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国家高技术研究发展计划(2006AA02A310): 作品数：23 被引量：25H指数：3; 相关作者：霍克克施慧莉王建周娟单敬轩更多>>; 相关机构：复旦大学军事医学科学院安徽医科大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>

信号转导与转录活化蛋白STAT3在肿瘤发生中的作用被引量：1: 2009年; STAT3是信号转导与转录活化蛋白(STAT)家族的一个重要成员,也是一个可以被多种调控细胞增殖、分化、发育、存活和炎症的细胞因子、生长因子及肿瘤蛋白所激活的关键信号转导蛋白。在多种肿瘤细胞、细胞性状转化过程和肿瘤形成过程中可以检测到组成性激活的STAT3。我们从STAT3在肿瘤细胞中组成性激活的机制、STAT3作为转录因子对肿瘤细胞调控的机制等方面对STAT3在肿瘤发生中的作用进行简要综述。; 马小伟常城王建; 关键词：肿瘤发生

人SCYL1-BP1重组蛋白的原核表达及分离纯化鉴定: 2012年; 前期研究结果发现,SCYL1-BP1具有细胞周期调控功能,同时具有肿瘤抑制因子的特性。目的:采用基因工程技术,构建SCYL1-BP1的大肠杆菌重组表达菌株,以获得足够量的高纯度目的蛋白,为后面进行一系列药理学检测及新药安全性测试奠定基础。方法:利用从人胎脑cDNA文库中克隆得到SCYL1-BP1基因克隆为模板,经PCR扩增,通过酶切位点克隆到新型原核表达载体pET-28b-SUMO上,转化大肠杆菌表达菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,摸索优化表达条件,表达产物经Ni柱进行亲和层析纯化,后再进行SDS-PAGE和Western blot等分析鉴定。结果:成功构建了SCYL1-BP1的原核表达工程菌BL21(DE3)/pET-28b-SUMO-SCYL1BP1。SDS-PAGE和Western blot检验结果表明,诱导表达的融合蛋白His6-SUMO-SCYL1BP1的分子量约为65 kDa,主要以可溶的形式存在,且能被His标签抗体和SCYL1-BP1单克隆抗体特异性识别。结论:原核表达并纯化了人SCYL1-BP1融合蛋白,为其后续功能研究及性质实验奠定基础。; 陈晓静陈小梅王洋施慧莉霍克克; 关键词：原核表达工程菌 SUMO

人类14-3-3ζ和GCH1蛋白相互作用的初步研究: 2007年; 目的寻找人类14-3-3ζ蛋白的相互作用蛋白,为进一步揭示14-3-3ζ的作用机理提供线索。方法以14-3-3ζ为"诱饵",利用酵母双杂交系统筛选人脑cDNA文库得到"猎物"蛋白,通过GST pull-down技术和哺乳动物细胞内免疫共沉淀技术验证14-3-3ζ和"猎物"蛋白的特异性结合。结果首次利用酵母双杂交cDNA文库筛选技术发现了14-3-3ζ能够与GTP环化水解酶Ⅰ(GTP cyclohydrolase1,GCH1)相互作用,并通过了体内和体外的蛋白质结合实验证实了这两个蛋白质之间的特异性相互作用。结论发现并验证了14-3-3ζ与GCH1之间的蛋白质相互作用,为进一步深入研究这两种蛋白质的功能及所引起的相关疾病的发病机理提供了新的线索。; 钱玮石彦伍慧玲田志鹏施慧莉霍克克; 关键词：酵母双杂交蛋白质相互作用

博来霉素对肝癌细胞DNA损伤以及H2AX相互作用蛋白的影响被引量：6: 2011年; 组蛋白H2AX是DNA损伤修复反应中的关键蛋白,磷酸化的H2AX可以作为DNA损伤早期检测的金标准.实验通过检测磷酸化H2AX的改变来研究博来霉素对肝癌细胞和正常肝细胞DNA损伤作用的差异,推测肿瘤细胞抗药性可能是通过H2AX磷酸化来介导的.利用免疫共沉淀的方法,对博来霉素刺激下肝癌细胞中的H2AX复合物进行了免疫印迹的检验,结果显示DNA损伤修复相关蛋白PARP1和Ku70在DNA损伤后与H2AX相互作用出现了上调.14-3-3ζ是首次发现的H2AX相互作用蛋白,其与H2AX的相互作用在DNA损伤后也出现了增强.这些H2AX复合物在DNA损伤修复、细胞周期、细胞凋亡中扮演了重要角色,与肿瘤细胞对于放疗、化疗的效果有着密切的关系,构成了肿瘤细胞抗药性的分子基础,同时也为肿瘤的分子靶向治疗提供了可靠的依据.; 邹鹏杨晓丽陈先; 关键词：博来霉素肝癌 H2AX DNA损伤

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS2的研究进展被引量：1: 2009年; 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种严重危害人类健康的病原体,全球感染率约3%,中国普通人群抗HCV阳性率约3.2%。然而,到目前为止,HCV感染还没有有效的治疗方法。近年的研究发现,HCV非结构蛋白NS2在HCV感染中扮演着重要角色,具有许多重要功能。NS2可以在HCV病毒的包装过程中发挥其功能,还可调节宿主细胞的基因表达及凋亡过程。此外,NS2蛋白还可参与NS5A磷酸蛋白的高度磷酸化修饰过程及为感染性HCV病毒粒子产生所必需。本文综述近几年来关于NS2蛋白的研究进展。; 龚巧玲王建贺福初; 关键词：丙型肝炎病毒细胞周期细胞凋亡

