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上海市教育委员会重点学科基金(S30201): 作品数：28 被引量：98H指数：6; 相关作者：丁文龙朱浩王文进刘丽曾凡一更多>>; 相关机构：上海交通大学上海健康医学院新疆农业大学更多>>; 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金上海市自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>

人羊水祖细胞的分离和基因修饰被引量：1: 2014年; 探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。; 杨辰敏范书玥唐汇祥巩芷娟龚秀丽龚秀丽任兆瑞; 关键词：血友病B 人凝血因子IX 基因治疗

如何高效制备生殖系传递的嵌合体小鼠被引量：1: 2012年; 目前,嵌合体技术已成为胚胎干细胞(ES细胞)和诱导多能性干细胞(iPS细胞)研究不可或缺的一部分,嵌合体小鼠模型主要用于基因功能、调控机制、致病机理等各方面的研究。要安全可靠地进行ES细胞和iPS细胞的各种应用性研究,首先需要验证细胞在体内向各种组织定向分化的能力,特别是生殖系传递的能力。而高效制备多能性干细胞生殖系传递的嵌合体小鼠,需要在分子水平、细胞水平、动物个体水平以及制备方法等各方面全面综合地分析考虑,才能达到实验设计的最优化。制备嵌合体小鼠主要有注射法和聚集法2种方法,各有利弊,在整个制备过程中,需要考虑不同发育阶段以及不同小鼠品系胚胎的分化潜能、选用远交系和杂交系的胚胎作为受体,同时要考虑ES细胞的遗传背景,选择低代次的远交系和杂交系的ES细胞或者iPS细胞,以及优选KSR培养体系。对于操作者,需根据实际情况,全方位地综合考虑,从而制定出合理的操作方案。; 杨冠恒施皖生曾凡一; 关键词：嵌合体

妊娠妇女血清亮氨酸氨基肽酶的水平变化及其临床意义被引量：4: 2017年; 目的探讨妊娠妇女血清亮氨酸氨基肽酶(LAP)的水平变化及其临床意义。方法选取120例正常妊娠正常分娩的妇女作为正常妊娠组,根据其怀孕周数将其分为正常早期组、正常中期组与正常晚期组各40例;以28例患有妊娠期高血压的妇女作为妊高征组、26例出现早产的妇女为早产组、30例健康未妊娠妇女作为未妊娠组,检测各组妇女血清中的LAP水平。结果未妊娠组、早产组、正常妊娠组、妊高征组的血清LAP水平依次升高(P<0.05)。正常晚期组、正常中期组、正常早期组妇女的血清LAP水平依次降低(P<0.05),正常妊娠妇女的血清LAP水平与孕周呈正相关性(P<0.05)。结论妊娠妇女体内血清中LAP水平的变化存在着一定的规律,监测LAP水平对于评估妊娠期高血压疾病及早产的发生具有重要价值。; 胡晓英柳洲吴建发舒志明孙贻娟冯云杨辰敏; 关键词：妊娠亮氨酸氨基肽酶血清妊娠期高血压早产

Directed hepatic differentiation from embryonic stem cells: 2011年; The liver is the largest internal organ in mammals,and is important for the maintenance of normal physiological functions of other tissues and organs.Hepatitis,cirrhosis,liver cancer and other chronic liver diseases are serious threats to human health,and these problems are compounded by a scarcity of liver donors for transplantation therapies.Directed differentiation of embryonic stem cells to liver cells is a promising strategy for obtaining hepatocytes that can be used for cell transplantation.In vitro hepatocyte differentiation of embryonic stem cells requires a profound understanding of normal development during embryonic hepatogenesis.Here we provide a simple description of hepatogenesis in vivo and discuss directed differentiation of embryonic stem cells into hepatocytes in vitro.; Xuesong ChenFanyi Zeng

Y染色体AZFc微缺失规律的研究被引量：2: 2012年; 目的:探讨中国汉族人群Y染色体AZFc微缺失的规律。方法:采用9个STS位点(sY84、sY86、sY127、sY134、sY152、sY145、sY255、sY254、sY157)的多重PCR,排除sY84、sY86、sY127、sY134缺失的患者,共有194例严重少弱精子症或非梗阻性无精子症汉族男性发生AZFc微缺失;对其中192例sY254、sY255、sY157缺失的患者,再通过sY1191、sY1197、sY1054、sY1125及sY1206 STS位点检测,分析其缺失规律。结果:192例sY254、sY255、sY157缺失患者存在5种缺失模式,其中常见的为sY1197(+)、sY1191(-)、sY1206(-)、sY1054(-)、sY1125(+),占54.17%(104/192);sY1197(+)、sY1191(+)、sY1206(-)、sY1054(-)、sY1125(+),占28.12%(54/192);sY1197(+)、sY1191(-)、sY1206(-)、sY1054(+)、sY1125(+),占14.58%(28/192)。70.83%的AZFc微缺失患者,近端缺失区域发生在sY1197和sY1191之间(属于b2区域);82.29%的AZFc微缺失患者,远端缺失区域发生在sY1054和sY1125之间(属于b4区域)。结论:中国汉族人群AZFc微缺失有5种缺失模式,AZFc微缺失近、远端缺失位点基本集中于复制子b2和b4。; 吴青王磊光吴斌邱毅徐彦刘淼王鹏袁瑶施惠娟; 关键词：Y染色体微缺失

