国家自然科学基金(30670916)
- 作品数：17 被引量：114H指数：6
- 相关作者：安春丽王雪莲王晓娜卢岩尹香菊更多>>
- 相关机构：中国医科大学沈阳医学院中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目沈阳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鸦胆子油乳对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其作用机制被引量：31
- 2008年
- 目的:探讨鸦胆子油乳对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其可能的机制。方法:采用倒置显微镜及巴氏染色法,观察药物质量浓度分别为5、10μg/ml作用下细胞形态的变化;用MTT法检测5个不同药物质量浓度(40、20、10、5、2.5μg/ml)作用下药物对细胞的抑制率;用流式细胞仪检测药物质量浓度分别为10、20μg/ml的实验组细胞周期的变化。结果:鸦胆子油乳作用后,颈癌Hela细胞形态上都发生了改变,凋亡小体出现;鸦胆子油乳显著抑制了宫颈癌Hela细胞的增殖,作用48h后各组中抑制率都已超过60%,72h后抑制率都超过80%;鸦胆子油乳阻滞S期细胞进入G2～M期,并且有凋亡峰,10、20μg/ml药物作用后细胞凋亡率分别为59.9%、69.8%。结论:鸦胆子油乳可有效抑制宫颈癌Hela细胞的增殖且呈时间依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡和阻滞细胞于S期有关。
- 尹香菊栾和芝安春丽王雪莲邴玉艳王晓娜
- 关键词：鸦胆子油乳宫颈癌细胞增殖细胞周期凋亡
- 肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定。pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST。表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功。SDS-PAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST。结论成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统。
- 王雪莲栾和芝刘彤赵雨杰安春丽
- 关键词：肺孢子菌嵌合基因重组融合蛋白
- ICU病房中心静脉导管相关性血流感染的高危因素及预后分析被引量：18
- 2012年
- 目的调查ICU住院患者中心静脉导管相关性血流感染(CRBSI)的发生情况、高危因素及预后,为制定合适的防治策略提供依据。方法应用前瞻性研究方法,采用美国国家院内感染监测(NNIS)规定的统一标准系统,对2007年6月1日至2008年5月31日入住中国医科大学附属盛京医院综合性ICU的所有符合条件的病例进行调查。结果 CRBSI感染率为13.2%(23例次/174),感染密度为12.0/1000导管日。单因素分析结果,中心静脉置管的个数、CRBSI发生前抗生素应用个数、导管日差异具有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果,CRBSI发生前抗生素应用个数≥3(OR=6.335)和中心静脉置管个数>1(OR=5.981)是CRBSI发生的独立危险因素(P<0.05);CRBSI组的病患粗死亡率、呼吸机日、住院总费用、药费、ICU内住院日、总住院日和平均日花费均高于非CRBSI的病患(P<0.05)。结论该院CRBSI发生率高,感染密度大,多个中心静脉置管以及抗生素应用频繁是CRBSI的高危因素。CRBSI者的预后及医疗费用的经济负担明显高于非CRBSI者。必须进一步加强有效的预防和控制措施。
- 肖丽卢岩彭松林李国福于晓江安春丽
- 关键词：重症监护病房导管相关性血流感染高危因素预后
- ICU病房导管相关性血流感染的临床流行病学被引量：9
- 2010年
- 目的调查重症监护病房住院患者导管相关性血流感染(CRBSI)的发生率、病原分布特点、高危因素,并和国际权威数据进行比较,了解中国医科大学附属盛京医院CRBSI发生状况,为进一步防治CRBSI提供依据。方法应用美国国家院内感染监测(NNIS)规定的关于CRBSI的定义、诊断标准和评估参数等统一标准系统,对2007年6月1日至2008年5月31日入住中国医科大学附属盛京医院综合性ICU病房内的所有符合条件的病例进行前瞻性研究。结果得到符合纳入研究条件的患者174例,累计行中心静脉导管日为1913日;发生CRBSI为23例次,感染率为13.2%,感染密度为12.0/1000,导管使用率为72.8%。其中以肠杆菌和假单胞菌为主的革兰阴性细菌感染9例;以屎肠球菌为主的革兰阳性细菌感染7例;真菌感染7例,均为假丝酵母菌属。多因素Logistic回归分析结果,CRBSI发生前抗生素应用个数≥3(OR=6.335)和中心静脉置管个数>1(OR=5.981)是CRBSI发生的独立危险因素(P<0.05)。结论该院CRBSI发生率高,感染密度大,多个中心静脉置管以及抗生素应用频繁可以增加CRBSI的发生率,必须进一步加强有效的预防和控制措施。
- 卢岩于晓江安春丽
- 关键词：重症监护病房导管相关性血流感染流行病学
- 鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制被引量：17
- 2009年
- 目的:探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制。方法:以鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)作用于SiHa细胞24、48、72h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞的超微结构;琼脂糖凝胶电泳观察SiHa细胞基因组DNA片段化改变;流式细胞术测定AnnexinV/PI双染色后SiHa细胞凋亡率。结果:MTT结果显示,鸦胆子油乳以剂量和时间依赖方式对SiHa细胞增殖有明显的抑制作用,其中80μg/ml药物作用72h时的抑制率可达92.43%;20μg/ml药物作用后,透射电镜下可观察到细胞出现凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡特征性的DNA片段化"梯状"条带;流式细胞仪检测显示,10、20、40μg/ml药物组作用48h后凋亡率分别为(8.02±2.41)%、(51.60±7.67)%、(77.22±5.80)%。结论:鸦胆子油乳能够抑制SiHa细胞增殖,其作用机制可能为诱导SiHa细胞发生凋亡。
