北京市教育委员会科技发展计划(KZ201110005003)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：北京工业大学中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：北京市教育委员会科技发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HPV18E5与EGFP融合基因真核载体的构建及表达
- 2015年
- 目的 构建人乳头瘤病毒18型E5与EGFP融合基因真核表达载体,鉴定E5基因在BALB/c 3T3细胞中的表达.方法 用PCR方法扩增得到HPV18E5及EGFP基因,通过酶切、连接、转化构建pSecTag-HPV 18 E5-EGFP融合基因真核表达载体.通过脂质体介导的方法将重组质粒转染BALB/c 3T3细胞,用RT-PCR方法检测其表达,荧光显微镜下观察目的基因的表达.结果 成功构建pSecTag-HPV18E5-EGFP融合基因真核表达载体,RT-PCR结果显示HPV18E5基因可以在BALB/c3T3细胞中正常转录,荧光显微镜下观察到荧光的存在.结论 pSecTag-HPV 18 E5-EGFP融合基因真核表达载体构建成功,重组质粒可以在BALB/c 3T3细胞内表达,重组质粒的构建为进一步研究E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了基础.
- 李凡李劲涛汪杨俊琦刘楚怡钟儒刚曾毅
- 关键词：基因
- 两种检测多环芳烃致癌性细胞转化实验方法的研究
- 2012年
- 目的比较BALB／c—E6E7细胞（含HPV16 E6E7基因的BALB／c3T3细胞）转化实验与BALB／c3T3细胞转化实验对三种多环芳烃致癌性的评价能力。方法应用已优化的BALB／c-E6E7细胞转化实验与Ⅱ阶段BALB／c3T3细胞转化实验检测三种多环芳烃的致癌性和促癌性。结果两种细胞转化实验对三种多环芳烃致癌性和促癌性的评价结果一致，且符合IARC对其致癌性的分类标准。BALB／c—E6E7细胞可形成更多的转化灶，转化频率约为BALB／c 3T3细胞的2—10倍，该细胞转化实验具有更高的敏感性并可有效缩短实验时间。结论BALB—E6E7细胞转化实验是一种更为敏感和高效的评价多环芳烃致癌性和促癌性的方法，有助于环境致癌物的风险评估。
- 武双李劲涛钟儒刚曾毅
- 关键词：细胞系致癌性试验细胞转化病毒
- HPV18 E5蛋白稳定表达株的筛选及对细胞增殖和周期的影响
- 2015年
- 本研究筛选能稳定表达HPV18E5蛋白的细胞株,并检测HPV18E5蛋白对细胞增殖及周期的影响。通过PCR方法扩增得到HPV18E5基因,经酶切和连接构建含His标签的pSecTag-HPV18E5真核表达质粒。运用脂质体介导的方法将重组质粒转染Balb/c3T3细胞,并用含有博来霉素的培养基筛选阳性细胞株。利用Western blot和免疫酶法鉴定HPV18E5在细胞中的表达。运用CCK-8法、流式细胞术检测HPV18E5对细胞增殖及细胞周期的影响。结果显示pSecTag-HPV18E5真核表达质粒构建成功;重组质粒转染Balb/c3T3细胞后,经400μg/mL博来霉素筛选21d,得到稳定表达HPV18E5蛋白的细胞株;与对照组相比,HPV18E5稳定表达细胞株的细胞增殖能力明显增强,细胞周期中S期的比值明显增加。研究表明HPV18E5对细胞增殖及细胞周期有影响。本结果为进一步深入研究HPV18E5蛋白的生物学特性及致癌作用奠定了基础。
- 李凡李劲涛刘楚怡钟儒刚曾毅
- 关键词：人乳头瘤病毒18型细胞增殖细胞周期
- 人乳头状瘤病毒16型E6E7基因与MCA、TPA协同诱导细胞恶性转化的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型E6E7基因与化学致癌物MCA、TPA对Balb/c 3T3细胞恶性转化的协同作用。方法构建含HPV16 E6E7基因的重组质粒,用其转染Balb/c 3T3细胞。采用RT-PCR和Westernblot技术检测HPV16 E6E7基因和蛋白表达;应用细胞转化实验研究由MCA和TPA诱导的细胞恶性转化;并检验转化细胞在软琼脂上形成集落的能力及对SCID小鼠的致瘤能力。结果转染HPV16 E6E7基因的细胞比未转染细胞形成更多的转化灶,转化灶个数增加4～25倍,且实验时间明显缩短;其转化细胞在软琼脂上形成集落的能力及对SCID小鼠的致瘤能力更强。结论 HPV16 E6E7基因与MCA、TPA可协同诱导Balb/c 3T3细胞恶性转化。
- 武双李劲涛钟儒刚曾毅
- 关键词：E6E7MCATPA