单胺氧化酶抑制剂在临床方面的应用被引量：14: 2014年; 单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)是人体内天然存在的一种酶,催化单胺类物质氧化脱氨反应的酶。人体内含有两种单胺氧化酶:单胺氧化酶A和单胺氧化酶B。单胺氧化酶A主要分布在儿茶酚胺能神经元中;单胺氧化酶B主要分布在5-羟色胺能神经元、组胺能神经元和神经胶质细胞中,这两种亚型都均可以使单胺类神经递质失活。而单胺氧化酶抑制剂则能够通过抑制单胺氧化酶的对单胺类物质的氧化活性,从而达到减轻或者消除由各种原因引起的单胺类物质减少或单胺氧化酶活性过高导致的疾病。本文主要总结了近几年单胺氧化酶抑制剂在临床上用于治疗帕金森病、抑郁症和幽门螺旋杆菌方面的最新进展。; 孙楷孙凡朱亮; 关键词：单胺氧化酶帕金森抑郁症幽门螺旋杆菌

高糖对培养大鼠施万细胞生长、凋亡的影响及其机制探讨被引量：1: 2009年; 目的研究高糖对大鼠施万细胞（SCs）生长及凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法将培养的SCs分别用含不同浓度葡萄糖的培养液孵育72h,四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞活力,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡,Western blotting检测Bcl-2及Bax的表达。结果高浓度葡萄糖（60mmol/L、90mmol/L）组SCs活力降低,细胞凋亡率增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降及凋亡蛋白Bax表达升高。结论高糖抑制SCs生长,诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2表达下降及Bax表达升高有关。; 乐嫣朱浩王文进丁文龙; 关键词：高糖施万细胞 BAX TUNEL 免疫印迹法

piggyBac转座子在哺乳动物中的应用被引量：1: 2013年; 转座子(transposon)是存在于生物体基因组中的可移动的DNA片段,能够影响基因的结构和功能,广泛存在于生物演化过程中。转座子通过切离和粘贴机制介导外源基因的插入,是研究基因功能,制备转基因动物及基因治疗的优良载体。目前在哺乳动物中转座活性较高且研究最多的是"睡美人"转座子和piggyBac(PB)转座子。前者是目前临床前基因治疗研究中使用最为广泛的转座子,但存在剂量抑制效应和转座效率低等缺陷。而PB转座子可克服剂量抑制效应,且转座高效,转基因载量大,因此在哺乳动物中的应用越来越广泛。作者就PB转座子的作用机制、影响因素及在哺乳动物中的应用现状等进行报道。; 杨冠恒曾凡一; 关键词：PIGGYBAC 转座子转基因

IkB激酶在糖尿病性大鼠ED中的作用: 2010年; 目的探讨IkB激酶(Ik kinases,IKK)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)性阴茎勃起功能障碍(erectiledy sfunction,ED)中的可能作用。方法注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数,取大鼠阴茎,Western Blot方法检测IKK蛋白量的变化,ABC免疫组织化学方法检测阴茎IKK的分布和表达。结果 Dm大鼠的阴茎勃起次数明显低于对照组(P<0.01),随病程延长降低;Western Blotting结果显示,DM组阴茎IKK蛋白量明显高于正常对照组(P<0.01),12周DM组明显高于8周DM组(P<0.05);IKK主要分布于阴茎血管、阴茎背神经,与对照组比较,DM组平均光密度值明显上调并随病程延长而上调。结论 DM大鼠阴茎IKK蛋白量的上调可能通过作用于阴茎内的血管、神经参与了糖尿病性ED发病。; 刘丽李锋李志宏王文进朱浩丁文龙; 关键词：糖尿病阴茎勃起功能障碍

糖尿病大鼠阴茎的氧化应激与阴茎勃起功能障碍的关系被引量：1: 2010年; 目的探讨氧化应激在糖尿病性阴茎勃起功能障碍(ED)中的作用。方法注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数;取大鼠阴茎,测定阴茎丙二醛水平、总抗氧化能力,免疫印迹法检测阴茎核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白量的变化。结果糖尿病大鼠的阴茎勃起次数明显低于对照组,并随病程延长降低;糖尿病大鼠阴茎丙二醛水平明显高于对照组,总抗氧化能力水平明显低于对照组;与对照组比较,糖尿病组大鼠阴茎内Nrf2蛋白量随病程延长而降低。结论糖尿病性阴茎勃起功能障碍与阴茎氧化应激水平升高相关。; 刘丽王文进朱浩李志宏丁文龙; 关键词：糖尿病阴茎勃起功能障碍总抗氧化能力核因子E2相关因子2 免疫印迹法

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