国家自然科学基金(30670905)
- 作品数：10 被引量：39H指数：4
- 相关作者：陈子兴岑建农姚利沈宏杰孙艳花更多>>
- 相关机构：苏州大学淮安市第一人民医院南昌大学第二附属医院更多>>
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- 中枢神经系统白血病小鼠白血病细胞对血脑屏障的破坏作用被引量：13
- 2011年
- 目的通过建立中枢神经系统白血病（CNSL）小鼠模型及体外血脑屏障模型，观察白血病细胞对血脑屏障的影响，探讨白血病细胞浸润中枢神经系统的发病机制。方法对10只BALB／c裸鼠进行切脾、环磷酰胺腹腔注射、全身亚致死剂量照射等预处理，经尾静脉注射含1．2×10^3个SHI-1细胞的0．2mlPBS，观察小鼠的活动、饮食等一般状态，应用RT—PCR、组织病理切片、骨髓细胞涂片等检测裸鼠脑组织中SHI-1细胞的浸润生长情况，用激光共聚焦显微镜观察紧密连接蛋白ZO-1、纤维蛋白原的表达。将人脑微血管内皮细胞（BMVEC）接种于铺有Matrigel胶的Transwell小室系统中建立体外血脑屏障模型。将HL-60、SHI-1细胞接种于血脑屏障模型的Transwell小室上层，在倒置显微镜下观察BMVEC的形态变化，采用激光共聚焦显微镜观察紧密连接蛋白ZO-1的表达，计算白血病细胞的穿膜率。结果①接种SHI-1细胞后30～35d有50％的小鼠先后发生CNSL，出现肢体瘫痪、失明等症状，骨髓及脑组织有不同程度的白血病细胞浸润；骨髓和脑组织中同时检测到人MLL-AF6融合基因的转录；在被浸润的脑组织中检测到纤维蛋白原的渗出及ZO-1表达降低。②与HL-60和SHI-1细胞共培养后，BMVEC失去紧密相连的致密单层结构，细胞呈分散、单个生长，ZO-1表达明显下调，SHI-1细胞对BMVEC的形态改变较HL-60明显，SHI-1细胞穿透率为（40．33±1．53）％，较HL-60细胞[（11．83±1．44）％]明显增高（P〈0．05）。结论白血病细胞通过破坏血脑屏障而浸润中枢神经系统是CNSL的发病机制之一。
- 冯洒然陈子兴岑建农沈宏杰王元元姚利
- 关键词：HL-60细胞SHI-1细胞血脑屏障细胞浸润中枢神经系统
- Up-regulation of TIMP-2 expression promotes SHI-1 leukemic cells proliferation and infiltration in immunodeficiency mice被引量：1
- 2014年
- Li ZhenjiangChen ZixingCen JiannongHe JunQiu QiaochengXue Yongquan
- 关键词：白血病细胞系逆转录病毒载体
- TIMP-2基因对白血病细胞系SHI-1细胞在裸鼠体内生长的调节作用被引量：2
- 2008年
- 目的研究高表达组织型基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）基因对人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1细胞在裸鼠体内浸润能力的影响。方法①经尾静脉将转染TIMP-2基因的SHI-1（SHI-1-TIMP-2）细胞与转染空载体MSCV的SHI-1（SHI-1-MSCV）细胞1×10^7分别接种于经切脾、环磷酰胺腹腔注射和全身亚致死量照射等预处理的6周龄裸鼠体内。接种后第30天各组处死8只裸鼠，其余8只观察生存期，通过病理学检测及CIM5抗体免疫组织化学染色检测SHI-1细胞在裸鼠体内各脏器中浸润情况，并对中枢神经系统白血病（CNSL）进行分级。②将5×10^6个SHI-1-TIMP-2和SHI-1-MSCV细胞分别接种于未经预处理的6周龄裸鼠前肢腋侧皮下，各组10只。分别于第23及30天各处死5只，测量肿瘤体积，并行TIMP-2及vWF抗体免疫组化染色，观察TIMP-2蛋白表达及微血管密度。结果经尾静脉接种SHI-1-TIMP-2细胞的裸鼠生存期较接种SHI-1-MSCV细胞者明显缩短，体内各脏器中成瘤增加，苏木精-伊红染色及CIM5抗体免疫组化染色显示脏器中白血病细胞浸润增加，CNSL发生程度更严重。接种于裸鼠皮下时，尽管SHI-1-TIMP-2细胞成瘤时间提前，其在第23及30天时所形成的瘤块体积较SHI-1-MSCV细胞组显著减少，并出现中央坏死区，免疫组化染色示瘤块TIMP-2蛋白表达增加，而微血管密度减少。结论TIMP-2基因具有多样性，在肿瘤细胞浸润及其转移中似有双相调节作用。
