国家高技术研究发展计划(2006AA02A309)
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 相关作者：王立明梁锐孙德光唐博高振明更多>>
- 相关机构：大连医科大学附属第二医院大连医科大学附属第一医院天津医学高等专科学校更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
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- δ阿片受体激动剂D-丙2，D-亮5脑啡肽通过蛋白激酶C途径抑制人肝癌HepG2细胞增殖并增强其对顺铂的敏感性被引量：5
- 2012年
- 目的研究8阿片受体激动剂D-丙2，D-亮5脑啡肽（DADLE）对人肝癌HepG2细胞增殖的影响，并探讨其与蛋白激酶C（PKC）途径的关系。方法分别以0．01、0．1、1．0和10μmol／L的DADLE处理HepG2细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（Mar）法检测细胞的增殖活性，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot法检测PKCmRNA和P—PKC蛋白的表达。分别以DADLE＋纳曲吲哚（NAL）或佛波酯（PMA）处理HepG2细胞，采用流式细胞仪观察细胞周期，Mar法检测细胞的增殖活性，Westernblot法检测p-PKC蛋白的表达。以DADLE＋顺铂处理HepG2细胞，MTT法检测HepG2细胞的生长抑制率。结果不同浓度的DADLE通过抑制HepG2细胞中PKCmRNA和P—PKC蛋白的表达对HepG2细胞的增殖发挥抑制效应。流式细胞仪检测结果显示，与对照组相比，DADLE处理组HepG2细胞中S＋G2／M期细胞的比例降低了3．94％（P〈0．01）；给予NAL或PMA处理后，S＋G2／M期细胞的比例分别增加了3．22％和3．63％（P〈0．01）。MTT法和Westernblot法检测结果显示，与对照组相比，DADLE处理组HepG2细胞的A570nm值和P-PKC蛋白的表达显著下降（P〈0．01）；给予NAL或PMA处理后，HepG2细胞的A570nm值和p-PKC蛋白的表达明显升高（P〈0．01）。DADLE＋顺铂处理组HepG2细胞的生长抑制率为79．9％，显著高于DADLE处理组（25．2％）和顺铂处理组（43．2％，P〈0．01）。结论DADLE激活8阿片受体对人肝癌HepG2细胞的增殖具有抑制作用，其机制与PKC途径相关。DADLE可增强HepG2细胞对顺铂的敏感性。
- 唐博杜渐高振明梁锐孙德光金学利王立明
- 关键词：受体阿片样HEPG2细胞蛋白激酶C细胞增殖
- 磷酸化蛋白PED／PEA-15在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
- 2009年
- 本研究利用蛋白磷酸化检测技术筛选和鉴定肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma HCC）组织中的磷酸化蛋白，检测到磷酸化蛋白PED／PEA-15在肝细胞肝癌组织中表达，进一步利用Western blot检测PED／PEA-15（s-116）在肝细胞肝癌的表达情况。
- 孙德光吴益峰高振明梁锐王立明
- 关键词：肝细胞肝癌磷酸化蛋白PEDBLOT检测肝癌组织
- 线粒体蛋白质组学在肿瘤研究中的进展被引量：1
- 2012年
- 线粒体DNA的突变和蛋白表达谱的异常,将严重影响细胞的凋亡和能量代谢过程,这一变化可能是恶性肿瘤细胞代谢及功能异常的重要组成部分。蛋白质组学技术可以分析肿瘤细胞或组织在某一时间点内全蛋白的表达情况及活性,而基于亚细胞水平研究的线粒体蛋白质组学较传统蛋白质组学研究有更高的分辨率。线粒体蛋白质组的改变与多种肿瘤相关,随着亚细胞分离技术和蛋白质鉴定技术的发展,线粒体蛋白质组学在寻找新的肿瘤相关特性蛋白研究中显示出越来越重要的意义。
- 凌孙彬唐博王立明
- 关键词：肿瘤线粒体蛋白质组学
- δ阿片受体激活通过蛋白激酶C途径抑制人肝细胞凋亡被引量：1
- 2012年
