河北省自然科学基金(C200600125)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
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- A族链球菌表面蛋白Fba的原核表达及免疫原性分析被引量：5
- 2008年
- 目的 研究A族链球菌（GAS）表面新型纤连蛋白Fba的免疫原性，探讨GAS感染机体的免疫应答机制。方法 PCR扩增fba基因，测序正确后克隆至原核表达质粒pGEX4T-2，并在E．coli BL21中表达，应用ELISA和Western印迹法鉴定目的蛋白表达，以该蛋白作为抗原，包被酶联板．俭测GAS全菌免疫鼠血清、33份抗链球菌“0”阳性患者血清。同时，将该蛋白免疫Balb／C小鼠，3次免疫后收集血清，检测IgG效价。结果 ELISA和Western印迹证实，表达的Fba重组蛋白可与已知兔抗Fba阳性血清产生特异性反应；且Fba蛋白可与GAS全菌免疫鼠血清、抗链球菌“0”阳性患者血清发生特异性结合。Fba蛋白免疫小鼠后抗血清IgG效价达1：4800。结论 GAS感染或Fba蛋白免疫动物后均可诱导动物体产生Fba抗体，该抗体与Fba重组蛋白可产生特异性反应，提示Fba蛋白具有良好的免疫原性和抗原性。Fba蛋白可作为GAS的候选疫苗及检测GAS感染患者血清效价的重要工具。
- 马翠卿李彩虹王秀荣王秀文尹晓琳顾海燕冯惠东魏林
- 关键词：链球菌纤连蛋白类免疫原性
- A族链球菌表面新发现蛋白Fba真核表达质粒的构建及其诱导的免疫应答被引量：9
- 2007年
- 目的:构建新发现的A族链球菌(GAS)表面蛋白Fba的真核表达质粒,并将其以及Fba蛋白、M蛋白分别免疫小鼠,对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析。探讨Fba蛋白作为GAS候选疫苗的可能性。方法:以SSI-9菌株(GASM1血清型标准株)作为模板,采用PCR方法扩增Fba基因,测序正确后克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1/fba;将雌性CD1小鼠随机分成6组,分别为Fba蛋白免疫组、M蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba+Fba蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba免疫组、pcDNA3.1空质粒对照及PBS对照组。ELISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平;脾细胞增殖试验检细胞增殖水平,并用流式细胞术检测小鼠体内CD4+、CD8+淋巴细胞的变化。试验结果经SPSS10.0统计处理。结果:成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/fba;质粒或蛋白免疫后小鼠IgG产生水平以Fba蛋白免疫组增高最为明显,其次为Fba质粒蛋白混合免疫组及Fba质粒组。特异性抗原诱导后体外脾细胞增殖试验显示:pcDNA3.1/fba免疫组增殖水平明显高于其它组,流式细胞检测结果与此一致,并显示以CD4+T细胞水平升高为主,CD8+T细胞水平在各组别之间也有一定的差异。结论:(1)Fba蛋白与M蛋白一样均能有效地诱导机体产生抗体,提示Fba蛋白很有希望成为GAS的候选疫苗。(2)成功构建了Fba蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1/fba,且该重组质粒能有效地诱导抗链球菌所需的抗体,并能增强CD4+T细胞、CD8+T细胞的增殖功能。
- 李彩虹马翠卿王锦魏林
- 关键词：真核表达质粒免疫