- 李振江陈子兴岑建农何军邱桥成姚利
- 关键词：白血病白血病浸润基因TIMP-2
- 黏附分子CD44表达对白血病细胞黏附、迁移及浸润的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨黏附分子CD44表达对白血病细胞黏附、迁移、浸润的影响。方法选择对数生长期的白血病细胞株SHI-1、THP-1、NB4、K562细胞，采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测各种白血病细胞株CD44mRNA和蛋白的相对表达水平，并将各株白血病细胞分为对照组（加入同种同型IgG）和实验组（加入CD44单抗），然后观察白血病细胞与人静脉内皮细胞系ECV304细胞的黏附率；用包被ECV304细胞的Transwell小室培养法观察细胞迁移率；用包被人工基质膜Matrigel的Transwell小室培养法观察白血病细胞穿过人工基质膜的浸润能力。结果SHI．1、THP-1、NB4细胞均表达CD44mRNA和蛋白，而K562细胞CD44mRNA和蛋白表达量少甚至不表达；SHI-1、THP-1、NB4细胞CD44mRNA的相对表达水平分别为0．0731±0．0072、0．0827±0．0151、0．1473-t-O．0365，与K562细胞（0．0002±0．0000）相比，差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。黏附实验结果显示：实验组SHI-1、THP-1、NB4细胞黏附率均较对照组下降（分别为72．78％、64．09％、57．42％），而实验组K562细胞黏附率为106．16％。迁移实验结果显示：对照组SHI-1、THP-1、NB4细胞迁移率分别为55％、29％、25％，实验组细胞迁移率下降（分别为32％、18％、12％），而两组中K562细胞无明显变化（均为2％）。浸润实验显示：对照组SHI-1、THP-1、NB4细胞穿过Matrigel的细胞率分别为24％、15％、13％，实验组均有所下降（分别为12％、8％、4％），而两组中K562细胞不能穿过。结论CD44抗原可能通过改变细胞的黏附、迁移及浸润能力，参与白血病细胞的髓外浸润过程。
- 孙艳花孙艳丽冉学红崔景英张洪玲陈子兴
- 关键词：白血病细胞黏附细胞迁移
- 110例成人中枢神经系统白血病患者临床分析被引量：8
- 2009年
- 中枢神经系统白血病（CNSL）是白血病髓外浸润（复发）的最常见形式，对患者的预后有重要影响。我院自2001年1月至2008年6月共收治成人白血病患者1572例，其中发生CNSL110例，现将其临床特点及预后报道如下。
- 孙艳花陈子兴吴伟林刘丹丹岑建农姚利王春玲沈宏杰
- 关键词：中枢神经系统白血病白血病患者成人髓外浸润预后
- 白血病细胞株分泌的基质金属蛋白酶在中枢神经系统白血病发病机制中的作用被引量：4
- 2016年
- 目的 观察白血病细胞分泌的基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9对脑微血管内皮细胞（BMVEC）紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5、occludin表达及对血脑屏障（BBB）通透性的影响,探讨MMP-2和MMP-9在中枢神经系统白血病（CNSL）发病机制中的作用.方法 ①实时定量PCR检测SHI-1、HL-60、U937细胞MMP-2、MMP-9基因的转录水平;明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-2和MMP-9蛋白表达;体外穿膜实验观察各白血病细胞株的侵袭能力.②将原代人BMVEC接种于铺有Matrigel胶和纤维黏连蛋白包被的Transwell小室系统中,建立体外BBB模型.将蛋白酶抑制剂GM6001处理或未处理的SHI-1、HL-60、U937细胞或MMP-2/MMP-9基因沉默的SHI-1细胞接种于BBB模型的Transwell小室上层与BMVEC共培养,倒置相差显微镜观察BMVEC的形态变化,激光共聚焦显微镜观察紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin的表达,计算白血病细胞的穿膜率.