- 目的研究δ阿片受体激活对人肝细胞凋亡的抑制作用并探讨其与蛋白激酶C（PKC）途径的关系。方法体外培养人肝细胞，用MTT法检测细胞存活率；AnnexinV—FITC／PI双标记法检测细胞凋亡率；流式细胞仪分析细胞周期；RT—PCR检测PKC的mRNA表达；Westernblot分析PKC、Caspase-3蛋白的表达。结果体外培养的人肝细胞经血清剥夺48h后可发生明显的凋亡。激活δ阿片受体可显著抑制这一现象，细胞凋亡率降低（8．37±0．47）、Caspase-3蛋白表达减少（0．147±0．042）、PKC蛋白表达增加（O．698±0．130）。给予PKC拮抗剂GFl09203X后，δ阿片受体抑制细胞凋亡的作用显著下降（20．66±0．60）。结论激活肝细胞膜上的δ阿片受体对血清剥夺导致的人肝细胞凋亡具有抑制作用，其作用机制与PKC通路相关。
- 唐博张易梁锐隋吉栋金学利袁鹏王立明
- 关键词：阿片受体肝细胞CASPASE-3蛋白激酶C
- σ-2受体激动剂抑制肿瘤细胞增殖分子机制的研究进展
- 2013年
- σ-2受体作为一种膜受体,广泛分布于细胞及各细胞器膜表面,其在肿瘤生物学中的研究价值正得到进一步证实。其在处于高增殖期肿瘤细胞表达量是正常组织细胞的10倍,因此其特异性受体激动剂在肿瘤中更容易通过凋亡或非凋亡手段诱导细胞死亡。σ-2受体激动剂可以激活半胱天冬酶3(caspase-3)依赖的线粒体凋亡通路,但抑制caspase-3并不能完全逆转激动剂诱导的细胞死亡。其影响肿瘤细胞内质网钙离子释放,激活PKC通路,同时诱导细胞产生过多活性氧自由基(ROS),从而改变溶酶体膜通透性,诱导溶酶体内各种组织蛋白酶泄露和改变溶酶体内部酸性环境,导致保护性自噬泡的形成,而过量的自噬最终导致细胞程序性细胞死亡。不同受体激动剂影响不同细胞周期蛋白的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,并把肿瘤阻滞在不同的细胞周期。本文主要对σ-2受体激动剂诱导肿瘤细胞程序性细胞死亡机制进行了综述,加深其在肿瘤中作用的认识。
- 徐教邦孔阳孙德光王立明
- 关键词：肿瘤凋亡
- 磁性纳米粒子-抗体复合物分离肝癌线粒体
- 2012年
- 目的利用人肝癌组织,研究磁性纳米粒子-抗体复合物与传统线粒体分离方法之间的差异。方法取人肝癌组织,分别采用磁性纳米粒子-抗体复合物和密度梯度离心方法分离线粒体。扫描电镜观察线粒体形态,Westernblot检测线粒体蛋白标志物,流式细胞仪分析线粒体膜电位变化。结果采用磁性纳米粒子-抗体复合物方法分离得到的肝癌组织线粒体结构完整,无胞核、胞膜等组分的污染,几乎没有过氧化物酶体和溶酶体的污染。经流式细胞仪检测,线粒体膜电位稳定。结论与传统方法相比,磁性纳米粒子-抗体复合物分离方法具备简便易行,分离得到的线粒体结构完整、纯度及活性较高,并且不需要大型设备等优点。
- 唐博梁锐张易金学利赵樑王立明
- 关键词：密度梯度离心线粒体分离纯化
- 肝细胞肝癌相关蛋白质组学研究进展被引量：2
- 2009年
- 探讨和揭示肝细胞肝癌发生发展和转移复发的相关因素及分子机制,寻找早期诊断肝癌、预测转移的生物标记和干预治疗的药物靶点,已成为当今肝细胞肝癌研究的热点。随着后基因组时代的来临,作为功能基因的直接体现者及生物体生命功能执行者的蛋白质为多基因、多蛋白的肝细胞肝癌的研究创造了新的契机。
- 吴益峰孙德光王立明
- 关键词：肝细胞性肝癌蛋白质组学肿瘤标志物
- 凋亡抑制蛋白PED/PEA-15和XIAP在肝细胞肝癌中的表达及意义被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨凋亡抑制蛋白PED/PEA-15和XIAP在肝细胞肝癌中的表达及临床病理因素的关系.方法 我们应用RT-PCR和Western印迹检测了40例肝细胞肝癌和相应癌旁组织及12例正常肝组织中PED/PEA-15和XIAP mRNA及蛋白的表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 肝细胞肝癌组织中PED/PEA-15和XIAP mRNA蛋白的表达均明显高于癌旁组织和正常肝组织（相对吸光度比值为0.636±0.061、0.352±0.068、0.179±0.036与0.579±0.090、0.344±0.084、0.184±0.038）（P均＜0.01）,PED/PEA-15和XIAP mRNA和蛋白的表达在不同年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目、门静脉转移和肿瘤复发间的差异无统计学意义（P均＞0.05）,在不同的病理分级和临床分期间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 凋亡抑制蛋白PED/PEA-15和XIAP在肝细胞肝癌中呈高表达,可作为判断人肝细胞肝癌生物学行为的参考指标且有望成为肝细胞肝癌靶向基因治疗的新靶点.
