素调控的LacZ基因重组酵母细胞构建成功。重组酵母细胞暴露于β-雌二醇4和8h,时间-剂量-效应关系无明显变化;超声波破碎法对酵母细胞破碎效果最好,呈“S”型剂量-效应曲线;用超声波破碎法对3种受试物试验发现,β-雌二醇活力最强,双酚A次之,苯甲酸雌二醇活力最低。结论经雌激素受体介导的环境雌激素酵母评价系统成功建立且比较稳定。; 李湘鸣罗方妮陈春波; 关键词：雌激素酵母细胞内分泌干扰物

DDT类农药的拟雌激素活性研究被引量：5: 2007年; 目的研究DDT类农药(p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE)的拟雌激素活性。方法用重组人雌激素受体(hER)基因酵母细胞(W303-1A-hER-ERE-LacZ)评价DDT类农药的拟雌激素活性。将终浓度为10-9～10-15mol/L的17β-雌二醇、终浓度为10-3～10-9mol/L的p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE加入酵母细胞培养液,作用4h,通过定量测定β-半乳糖苷酶的活力表达DDT类农药的雌激素作用强度。结果DDT类农药能像配体一样与hER结合,发挥雌激素效应,并具有剂量-效应关系;o,p′-DDT雌激素活性较强,EC50为5.30×10-7mol/L,p,p′-DDE雌激素活性较弱,EC50为9.28×10-5mol/L,同分异构体间(o,p′-DDT、p,p′-DDT)雌激素活性具有协同效应,联合效应相加指数(AI)为1.5;同系物间(p,p′-DDD、p,p′-DDE)雌激素活性具有拮抗效应,AI=-1.38;4种DDT类农药联合雌激素效应呈协同作用,回归方程为y^=2.6006x2-28.079x-21.757,EC50为2.57×10-8mol/L,AI=0.83。结论DDT类农药是经雌激素受体(ER)介导的环境雌激素,p,p′-DDT、o,p′-DDT、p,p′-DDD、p,p′-DDE联合效应拟雌激素活性呈协同激活作用。; 陈秀云祝娉婷吴玉娟李湘鸣卜仕金; 关键词：农药酵母细胞

重组基因酵母细胞对DDT类农药的雌激素活性研究被引量：2: 2006年; 陈秀云陈春波吴玉娟祝娉婷李湘鸣卜仕金; 关键词：雌激素受体

基因重组酵母细胞测定中药中雌激素类化合物的研究被引量：1: 2007年; 目的:研究不同性味中药中植物性雌激素的含量。方法:用重组人雌激素受体(hER)基因酵母细胞(W 303-1A/hER-ERE-LacZ)测定清热药、解表药、利水渗湿药、止血药、补益药、收涩药中的植物性雌激素的活性。通过定量测定β-半乳糖苷酶活性表示中药的雌激素强度。结果:清热药中雌激素含量最高,为6.35×10-3nmol.g-1,止血药与补益药中雌激素含量较低,几乎测不出。结论:虎杖、连翘、秦皮、黄芩、麦冬中可与雌激素受体结合的植物性雌激素含量较高。; 祝娉婷卜平陈秀云吴玉娟陈春波李湘鸣; 关键词：中药植物性雌激素雌激素受体

