国家自然科学基金(31101517)
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 相关作者：马瑞娟沈志军蔡志翔俞明亮李凡更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
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- 基于桃花瓣的cDNA-AFLP分析体系的建立被引量：2
- 2014年
- 以桃为材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜桃的cDNA-AFLP分析体系,得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明,改良CTAB法提取的RNA较完整,纯度较高;反转录试剂盒形成的双链cDNA经EcoRⅠ和MseⅠ完全酶切后,16℃连接过夜;20μL的体系中,连接产物2.0μL作为预扩增的模板,循环数为30,预扩增产物稀释10倍作为选择性扩增的模板,扩增结果较好。
- 李凡沈志军马瑞娟蔡志翔焦云俞明亮
- 关键词：CDNA-AFLP
- 桃同株花色叶色嵌合体差异表达基因的cDNA-AFLP分析被引量：3
- 2014年
- 【目的】从转录水平初步探索桃同株花色叶色嵌合体颜色变异的分子机理。【方法】利用cDNA-AFLP技术,筛选桃嵌合体无性繁殖分离获得的不同颜色花瓣差异表达的基因;挑选差异片段进行克隆、测序和基因比对分析;利用qRT-PCR分析差异基因在不同基因型花和叶片中的转录表达。【结果】256对cDNA-AFLP引物共获得19个在粉色和白色花瓣之间具有差异的TDFs;克隆测序后成功获得其序列。Blastx比对和功能分类分析表明,17个TDFs与已知功能基因具有较高的相似值,8个涉及信号转导、5个涉及代谢过程、2个涉及细胞分化、1个涉及光合作用、1个涉及转录调控。选取12个在桃基因组中明确注释的TDFs进行qRT-PCR验证,结果发现5个基因(ppa005282m、ppa025850m、ppa001038m、ppa010768m、ppa023284m)在白花、绿叶基因型中表达量高,2个基因(ppa007494m和ppa015603m)在粉(或红)花、紫红叶片基因型中表达量高。【结论】桃嵌合体颜色变异可能涉及信号转导、代谢、转录调控等多种途径相关的生理、生化反应协同调控。
- 李凡沈志军马瑞娟蔡志翔郭磊俞明亮
- 关键词：嵌合体CDNA-AFLP
- 桃同株花果茎叶杂色材料的获得和特征特性初探被引量：1
- 2014年
- 在观赏桃育种过程中获得了1份特殊材料‘PCM-1’,花为粉—白杂色,叶片为紫红—绿杂色,嫩茎表面有紫红色条带或细点,幼果表面有不规则红色斑块或细点。从杂色性状的形态学特性、无性繁殖表现和有性遗传规律对其进行了初步探索,并进行了其亲本和无性系的SSR鉴定。连续6年观察发现‘PCM-1’的杂色性状稳定;徒手切片观察到杂色均出现在表层的第一层细胞。嫁接繁殖表明杂色性状稳定(97.4%),但无性系中也能分离出较低比例的纯色株系(2.6%);花、果、叶、嫩茎4个部位的杂色具有同步性。以‘PCM-1’为母本,与花色纯白、叶色纯绿的父本杂交,后代中能够出现12.2%~24.7%的杂色单株。通过SSR鉴定发现‘PCM-1’的母本为‘红粉佳人’;经324个SSR标记鉴定,‘PCM-1’(杂色)、‘PCM-1R’(纯红)和‘PCM-1G’(纯绿)3个无性系间未发现等位基因差异。
- 沈志军马瑞娟俞明亮许建兰蔡志翔周懋李凡
- 关键词：杂色表型SSR
- 桃甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术体系的建立
- 2016年
- 为建立适合桃的甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,简称MSAP)反应体系,以桃PCM-1R、PCM-1G为材料,对MSAP技术中的关键因素进行优化。结果表明,500 ng基因组DNA用EcoRⅠ、HapⅡ或MspⅠ各10 U(0.5μL,2 000 U/m L),37℃保温12 h,即可酶切完全;25μL选择性扩增体系中,含有2μL10倍稀释的预扩增产物、各1μL上下游引物、2.5μL 10×Taq buffer、2.5μL d NTP mix(各0.2 mmol/L)、2.5μL25 mmol/L MgCl_2、0.25μL Taq DNA聚合酶。在该体系下选用256对引物对桃叶片进行甲基化模式分析,经筛选获得23对扩增条带清晰、重复性好的引物,PCM-1R、PCM-1G总甲基化率分别为28.0%、25.7%。
- 蔡志翔沈志军严娟马瑞娟俞明亮
- 关键词：DNA甲基化MSAP
- 光质对红叶桃叶片呈色的影响被引量：8
- 2013年
- 【目的】为探明不同光质对红叶桃叶片呈色的作用效果,【方法】以红叶桃品种‘红粉佳人’的2 a生苗为试材,以全光照为对照,研究了白、红、黄、蓝、绿5种颜色滤光膜下叶片色泽、色素含量和糖组分的差异。【结果】红、黄色滤光膜下叶片亮度值(L*)、花色素苷含量/叶绿素含量(Ant./Chl.)、类黄酮含量显著升高,红色饱和度(a*)、红色饱和度/黄色饱和度(a*/b*)与对照差异不显著;蓝、绿色滤光膜下a*、a*/b*变为负值,Ant.、Chl.、总酚、类黄酮含量显著降低;白色滤光膜下a*、a*/b*也为负值,Ant.和Ant./Chl.较对照显著降低。红叶桃叶片果糖含量与a*显著负相关,与Ant.有较高的负相关关系。【结论】红、黄色滤光膜处理下红叶桃叶片红色色泽较好,自由基清除能力强;蓝、绿色滤光膜下叶片色泽偏绿色方向,清除能力弱;白色滤光膜下着色也较差。可通过调节光质组成促进红叶桃叶片的呈色效果。
- 张斌斌蔡志翔沈志军张春华马瑞娟
- 关键词：红叶桃光质色差色素糖组分
- 桃同株叶片杂色材料的MSAP分析
- 2016年
- 为探寻桃同株叶片杂色材料PCM-1的突变机制,建立了桃PCM-1G和PCM-1R DNA样品的基因池,用256对甲基化敏感扩增多态性（MSAP）选择性扩增引物进行全基因组甲基化MSAP分析。筛选出23对条带清晰、丰富且重复性好的引物组合。扩增出200～1 000 bp的位点397个,其中PCM-1G、PCM-1R两种类型半甲基化位点分别为38个和44个,分别占全部位点的9.6%和11.1%;全甲基化位点分别为64个和67个,分别占全部位点的16.1%和16.9%;总甲基化率分别为25.7%和28.0%。成功分离了29条甲基化修饰DNA序列,通过测序发现有22条能够得到桃基因组支持且同源性较高,其中2条来自于类胡萝卜素裂解双加氧酶4（CCD4）、3条来自于Omega-羟基棕榈酸阿魏酸转移酶;推测CCD4和Omega-羟基棕榈酸阿魏酸转移酶可能与叶色嵌合突变有关。
- 蔡志翔沈志军马瑞娟严娟俞明亮
- 关键词：嵌合体DNA甲基化