结果 ①SHI-1细胞表达较高转录水平的MMP-2和MMP-9及酶活性,且侵袭能力强于HL-60、U937细胞（P＜0.01）.②与HL-60、SHI-1和U937细胞共培养后,融合致密的BMVEC之间出现间隙、细胞呈单个生长,紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin的表达明显下调,各白血病细胞均不同程度地穿过体外BBB进入Transwell小室下层.其中SHI-1细胞对BMVEC的形态改变及3种紧密连接蛋白的下调最为明显,穿膜率最高.GM6001明显抑制白血病细胞分泌MMP-2和MMP-9,使BMVEC的形态有所恢复,同时上调ZO-1、claudin-5和occludin的表达,降低了BBB的通透性.③用siRNA分别沉默MMP-2和MMP-9基因后,SHI-1细胞分泌MMP-2和MMP-9被抑制,SHI-1细胞穿膜率较沉默前分别下降43.64％和57.30％（P＜0.01）,ZO-1、claudin-5和occludin表达上调.结论 白血病细胞株分泌的MMP-2和MMP-9能通过降解BMVEC紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin而破坏BBB.
- 冯洒然陈子兴岑建农沈宏杰王元元姚利
- 关键词：HL-60细胞U937细胞SHI-1细胞基质金属蛋白酶类
- 基质金属蛋白酶家族的表达对急性单核细胞白血病细胞体外侵袭力的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 研究基质金属蛋白酶家族（TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2）的表达对急性单核细胞白血病细胞体外侵袭力的影响.方法 以急性单核细胞白血病细胞株SHI-1细胞为研究对象,用定量PCR、Western blot法分别检测TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2 mRNA和蛋白表达,并以NB4、K562、THP-1等人类其他白血病细胞株细胞为对照,进行比较.构建TIMP-2逆转录病毒载体,转染SHI-1细胞,G418筛选,有限稀释法挑选出单克隆S1、S2、S3细胞.RNA干扰（RNAi）法干扰SHI-1细胞TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2表达.明胶酶谱法测定不同细胞和骨髓基质细胞（BMSC）共培养24 h后上清中MMP-2的表达,细胞侵袭实验测定SHI-1细胞侵袭人工基质膜的能力.结果 SHI-1细胞的TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2 mRNA表达和蛋白表达均显著高于其他细胞（P＜0.05）.SHI-1细胞和BMSC共培养上清中的MMP-2酶原和活化的MMP-2含量及细胞体外侵袭率均高于其他细胞（P＜0.05）.单克隆S1、S2、S3细胞TIMP-2 mRNA表达水平分别是SHI-1细胞的3.0倍、2.0倍和1.5倍（P＜0.05）,蛋白表达水平分别上调2.6倍、1.5倍和1.3倍（P＜0.01）,体外侵袭率增加1.5～2.5倍（P＜0.05）,活化的MMP-2含量增加1.5～3.0倍（P＜0.01）.RNA干扰基因沉默效率为85%～98%.SHI-1细胞TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP表达沉默后,细胞侵袭率分别下降60%～70%、50%～60%、40%～50%（P＜0.05）.RNA干扰后的细胞培养上清中检测不到活化的MMP-2.结论 SHI-1细胞在mRNA水平和蛋白水平均高表达TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2 mRNA,SHI-1细胞和BMSC共培养后这些分子的高表达促进MMP-2的活化,增强细胞的体外侵袭力.TIMP-2表达增加1.5～2.5倍对SHI-1细胞MMP-2的活化和细胞的体外侵袭力发挥的是增强作用,而不是抑制作用.
