目的通过RNA干扰技术抑制宫颈癌SiHa细胞转录活化因子3(signal transduction and activators of transcription3,STAT3)基因的表达,观察细胞放射敏感性的变化。方法构建pSTAT3-siRNA真核表达质粒并转染宫颈癌SiHa细胞,RT-PCR及Western blot法分别检测STAT3基因mRNA及蛋白表达。采用6MV直线加速器分别以不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X线照射细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测细胞放射敏感性变化。结果与对照组细胞相比,pSTAT3-siRNA转染组细胞STAT3基因mRNA和蛋白水平表达均下降(P<0.05)。细胞经X线照射后,与对照组比较,pSTAT3-siRNA转染组细胞凋亡率升高,SF2值降低(P<0.05)。结论 pSTAT3-siRNA真核表达载体能够抑制宫颈癌SiHa细胞STAT3基因表达,增强其对放射线损伤的敏感性。
【目的】探讨信号转导因子与转录激活因子3(signal transduction and activators of transcription 3,STAT3)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体对宫颈癌HeLa细胞化疗药物顺铂敏感性的作用。【方法】构建针对STAT3基因的shRNA干扰质粒和阴性对照质粒,同时设空白对照组。采用Lipofectimane 2000转染宫颈癌HeLa细胞,RT-PCR及免疫蛋白印迹法分别检测STAT3基因的mRNA及蛋白表达水平。细胞经不同浓度顺铂(DDP)作用后,流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞生长抑制率并计算DDP的50%抑制浓度(IC50)。【结果】与各对照组细胞相比,转染STAT3基因shRNA真核表达载体的HeLa细胞,STAT3基因在mRNA和蛋白水平表达均下降,凋亡率均明显增加,细胞对DDP的IC50值明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】针对STAT3基因的shRNA真核表达载体有效地抑制宫颈癌HeLa细胞STAT3基因表达,增强其对化疗药物DDP的敏感性。