TNF-α诱导的信号转导中乙酰化蛋白质全谱及其功能的探索被引量：1: 2015年; 通过将体内稳定同位素标记细胞培养技术(AACT/SILAC)与LC-MS/MS联用,对哺乳动物细胞中TNF-α/NF-κB信号通路相关蛋白在TNF-α及TSA存在情况下乙酰化变化情况进行了研究.在TSA协同处理的、TNF-α刺激的细胞中鉴定到3个乙酰化蛋白,其中核糖体蛋白L4(60SRibosomal Protein L4,RPL4)已被报道存在乙酰化的后修饰,转铁蛋白受体1(Transferrin Receptor Protein 1,TfR1)和凋亡诱导因子3(ApoptosisInducing Factor,Mitochondrion-associated,3,AIFM3)尚未见报道.; 张晓夕左帅唐思伟陈先; 关键词：定量蛋白质组学 TNF-Α LC-MS/MS TFRC

RIOK3促进了caspase-10对PAK2的酶解激活被引量：1: 2012年; RIO3为非典型激酶RIO家族的成员之一,仅在多细胞真核生物中出现,为研究RIOK3蛋白的功能,以其作为诱饵蛋白对成人肝cDNA文库进行酵母双杂交筛选,得到其相互作用蛋白PAK2,并通过细胞内免疫共沉淀和免疫荧光共定位实验验证了该相互作用。实时定量PCR和免疫印迹检测结果显示,RIOK3能够在蛋白水平上降低PAK2表达量。通过CCK-8和细胞凋亡检测,发现二者共表达可以抑制增殖并促进凋亡,并且这一促凋亡效应可以被caspase-10的无酶活最短剪切本caspase-10G所抑制。实验结果显示,RIOK3可能促进了caspase-10对PAK2的酶解,在PAK2的酶解激活途径中发挥重要作用。; 林颖李璞单敬轩陈晓静施慧莉霍克克; 关键词：酵母双杂交细胞凋亡

CRK是PTPN4新的相互作用蛋白: 2008年; 以PTPN4为“诱饵”，利用酵母双杂交系统筛选人肝cDNA文库，获得了一个与PTPN4相互作用的蛋白：CRKⅠ．从cDNA文库中通过PCR得到CRK家族的3个成员的基因，把这3个基因与PTPN4共转酵母，发现CRKⅠ、CRKⅡ和CRKL均能与PTPN4发生很强的相互作用．通过截断体证实它们之间的相互作用是通过CRKs的SH3结构域与PTPN4的462-468位的脯氨酸富集区介导的．免疫共沉淀以及免疫荧光共定位实验进一步证实了CRKI与PTPN4的相互作用．通过酪氨酸磷酸化特异性抗体检测发现PTPN4可以明显降低CRKI的磷酸化水平．; 周娟万兵兵单敬轩吴冬华施慧莉霍克克; 关键词：CRK 酵母双杂交免疫荧光定位酪氨酸磷酸化

人类ZAKβ与YWHAZ蛋白相互作用的初步研究被引量：2: 2008年; 目的研究ZAKl5与YWHAZ蛋白之间的相互作用。方法以ZAKl5为诱饵蛋白，利用酵母双杂交筛选人类肝脏cDNA文库，经GSTPull—down、免疫共沉淀和细胞共定位实验分别验证ZAKl5与猎物蛋白在体外和细胞内的相互作用，构建ZAKl5的截短体以确定相互作用的区域，用磷酸化抗体检测ZAKl5在相互作用中的磷酸化作用，并通过流式细胞仪检测这对蛋白相互作用对细胞周期的影响。结果利用酵母双杂交筛选到一个能与ZAKl5相互作用的蛋白YWHAZ，并在体外和细胞内都验证了这二者的相互作用，发现这两个蛋白都能共定位于293T细胞的胞质中，确定了ZAKl5的N端1—250氨基酸为与YWHAZ蛋白相互作用的区域。体外实验发现了这二者的相互作用涉及到磷酸化反应，发现这对蛋白的相互作用能提高293T细胞的G，期水平。结论首次发现并证实了ZAKl5和YWHAZ之间的相互作用，发现该相互作用涉及到磷酸化过程并能够对细胞周期产生影响。; 赵晶王玮马雅婷施慧莉霍克克; 关键词：丝裂原活化蛋白激酶磷酸化细胞周期

胞内接头蛋白TRAFs家族被引量：5: 2008年; 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)受体相关因子(receptor-associated factor,TRAF)家族是一类胞内接头蛋白,能介导TNF受体和Toll-like/IL-1受体超家族成员与多种下游信号通路包括NF-κB (nuclear factorκB)和JNK(Jun N-terminal kinase)的信号传导。TRAF蛋白家族参与调控细胞增殖、分化乃至凋亡等生理过程。由于其在信号通路中的关键作用,TRAFs蛋白的失调与多种疾病的发生相关。本文结合最新的研究进展对TRAFs蛋白家族在信号传导通路中的地位进行介绍,并探讨了TRAFs及其相关蛋白在临床上可能的应用前景。; 张万巧王建; 关键词：TRAF 接头蛋白

国家高技术研究发展计划(2006AA02A310)

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