安徽省高校省级自然科学研究项目(2005JK257)
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
- 相关作者：秦宜德董华胜顾芳周艳江良梁更多>>
- 相关机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乳源抗菌-免疫调节融合蛋白原核表达和纯化被引量：3
- 2008年
- 目的构建乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与免疫调节肽(PGPIPN)融合肽表达质粒,并在大肠杆菌BL21中表达及纯化。方法采用重叠延伸PCR技术获得融合肽基因片段,并构建到原核表达载体pGEX-KG中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。用Glutathione Sepharose4B亲和层析方法纯化融合蛋白。结果成功构建原核表达质粒pGEX-KG-FP,并在大肠杆菌BL21中诱导其高表达。SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗GST单克隆抗体所识别的融合蛋白分子量与理论值相近。经Glutathione Sepharose4B纯化后,得到较纯的GST-FP融合蛋白。结论构建了原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该融合蛋白。
- 江良梁秦宜德周艳王超刘滋康
- 关键词：大肠杆菌基因表达重组融合蛋白
- β-CM-7对MCF-7、SKOV_3和SK-N-SH肿瘤细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2008年
- 目的探讨β-酪啡肽-7（β-CM-7）在体外对人乳腺癌细胞（MCF-7）、人卵巢癌细胞（SKOV3）和人神经母细胞瘤细胞（SK—N—SH）增殖和凋亡的影响。方法用MTT测定法观察β-CM-7在体外对MCF-7、SKOV3、SK—N—SH细胞增殖的影响。用流式细胞仪测定β-CM-7在体外对MCF-7和SKOV3细胞凋亡的影响。结果β-CM-7作用于MCF-7细胞24和48h，对其增殖影响不明显（P〉0．05）。2．5×10^-6 -2．5×10^-2g／L的β-CM-7作用72h，能抑制MCF-7细胞增殖（P〈0．05或P〈0．01），抑制率为17．50％～32．08％。β-CM-7作用MCF-7细胞72h，在2．5×10^-7～2．5×10^-2g／L剂量下，诱导肿瘤细胞的凋亡（P〈0．05或P〈0．01），凋亡率为9．23％～29．41％，而在作用48h后，仅在2．5×10^-3g／L的高浓度下具有诱导肿瘤细胞的凋亡作用，凋亡率为10．12％。β-CM-7作用于SKOV3细胞24～72h，只有在高剂量（2．5×10^-2g／L和／或2．5×10^-3g／L）时，抑制肿瘤细胞增殖（P〈0．05），抑制率为10．50％～19．44％。β-CM-7作用SKOV、细胞48h和72h，在2．5×10^-3～2．5×10^-2g／L高剂量下能诱导肿瘤细胞的凋亡（P〈0．05或P〈0．01），凋亡率为8．72％～17．83％。β-CM-7对SK—N—SH肿瘤细胞增殖影响无显著性（P〉0．05）。结论β-CM-7能够抑制MCF-7和SKOV3细胞增殖，诱导细胞凋亡，作用结果与其剂量和作用时间有关。β-CM-7对SK—N—SH细胞的增殖无明显影响。
- 周艳秦宜德董华胜顾芳
- 关键词：内啡肽类细胞分裂
- 乳源免疫调节肽具有促进体内外淋巴细胞转化的作用被引量：14
- 2007年
- 目的研究乳源免疫调节肽（PGPIPN）对机体外周淋巴细胞转化的影响及其机制。方法试验分体内和体外两系列实验。体内实验，取40日龄SD大鼠42只和60只18～22g昆明小鼠作为实验动物（大鼠和小鼠均♀♂各半）。用生理盐水预饲1wk后，大鼠和小鼠均随机分为3组（大鼠每组14只，小鼠每组20只，每组♀♂相等并分笼饲养）即对照组、PGPIPN 2．5×10^-3g·L^-1量组和PGPIPN2．5×10^-2g·L^-1剂量组，它们被分别灌喂生理盐水、2．5×10^-3和2．5×10^-2g·L^-1乳源免疫调节肽，隔天灌喂1次，大鼠每次3ml，持续30d，小鼠每次1ml，持续14d。饲养结束后，检测对照组和两剂量组间淋巴细胞转化的差别。体外实验，用上述对照组动物血液，将酪蛋白1h、2h酶解液、2．5×10^-3、2．5×10^-2g·L^-1乳源免疫调节肽分别加入淋巴细胞培养液，以酪蛋白和生理盐水为对照，测定乳源免疫调节肽对淋巴细胞转化的直接影响。结果体内实验，饲喂乳源免疫调节肽能明显提高淋巴细胞转化的刺激指数，其中大鼠的PG—PIPN2．5×10^-2g·L^-1剂量组以及小鼠的PGPIPN2．5×10^-3、2．5×10^-2g·L^-1剂量组均高于各自的对照组（P〈0．05）。体外实验，不论大鼠和小鼠，酪蛋白、酪蛋白1h酶解液、酪蛋白2h酶解液、2．5×10^-3g·L^-1、2．5×10^-2g·L^-1乳源免疫调节肽均能提高淋巴细胞转化的刺激指数，幅度按上述排列逐渐增大，其中2．5×10^-2g·L^-1乳源免疫调节肽组高于各自的对照组（P〈0．05），大鼠的2．5×10^-2g·L^-1免疫调节肽组也高于酪蛋白组（P〈0．05），但酪蛋白组与对照组相比，差异较小。体内外实验均存在剂量依赖关系。结论免疫调节肽在体内外均能促进外周淋巴细胞的转化，而且有剂量依赖关系。
- 董华胜秦宜德李素萍袁斌张伟顾芳殷汉琴
- 关键词：酪蛋白免疫调节肽淋巴细胞转化
- 饲喂硝酸镧对大鼠生长及肝脏中几种酶活性的影响被引量：3
- 2007年
- [目的]探讨硝酸镧对大鼠生长及其肝脏中谷丙转氨酶(GPT),谷草转氨酶(GOT),碱性磷酸酶(AKP),γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性的影响。[方法]实验分为短期实验和长期实验,每期实验分为对照组和3个不同剂量组(0.1 mg/kg、2 mg/kg、20 mg/kg体重),灌喂硝酸镧,记录其体重和采食量变化。实验结束后,分别测定其肝匀浆中GPT、GOT、AKP、γ-GT活性。[结果]短期实验中,大鼠采食量与对照组相比变化不大,其增重率分别提高了11.33%、5.96%和2.14%,但均未达显著水平(P﹥0.05)。长期实验中,0.1 mg/kg和2 mg/kg组的大鼠,其日采食量与对照组相比变化不大,大鼠增重率分别提高了7.81%和9.94%,而20 mg/kg组大鼠采食量和增重率均降低。GPT酶活性在短期均表现出"低促-高抑"的效应;长期高浓度的镧降低GPT的活性。硝酸镧对GOT活性的影响主要表现在低剂量上,短期降低活性,长期有明显的增强作用。无论短期和长期,硝酸镧能提高AKP活性。γ-G活性则无显著变化。[结论]镧能影响大鼠的生长,影响肝脏GPT、GOT、AKP的活性,其结果与镧的剂量及灌喂长短有关,某些酶表现出低剂量促进,高剂量降低的hormesis效应。
- 江良梁秦宜德陈程黄潇潇郑鹏燕
- 关键词：镧肝脏酶活性