- 王春玲陈子兴李振江岑建农
- 关键词：白血病浸润基质金属蛋白酶类
- 上调SHI-1细胞金属蛋白酶组织抑制剂-2的表达对细胞侵袭力的影响
- 2011年
- 目的研究上调SHI-1细胞金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2的表达对SHI-1细胞侵袭力的影响。方法实时定量PCR检测SHI-1细胞的TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2的mRNA表达,Western blot检测蛋白表达。构建TIMP-2逆转录病毒载体,转染SHI-1细胞,有限稀释法挑选出单克隆细胞S1、S2、S3。跨膜侵袭实验观察细胞侵袭力。建立裸鼠白血病模型,留取各脏器病理切片,观察人白血病细胞在各脏器中的浸润;RT-PCR检测裸鼠各脏器中人白血病细胞MLL/AF6融合基因表达。结果 SHI-1细胞TIMP-2、MT1-MMP、MMP-2的mRNA表达和蛋白表达以及它的体外侵袭率均高于其他细胞株（均P〈0.05）。单克隆细胞S1、S2、S3体外侵袭率增加了1.5~2.5倍（P〈0.05）。S1、S2和S3组裸鼠较SHI-1组发病时间提前、生存期缩短（P〈0.05）。各组裸鼠多脏器病理切片均出现明显的白血病细胞浸润。各组裸鼠体内多脏器均扩增出MLL/AF6融合基因,且S1、S2和S3组裸鼠脏器累及多于SHI-1组（P〈0.05）。结论 SHI-1细胞在mRNA和蛋白水平高表达MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2;上调TIMP-2增强了SHI-1细胞体内外的侵袭力。
- 王春玲侯予龙于亮陈月陈子兴岑建农沈宏杰
- 关键词：髓外浸润
- 白血病骨髓基质细胞促进SHI－1细胞体外侵袭及其作用机制探讨被引量：6
- 2008年
- 目的:研究白血病患者骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)与白血病SHI-1细胞互相接触对后者侵袭能力的影响及其作用机制。方法:收集白血病患者BMSC及其条件培养液,采用RT-PCR法检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在细胞SHI-1和BMSC中的表达。按1?10比例将BMSC与SHI-1细胞进行混合,接种于铺有matrigel基质胶的Transwell小室内,并加入终浓度为2μg/mL的CXC趋化因子受体4(CXCchemokine receptor 4,CXCR4)或EMMPRIN功能阻断抗体,或以BMSC条件培养液进行侵袭实验。采用实时定量PCR法检测共同培养前后SHI-1细胞的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子2(tis-sue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP-2)和CXCR4 mRNA表达的改变。应用ELISA法测定无血清培养上清液中基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor1,SDF-1)的含量。结果:SHI-1和BMSC细胞均表达EMMPRIN。SHI-1细胞与BMSC共培养后,其侵袭能力有显著提高,但能被CXCR4和EMMPRIN抗体阻断,条件培养液未明显提高SHI-1细胞的侵袭能力。共同培养后,SHI-1细胞的MMP-2、MMP-9、TIMP-2和CXCR4 mRNA以及无血清上清液中SDF-1的含量均有显著提高。结论:白血病患者的BMSC与白血病SHI-1细胞接触时,前者可通过其细胞表面的多种分子途径来诱导SHI-1细胞跨matrigel侵袭能力的提高,这可能是导致白血病细胞向髓外浸润的一种重要机制。
- 李振江陈子兴岑建农黄明德何军邱桥成姚利
- 关键词：白血病骨髓基质细胞白血病浸润细胞外基质蛋白质类
- 以聚合酶链反应确诊中枢神经系统白血病一例
- 2009年
- 患者男，27岁。2004年6月诊断为急性粒细胞白血病，部分分化型（M2型），核型分析示46，XY，t（8；21），AML1-ETO表达（＋）。化疗达完全缓解后多方案巩固治疗1年。后停止治疗。2007年3月无明显诱因出现双侧臀部及双下肢疼痛麻木，呈放射性，不伴有发热等其他不适，CT示腰椎间盘突出，相应处理后症状稍缓解。2008年7月，患者再次出现上述症状，较前加重，出现行走不便、大小便不能。查体：
- 孙艳花陈子兴岑建农吴伟林刘丹丹姚利沈宏杰
- 关键词：中枢神经系统白血病聚合酶链反应急性粒细胞白血病AML1-ETO确诊双下肢疼痛
