国家自然科学基金(30471978)
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 相关作者：杜军欧雪玲何玉文伍新尧刘鹏更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第二医院中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 酶激活式抗肿瘤前体药物的研究进展
- 2007年
- 酶激活式抗肿瘤前体药物利用特异表达于肿瘤组织的酶激活本无活性的前体药物而发挥靶向肿瘤细胞的细胞毒作用。本文根据肿瘤组织自身表达酶的部位、种类、结构、功能和性质的不同,阐述了现有几种酶激活式前体药物的工作原理和研究现状,比较了该类前药与人工引入酶激活式前药的优劣,评价其发展前景。
- 张田甜刘鹏杜军蔡绍晖
- 关键词：前列腺特异性抗原基质金属蛋白酶成纤维细胞激活蛋白
- 姜黄素抑制IFN-γ诱导的肿瘤细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶的表达被引量：4
- 2008年
- 目的:研究姜黄素对IFN-γ诱导的肿瘤细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响。方法:利用低浓度的姜黄素作用于人乳腺癌细胞A431、人宫颈癌细胞HeLa、人肝癌细胞HepG2、人鼻咽癌细胞CNE2各24h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测细胞的增殖;利用免疫印记检测姜黄素对这些肿瘤细胞内IDO表达的影响;利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测姜黄素对IDO基因表达的关键性干扰素应答因子1(IRF-1)的影响。结果:在这些肿瘤细胞内姜黄素对IDO的表达均有抑制作用,但姜黄素并没有抑制肿瘤细胞内IRF-1的转录。结论:姜黄素能抑制肿瘤细胞内IDO的表达。
- 张坤水李国成何玉文衣艳梅廖仕林王震杜军
- 关键词：姜黄素3-双加氧酶
- 啮齿类小鼠γ-干扰素原核表达、纯化及功能鉴定
- 2008年
- 目的:构建γ-干扰素的高效原核表达载体,进行γ-干扰素表达、纯化和鉴定,并探索优化啮齿类γ-干扰素的制备工艺。方法:用RT-PCR技术,从ConA活化的小鼠脾细胞中扩增出mIFN-γcDNA,与原核表达载体pET30a(+)重组,表达和纯化重组蛋白His6-mIFN-γ,并用Western Blot检测该重组蛋白的生物学活性。结果:构建了啮齿类γ-干扰素的高效原核表达载体,并实现了γ-干扰素的可溶性表达,且验证该γ-干扰素具有生物学活性。结论:成功优化了生产干扰素的工艺,为国内外进行γ-干扰素研究奠定基础。
- 刘小会陈卓佳杜军
- 关键词：Γ-干扰素原核表达纯化
- 口服吲哚胺特异抑制剂1-MT治疗Lewis移植性肿瘤的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨吲哚胺(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)在Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)移植性肿瘤小鼠的肿瘤组织和肿瘤引流淋巴结(tumor draining lymph nodes,TDLNs)内的表达情况,观察IDO特异性抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl tryptophan,1-MT)对LLC移植性肿瘤小鼠的防治作用。方法采用Western blot和免疫组化技术,分析IDO在移植性肿瘤小鼠肿瘤组织和TDLNs中的表达情况;实验分PBS对照组和1-MT治疗组,采用直接观察法与LDH释放试验检测1-MT对移植性肿瘤的发生、发展以及荷瘤宿主特异性细胞毒淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)反应的影响作用。结果在LLC移植性肿瘤小鼠体内,主要是由肿瘤组织和TDLNs内的单核细胞表达IDO;实验组与PBS对照组比较,肿瘤的发生与发展延迟(P<0.05);荷瘤宿主特异性CTL反应增强(P<0.05)。结论口服1-MT可以通过特异性抑制IDO活性延迟移植性LLC的发生和发展。
- 欧雪玲梁伟英杜军伍新尧
- 关键词：吲哚胺1-甲基色氨酸LEWIS肺癌细胞毒淋巴细胞
- 人吲哚胺2,3-双加氧酶多克隆抗体的制备被引量：1
- 2007年
- 背景与目的:吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)是一种哺乳动物细胞质中的血红素蛋白,是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径代谢的限速酶。它的表达不仅能抑制病原微生物的生长,还能抑制T细胞的应答,从而介导肿瘤免疫耐受。本研究的目的是表达和纯化His-hIDO融合蛋白,制备兔抗人IDO多克隆抗体,并用此抗体检测IDO在肿瘤细胞中的表达。方法:将编码人IDO全长cDNA克隆入pET30a(+),测序鉴定表达载体pET30a(+)-hIDO,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白His-hIDO;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人IDO多克隆抗体;用Western blot检测该多克隆抗体与重组蛋白His-hIDO的反应性,并用该抗体分析表皮癌细胞A431和肝癌细胞HepG2经IFN-γ诱导前后的IDO表达情况。结果:His-hIDO融合蛋白可与抗His多克隆抗体特异性结合;兔抗人IDO多克隆抗体的效价高,特异性好,能检测肿瘤细胞经IFN-γ诱导后的IDO的表达。结论:兔抗人IDO多克隆抗体能够有效地识别体外表达的IDO蛋白,为研究IDO在肿瘤免疫耐受中的作用提供有力工具。
- 谢白露刘鹏欧雪玲杜军
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶多克隆抗体免疫印迹
- 小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β和Ret蛋白融合基因的克隆、表达与纯化
- 2006年
- 目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β(murinemacrophageinflammatoryprotein1β,mMIP-1β)与原癌基因RET的融合基因并构建融合基因mMIP-RET的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。方法用RT-PCR方法分别扩增mMIP1β和RET的基因片段,利用分子克隆的方法将这两个片段用铰链GGIPG连接,并克隆到表达载体pET22b中。双酶切且测序正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达pET22bmMIP1β-RET/His融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后,ProBondResin进行亲和层析纯化,然后纯化产物进行复性及超滤浓缩。结果成功克隆mMIP1β和RET基因片段;成功地构建了pET22bmMIP1β-RET/His融合蛋白原核表达载体,在大肠杆菌中获得表达,并对表达产物进行了纯化,和Westernblot鉴定。结论成功制备高纯度mMIP1β-Ret/His融合蛋白,为进一步研究修饰的肿瘤抗原的生物学功能奠定了基础。
- 欧雪玲杜军何玉文曾军伍新尧
- 关键词：基因克隆融合蛋白纯化
