湖南省科技厅重点项目(08SK3101)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：文丹刘双珍蒋晶晶王沙更多>>
- 相关机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅重点项目湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带靶向干扰小鼠早期生长反应基因1短发夹RNA的慢病毒载体转染小鼠视网膜的干扰效率研究
- 2011年
- 目的 构建携带绿色荧光蛋白（GFP）和靶向干扰早期生长反应基因1（Egr-1）短发夹RNA（shRNA）共表达的慢病毒载体,转染小鼠视网膜组织,观察其对Egr-1基因的干扰效率.方法 针对已经筛选确定的Egr-1基因shRNA有效靶序列,构建携带GFP和靶向干扰Egr-1 shRNA的慢病毒载体LV-shRNA（Egr-1）.15日龄C57BL/6小鼠完全随机法分为实验组和阴性对照组,每组10只.LVshRNA（Egr-1）慢病毒载体经玻璃体腔注射转染至实验组小鼠右眼内,不针对任何特异基因的LV-NC 慢病毒载体通过同样的转染途径转染至阴性对照组小鼠右眼内,实验组及阴性对照组小鼠左眼不做任何处理设为空白对照组.2周后荧光显微镜下观察转染情况,实时定量PCR（RQ-PCR）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光检测Egr-1的表达,观察Egr-1基因的干扰效率.结果 慢病毒载体经玻璃体腔注射途径转染小鼠视网膜后,GFP广泛分布于视网膜全层,包括视网膜色素上皮层.与空白对照组和阴性对照组注射眼比较,RQ-PCR检测显示实验组注射眼Egr-1 mRNA表达明显下调（0.290＋0.074比1.006±0.033、1.010±0.086,均P＜0.001）,抑制率为71.29%;免疫印迹显示实验组注射眼内Egr-1蛋白表达明显下调（0.224±0.035比0.674±0.050、0.688±0.049,P＜0.001）,抑制率为67.44%.免疫荧光检测发现实验组注射眼在视网膜除内核层有少许Egr-1阳性细胞分布外,没有荧光表达.结论 成功构建携带绿色荧光蛋白和靶向干扰Egr-1基因shRNA的慢病毒载体,经玻璃体腔注射转染小鼠眼内其转染效率高,分布范围广,且对小鼠视网膜Egr-1基因抑制效率高.
- 蒋晶晶刘双珍文丹王沙
- 关键词：早期生长反应基因1慢病毒载体基因表达调控
