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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：2: 2011年; 本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一步多重RT-PCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化,从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物,并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测;并对田间及实验室样品进行符合率试验,对阳性样品进行重复性试验。与常规RT-PCR法进行比较,证明该方法比常规RT-PCR法敏感性提高了10倍;而且利用该方法可使检测时间大大缩短;特异性试验证实该方法无交叉反应;阳性和阴性样本的符合率均为100%;3次阳性样品重复性检测结果完全相同;稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上。本研究所建立的PRRSV一步多重RT-PCR检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好,不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断,而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值。; 吴锦艳田宏尚佑军陈妍魏衍全侯相民赵娜何建辉刘湘涛; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒

猪瘟病毒载量在猪体内各器官动态分布规律的研究: 本研究采用荧光PCR(FQ-PCR)方法对猪瘟病毒感染试验用猪进行了体内外的动态分布规律研究。参考GenBank中34条CSFV全基因组序列及多条BVDV、BDV全基因组序列,设计了一套CSFV特异的引物和探针;同时参考...; 刘俊王琴徐璐范学政周远诚; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG的制备: 2009年; 应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定。结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和Western-blot的鉴定显示该特异性抗体IgG具有很好的免疫原性,特异性强,仅与该病毒毒株的ORF5发生特异性结合。说明兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体具有良好的免疫原性和特异性,可与猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5特异性结合,可以作为诊断试剂和诊断试剂盒的一抗。; 陆英杰钱君娣何启盖马春全邓桦

用RT-PCR方法检测猪瘟细胞苗中污染牛病毒性腹泻病毒被引量：34: 2010年; 参考GenBank中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和猪瘟兔化弱毒病毒（HCLV）序列，设计和建立了一种PCR检测方法，通过试验证明，所建方法能够对HCLV和BVDV进行鉴别诊断；用此方法对23个批次的猪瘟细胞苗进行检测，发现有5批疫苗污染BVDV，均为BVDVI型，污染率为21．74％。测定序列与BVDVOregonC24V株（AF091605）的核苷酸相似性为83．2％～83．5％，与NADL株（M31182）的核苷酸相似性为86．4％～86．7％。; 范学政宁宜宝王琴徐璐沈青春; 关键词：BVDV CSFV RT-PCR方法

猪胸膜肺炎放线杆菌致病性生物Ⅰ型PCR诊断方法的建立被引量：2: 2010年; 根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）apxⅣ毒素基因序列的保守区域设计1对特异性引物，建立检测致病性APP1～12血清型标准菌株的PCR方法。在双盲试验中，血清1型（2株）、3型、5型和7型临床分离株与致病性APP1～12血清型标准菌株一样，均能扩增出预期大小为876bp的apxⅣ片段，可检出最低活菌数为2×10^2cfu·mL^-1，最低检出DNA含量为9pg·μL。检测疑似传染性胸膜肺炎感染猪的10份病变肺组织样品，阳性6份，与细菌分离鉴定结果一致。而副猪嗜血杆菌1～15型（缺失8型）、猪放线杆菌、猪源多杀性巴氏杆菌、猪霍乱沙门氏菌、奇异变形杆菌、猪源支气管败血波氏菌、猪丹毒杆菌的PCR检测结果都为阴性。结果表明：该PCR方法可用于致病性APP生物Ⅰ型的快速特异性检测和诊断。; 张志妮顾万军黄良宗朱军姚丰华朱国强; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 PCR

猪瘟病毒RT-LAMP快速诊断方法的建立: 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),是2000年才发明的一种新的核酸扩增方法,具有灵敏度高、特异性强、成本低等特点,适合基层、养殖户及进出口检疫等...; 陈蕾范学政王琴徐璐; 文献传递

猪瘟病毒RT-LAMP快速诊断方法的建立: 针对CSFV的保守区设计并筛选出一套RT-LAMP引物,以石门株为标准毒株,采用梯度稀释法对各反应要素进行优化,最终确定CSFV RT-LAMP的反应体系为:4mM镁离子浓度,0.8M甜菜碱,1.4mM dNTP mix...; 陈蕾范学政王琴徐璐赵启祖; 关键词：CSFV RT-LAMP; 文献传递

猪圆环病毒2型IgM抗体间接ELISA的建立被引量：3: 2011年; 猪圆环病毒2型（PCV2）是断奶仔猪多系统衰竭综合症的重要原发性病原,其感染的早期检测有助于及时采取防控措施。以重组衣壳蛋白（Cap蛋白）作为包被抗原,通过对反应条件的优化,建立了PCV2 IgM抗体间接ELISA,其最适抗原包被浓度为1.25μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,临界值为0.35。该检测方法与其他5种常见猪疫病阳性血清无交叉反应,特异性良好。批内、批间重复试验的变异系数均在2%-6%,重复性好。对100份临床样本的检测结果表明,该检测方法与国外同类试剂盒相比,敏感性为90.3%,特异性为92.8%,总符合率为92%。试验结果表明,所建立的PCV2 IgM间接ELISA特异性好和敏感性高,适用于PCV2感染早期的流行病学调查。; 原霖蔡林倪建强顾小雪张硕张淼洁王传彬遇秀玲翟新验田克恭; 关键词：猪圆环病毒2型 IGM抗体 CAP蛋白间接ELISA

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“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A12)