- 孙德光吴益峰高振明梁锐王立明
- 关键词：肝细胞癌PED/PEA-15XIAPRT-PCR
- RNA干扰沉默EZH2基因增强人肝癌多药耐药Bel／Fu细胞对氟尿嘧啶的敏感性被引量：5
- 2012年
- 目的研究沉默人肝癌多药耐药Bel／Fu细胞的EZH2基因表达是否影响癌细胞对氟尿嘧啶（fluorouracil，5-Fu）的敏感性。方法体外培养肝癌多药耐药Bel／Fu细胞；EZH2siRNA干扰沉默EZH2基因表达；RT—PCR和Westernblot检测干扰后EZH2mRNA和蛋白的表达水平；MTT法检测细胞生长抑制率；AnnexinV—FITC／PI双标记法检测细胞凋亡率；流式细胞仪分析细胞周期；Westernblot检测多药耐药相关蛋白MDR1的表达水平。实验设对照组、5-Fu处理组、EZH2siRNA处理组、5-Fu和EZH2siRNA联合处理组。结果EZI-12siRNA干扰24h后，EZH2mRNA和蛋白的表达水平明显降低。在联合处理组中，MTF法检测其细胞凋亡抑制率为43．17％±3．81％，明显高于其他3组；流式检测联合处理组细胞凋亡率，其细胞凋亡值为30．4％±1．77％，明显高于其他3组。流式检测联合处理组细胞周期，发现联合组G1期细胞的百分比为69．16％±2．31％，明显高于其他3组，S＋G：＋M期细胞的百分比为30．76％±1．29％，明显低于其他3组，细胞周期被阻滞于G1期。检测MDR1在联合组中的表达水平，发现MDR1蛋白的表达水平明显低于其他组别。结论RNA干扰沉默EZH2基因可以增强Bel／Fu细胞对5-Fu的敏感性，其机制可能与MDR1蛋白表达降低有关。
- 张易唐博梁锐刘光普刘晨王立明
- 关键词：RNA干扰多药耐药相关蛋白类
- 磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达及其意义被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨人肝细胞肝癌组织中磷酸化蛋白p27的表达及其与临床病理特征的关系.方法 利用Ti4＋-IMAC富集和LC-MS2-MS3检测磷酸化蛋白的方法鉴定人肝细胞肝癌组织磷酸化蛋白,进一步利用Western blot检测40例肝细胞肝癌、相应癌旁组织和12例正常肝组织中T187、S10磷酸化p27蛋白（P-p27T187、P-p27S10）的表达.结果在肝癌组织磷酸化蛋白的筛选中鉴定到磷酸化蛋白p27,并确定IPI、磷酸化位点、蛋白激酶等信息,Western blot检测提示P-p27T187与P-p27S10在肝细胞肝癌组织表达明显高于癌旁、正常肝组织,其相对表达量分别为0.635±0.108、0.306±0.078和0.149±0.031,差异有统计学意义（P〈0.05）.且P-p27T187和P-p27S10与肝癌病理分级、临床分期及转移相关,而与发病年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目等无明显相关（P〉0.05）.结论 磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达水平明显升高,与肝癌的发生发展及转移相关.
- 吴益峰孙德光王静文高振明梁锐王立明
- 关键词：磷酸化蛋白P27
