苏州市科技局社会发展基金(SSY0628)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 相关作者：邢春根何腾飞吴永友陈正荣赵奎更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第二医院浙江省宁波市第一医院宁波市第一医院更多>>
- 发文基金：苏州市科技局社会发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VEGF-C siRNA抑制人结肠腺癌细胞株VEGF-C表达
- 2009年
- 目的构建Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP腺病毒载体,观察腺病毒介导的VEGF-CsiRNA对人结肠腺癌LOVO细胞血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的影响。方法设计并合成VEGF-CmRNAsiRNA,构建穿梭质粒pDC316-VEGF-CsiRNA-EGFP-U6,与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP-U6。转染人结肠腺癌LOVO细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot法分别从mRNA和蛋白质水平检测其对VEGF-C表达的抑制效果。结果成功构建重组腺病毒Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP-U6,纯化后获得7.9×109IU/ml滴度的病毒。转染LOVO细胞48h后,VEGF-CmRNA表达下降为对照组的(30.7±1.2)%(P<0.05);VEGF-C蛋白的表达也明显受到抑制,转染72h后下降为对照组的(47.8±2.2)%(P<0.05)。结论腺病毒介导的VEGF-CRNA干扰可显著抑制人结肠腺癌细胞的VEGF-C表达。
- 邢春根何腾飞陈正荣吕孝东吴永友危少华赵奎
- 关键词：RNA干扰腺病毒载体血管内皮细胞生长因子-C
- VEGF-C干扰对结肠癌血管和淋巴管影响的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的 探讨人结肠癌BALB／c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射携带VEGF—C小分子干扰RNA（siRNA）的腺病毒载体对VEGF—C表达、肿瘤生长及淋巴管生成的影响。方法裸鼠皮下注射Lovo细胞构建人结肠癌皮下移植瘤模型24只，随机分为4组，每组6只，以腺病毒、空病毒、裸siRNA及PBS分别进行瘤内原位注射干预．计算肿瘤体积变化．检测瘤内淋巴管和血管生成情况。结果与其他3组相比．腺病毒组肿瘤生长受到明显抑制（P〈0．05）。腺病毒组微血管密度（MVD）值为22．65±6．04，与其他3组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；腺病毒组微淋巴管密度（LVD）值为8．47±2．1，明显低于其他3组（P〈0．05）。结论瘤内注射携带VEGF—C siRNA的腺病毒载体可抑制人结肠癌裸鼠移植瘤模型中肿瘤的生长和淋巴管生成．而对肿瘤血管生长无明显影响。
- 马陈何腾飞邢春根陈晓岗叶钢方雷
- 关键词：结肠肿瘤血管内皮生长因子-CRNA干扰淋巴管生成
- 血管内皮生长因子-C干扰对人类结肠癌裸鼠移植瘤模型淋巴管生成的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP，探讨人类结肠癌BALB／c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP抑制血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达、结肠癌生长以及结肠癌淋巴管生成的效果。方法选择针对人类VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列，设计合成其相应的双链DNA，利用BamHI、HindⅢ双酶切插入pDC316-EGFP-U6载体后构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6，再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞，同源重组，酶切鉴定，包装扩增后得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6。裸鼠皮下注射LoVo细胞构建人类结肠癌皮下移植瘤模型24只，随机分为4组（每组6只）：以腺病毒、空病毒、裸siRNA以及PBS分别进行瘤内原位注射干预，计算肿瘤体积变化并绘制生长曲线，使用抗LYVE-1单抗和抗CD34单抗分别染色瘤内的血管和淋巴管，检测瘤内淋巴管和血管生成情况，计算微血管密度（MVD），微淋巴管密度（LVD）。结果腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组，腺病毒组与PBS对照组LVD分别为8．47±2．1，17．35±4．7（P〈0．05），腺病毒组与PBS对照组MVD分别为22．65±6．04，23．19±7．63（P〉0．05）。结论实验设计并合成的腺病毒载体介导的VEGF-C siRNA，在人类结肠癌裸鼠移植瘤模型中，瘤内注射腺病毒载体能显著抑制移植瘤的生长和肿瘤淋巴管生成，而对肿瘤血管生长无显著影响。
- 叶钢马陈何腾飞邢春根陈晓岗方雷
- 关键词：血管内皮生长因子C腺病毒载体RNA干扰淋巴管生成
- 人结肠癌VEGF-C表达及其与微淋巴管密度的相关性被引量：2
- 2009年
- 目的研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)在人结肠癌组织中的表达与微淋巴管密度(LVD)的相关性。方法采用免疫组化Envision二步法检测VEGF-C、人淋巴管内皮透明质酸酶受体-1(LYVE-1)在60例结肠癌、10例结肠腺瘤以及10例正常结肠组织中的表达情况,分析VEGF-C表达与LVD的关系。结果在结肠癌组织中,VEGF-C阳性表达率为53.33%;在正常结肠组织、结肠腺瘤组织中均未见明显VEGF-C阳性表达。VEGF-C表达主要位于肿瘤细胞浆中,呈棕黄色颗粒表现。结肠癌组织中LYVE-1标记的淋巴管阳性率为76.67%,LVD平均值为5.761±1.676,明显高于结肠腺瘤组织中的1.722±0.390(P<0.01)。VEGF-C与LVD呈明显的正相关(P<0.05)。结论结肠癌组织中VEGF-C阳性表达率明显增高;VEGF-C表达与LVD呈明显正相关。
- 邢春根魏锋陈正荣吕孝东吴永友危少华赵奎
- 关键词：结肠癌血管内皮生长因子-C微淋巴管密度
- 靶向人血管内皮细胞生长因子-C基因的siRNA腺病毒载体的构建
- 2010年
- 目的利用AdMax腺病毒系统构建人VEGF-C-siRNA腺病毒载体并在293细胞中扩增制备重组病毒。方法选择针对人VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,将其克隆入pDC316-EG-FP-U6载体中构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达。结果经限制性内切酶、PCR检测和GFP表达证实成功地构建了携带VEGF-C-siRNA的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论成功地构建了携带VEGF-C-siRNA片段的重组腺病毒载体,为进一步抗肿瘤淋巴管生成的研究奠定了基础。
- 何腾飞邢春根陈正荣呂孝东吴永友危少华赵奎
- 关键词：血管内皮细胞生长因子-C腺病毒载体RNA干扰淋巴管生成