DDT类农药同分异构体和同系物的联合雌激素效应被引量：5: 2006年; [目的]研究DDT类农药同分异构体和同系物的联合雌激素效应。[方法]用重组人雌激素受体（hER）基因酵母细胞（W303—1A／hER—ERE—LacZ）评价DDT农药同分异构体和同系物的雌激素活性。将终浓度为10^-4-10^-15的17β-雌二醇、终浓度为10^-3-10^-9的p，p＇-DDT、o，p＇-DDT和p，p＇-DDD、p，p＇-DDE加入酵母细胞培养液，作用4h，通过定量测定β-半乳糖苷酶的活性表示DDT农药的雌激素作用强度。[结果]o，p-DDT和p，p＇-DDD能像配体一样与hER结合，发挥雌激素效应，并且具有剂量效应关系，回归方程分别为^y=1．4553x^2＋47．366x＋333．31和^y=-0．1658x^3．6506x^2—23．176x-25．809。同分异构体间比较，o，p＇-DDT相对雌激素活性较强，EC50为2．04×10^-7mol／L，而p，p-DDT的EC50为3．71×10^-4mol／L，两者雌激素作用呈协同效应，联合效应相加指数（AI）=0.74（〉0）；同系物间比较，P，P＇-DDD雌激素活性明显较强，EC50为2．78×10^-7mol／L，而p，p＇-DDE的EC50为5．88×10^-5mol／L，两种同系物的雌激素作用呈拮抗效应．AI=-1．13（〈0）。[结论]o，p-DDT和p，p＇-DDD是经雌激素受体（ER）介导的环境雌激素，o，p-DDT与p，p＇-LDDT同分异构体间雌激素活性具有协同效应，p，p-DDD和p，p-DDE同系物间雌激素活性呈拮抗效应。; 陈秀云陈春波祝娉婷吴玉娟李湘鸣卜仕金

快速筛选环境雌激素酵母细胞的试验研究被引量：6: 2005年; 通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)基本序列插入β-半乳糖苷酶的LacZ报告基因的上游,并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。结果表明:当环境雌激素作用于酵母细胞时,会使ER发生变构效应,与ERE结合使LacZ基因得以表达,其表达量与环境雌激素的污染程度具有剂量效应关系,通过检测β-半乳糖苷酶的活性,可反映环境雌激素的污染程度;与双酚A和苯甲酸雌二醇活性相比较,β-雌二醇活性最强,但双酚A活性明显高于苯甲酸雌二醇。; 李湘鸣罗方妮陈春波; 关键词：环境雌激素酵母雌激素受体

环境雌激素调控的β-半乳糖苷酶酵母细胞的建立被引量：6: 2005年; 为建立环境雌激素的酵母评价体系,将人工合成的雌激素效应元件插入pM P 206质粒的上游,并将该质粒转入人雌激素受体基因重组酵母细胞,使L acZ基因置于雌激素的调控之下,以构建可用于评价环境雌激素的酵母细胞。结果表明:经DNA测序发现pM P 206/ERE-L acZ报告质粒DNA框架正确,对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因和pM P 206/ERE-L acZ报告质粒的特异性条带,说明雌激素受体基因和受雌激素调控的L acZ报告基因已重组于酵母细胞,从而证明以L acZ为报告基因的环境雌激素酵母评价细胞重组成功。; 陈春波罗方妮李湘鸣; 关键词：环境雌激素酵母细胞基因重组

基因重组酵母细胞检测养殖场污水中环境雌激素被引量：6: 2007年; 用细胞生物学分析方法,对某养殖场污水处理厂水样中的类雌激素活性进行了分析,其中处理前水样6份,处理后水样9份。水样中的雌激素类化合物分别用大孔树脂富集,依次用丙酮、甲醇、乙醚洗脱,洗脱液经水浴蒸发挥干并用二甲亚砜定容。用重组人雌激素受体酵母细胞测其类雌激素活性,报告基因为编码β-半乳糖苷酶的LacZ基因。结果发现,处理前水样雌激素活性较高,而处理后水样对β-半乳糖苷酶的诱导水平较低。经17β雌二醇(E2)标准曲线换算成雌二醇当量,发现处理前水样雌激素活性在0.0001至0.15nmol·L-1E2当量,而处理后水样雌激素活性明显下降,有17个水样雌激素活性低于检出限,这说明畜牧厂污水中的雌激素类化合物通过污水处理厂处理后可下降。; 李湘鸣罗方妮刘桂霞祝娉婷; 关键词：养殖场污水生物检测环境雌激素

雌激素调控的绿色荧光蛋白在酵母细胞中的表达: ＜正＞采用绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因,用酵母细胞构建环境雌激素（EEH）的评价体系,能敏感、快速、方便地筛选EEH化合物。通过分子生物学技术,将GFP基因插入到pMP206／ERE启动子CYC1的下游, 用GFP...; 李湘鸣罗方妮陈春波张唯立吴玉娟祝娉婷; 关键词：环境雌激素酵母细胞基因重组; 文献传递

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