- 王晓娜马力安春丽肖纯凌王雪莲王冬冬
- 关键词：宫颈肿瘤SIHA细胞鸦胆子油乳细胞凋亡
- CD40L启动CD4^+ T细胞缺乏小鼠免疫反应的研究
- 2009年
- 随着H IV感染者及各类医疗措施导致的免疫受损者的增多,探讨一种适合免疫缺陷人群的预防机会感染的策略越来越受到重视。研究表明,CD4+T细胞是抵抗肺孢子菌等机会感染的最主要因素,但不是唯一的因素。其中CD40配体(CD40L)被认为是一种可以启动B细胞和CD8+T细胞反应的关键因子。为探讨CD40L是否能在缺乏CD4+T细胞的小鼠体内启动免疫反应,本文研究了用卵白蛋白(OVA)作为模型抗原,联合应用CD40L引起的免疫反应。结果显示,同时应用OVA和CD40L,可使CD4+T细胞耗竭小鼠体内抗OVA IgG抗体和抗原特异性IFN明显增多,提示在CD4+T细胞缺乏的宿主体内,CD40L可以启动B细胞和CD8+T细胞类免疫反应。该结果为抗肺孢子菌等机会性感染的免疫预防研究提供可贵的资料。
- 李欣肖纯凌安春丽王晓娜王雪莲卢岩王亚婷郑明权
- 关键词：CD40配体卵白蛋白CD4^+T细胞免疫反应
- 检测肠道病毒71型RT-LAMP技术的建立及其应用被引量：3
- 2011年
- 目的为肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染的快速诊断建立一种简捷、敏感、特异的基因检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)。方法针对EV71VP1基因的8个区域设计6条特异性引物,建立检测该靶序列的RT-LAMP方法,对其特异性及敏感性进行了验证;并对手足口病患者标本进行检测,并与RT-PCR及Real-time PCR方法进行了比较。结果利用RT-LAMP方法能成功检测到EV71VP1基因区,等温条件下60min内即可完成检测,该方法简便快捷、敏感性高、特异性好;其阳性率高于RT-PCR方法(P<0.05),与Real-time PCR结果呈现很好的一致性(P>0.05)。结论 RT-LAMP方法具有灵敏度高,特异性强,操作过程简捷快速,无需特复杂仪器等优点。适用于EV71感染的快速检测及分子流行病学的监测,具有很好的开发应用前景。
- 耿英芝姚文清郭军巧于伟毛玲玲陈静乙安春丽
- 关键词：肠道病毒71型手足口病
- HPV-siRNA对Hela细胞生长抑制作用的实验研究被引量：1
- 2007年
- 以HPV18 E6基因为靶位,研究siRNA对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。设计并合成siRNA,脂质体siNEO FX转染Hela细胞,分别用MTT法,双层软琼脂克隆形成试验和流式细胞术分析了siRNA对Hela细胞体外生长增殖活力、细胞周期分布的作用。siRNA作用后的Hela细胞增殖速度减慢,软琼脂克隆形成率降低,G0/G1期细胞比率增加。HPV18 E6 siRNA能抑制Hela细胞体外生长增殖能力并诱导细胞周期重新分布。
- 王雪莲尹香菊王冬冬安春丽
- 关键词：SIRNAHPVHELA
- 鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制被引量：22
- 2011年
- 目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性。结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72h时的抑制率达(91.07±1.60)%。鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14±3.09)%和(61.57±7.28)%(P<0.01)。鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P<0.01)。结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖。
- 张晓娇王雪莲赵峰安春丽王晓娜
- 关键词：肺癌NCI-H460细胞鸦胆子油乳凋亡CASPASE-3
- 小干扰RNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达被引量：4
- 2007年
- 目的:以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞株HPV18基因组中恶性转化基因E6、E7的抑制作用及对细胞内P53蛋白表达的影响。方法:实验分细胞培养液阴性对照组(阴性对照组),无关序列siRNA对照组(无关序列对照组)及转染HPV18 E6-siRNA实验组(siRNA实验组)。设计并合成HPV18 E6-siRNA及无关序列siRNA,转染Hela细胞后,RT-PCR检测转染后48、120 h细胞内HPV18E6、E7mRNA的变化,Western blotting检测转染后48 h细胞内HPV18 E7和P53蛋白的变化。结果:siRNA转染Hela细胞的效率约为85%。siRNA转染后48 h,实验组细胞内HPV18E6、E7mRNA及E7蛋白含量降低,其含量分别为阴性对照组的33.33%、36.78%及33.84%;实验组细胞内P53蛋白含量增加,其含量为阴性对照组的2.194倍。siRNA转染后120 h,实验组细胞HPV18E6、E7mRNA含量恢复为阴性对照组的90.91%、101.60%。结论:HPV18 E6-siRNA体外能明显抑制宫颈癌Hela细胞HPV18E6、E7基因的表达,增加细胞内肿瘤抑制因子P53蛋白的水平。
- 王雪莲逯晓波安春丽姜晶尹香菊
- 关键词：E6基因E7基因
