广西医疗卫生重点科研课题(200866)
- 作品数：5 被引量：0H指数：0
- 相关作者：黎丹戎朱小东张玮曲颂李龄更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院广西医科大学更多>>
- 发文基金：广西医疗卫生重点科研课题广西壮族自治区科学研究与技术开发计划广西研究生教育创新计划项目更多>>
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- CUL5基因的RNA干扰真核表达载体的构建
- 2010年
- 目的:构建CUL5基因的RNA干扰真核表达载体,探索CUL5在鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的作用。方法:根据GenBank数据库提供的CUL5基因mRNA序列,按照Tuschl设计原则,设计选择双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),再设计合成为能表达其小发卡结构RNA(small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pGPU6/GFP/Neo质粒定向连接,构建真核表达载体,并进行限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定。结果:经限制性内切酶酶切和DNA测序证实质粒中插入的为所需序列,通过RT-PCR证实其能够干扰CNE2细胞的CUL5基因表达。结论:CUL5基因RNA干扰真核细胞表达载体的构建成功。
- 李烨朱小东曲颂李力唐步坚黎丹戎张玮李龄苏芳
- 关键词：RNA干扰真核表达载体
- 稳定沉默CUL5基因的CNE2细胞系建立
- 2010年
- 目的:建立稳定沉默CUL5基因的CNE2细胞系,探讨CUL5在连续分割照射下鼻咽癌细胞加速再增殖现象中所起的作用。方法:设计并合成能表达针对CUL5基因的shRNA的DNA序列,构建真核表达载体;脂质体转染重组质粒至人鼻咽癌细胞株CNE2;G418筛选阳性细胞并扩大培养;RT-PCR检测连续分割照射前后阳性细胞CUL5基因沉默效果。结果:经限制性内切酶酶切和DNA测序证实质粒中插入的为所需序列;G418筛选所得阳性细胞经RT-PCR证实照射前后均能抑制CUL5基因表达。结论:成功建立CUL5基因沉默的CNE2细胞系。
- 朱小东李烨曲颂李龄黎丹戎张玮
- 关键词：CNE2细胞照射RNA干扰
- 抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体的构建
- 2009年
- 目的在哺乳动物细胞中构建并鉴定抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体。方法根据CDC25A的基因序列,设计特异性的siRNA,将合成的siRNA核酸片段退火形成双链后连接到经Bam HI和HindⅢ双酶切后的psilencer4.1真核表达载体,命名为psilencer4.1-CDC25A以及psilencer4.1-Control,并进行酶切及测序鉴定。结果通过酶切鉴定和序列测定,成功地构建出抑制CDC25A表达的siRNA载体及其阴性对照载体。结论成功构建和验证了siRNA真核表达载体,为下一步研究奠定了良好的基础。
- 朱小东李相德曲颂李龄黎丹戎张玮李力唐步坚
- 关键词：CDC25ASIRNA
- CUL5基因沉默对连续照射期间CNE2细胞增殖状况影响的研究
- 2010年
- 背景与目的:本课题组前期已应用不同的实验方法对鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE2)在连续分割照射中的细胞增殖状态进行了研究,明确了CNE2细胞株在连续分割照射中存在中后期加速再增殖现象,同时应用基因芯片技术、实时荧光定量PCR筛选出与照射后CNE2细胞株增殖状态相关的差异基因。CUL5基因为细胞增殖活性增高时的上调基因之一,其在照射增殖活性最高时相与最低时相表达差异在2倍以上,因此本研究选择CUL5作为开展功能研究的目的基因,应用RNA干扰技术沉默CUL5基因,观察人鼻咽癌细胞株CNE2在连续照射中后期加速增殖现象是否受到影响。方法:构建、培养出CUL5基因沉默效果稳定的人鼻咽癌细胞株CNE2-pGPU6/GFP/Neo-CUL5,接受射线2Gy/d,每天1次,连续照射5d,每天分别用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞相对增殖率、流式细胞术检测照射后细胞周期分布情况。结果:MTT法检测出照射第1～5天细胞相对增殖率,实验组(CNE2-pGPU6/GFP/Neo-CUL5)分别为1.03±0.05、0.97±0.03、0.84±0.12、0.54±0.09、0.33±0.11,阴性对照组(CNE2-pGPU6/GFP/Neo-NC)分别为1.07±0.09、0.96±0.12、1.21±0.04、1.19±0.04、0.91±0.02;空白对照组(CNE2)分别为1.07±0.09、0.97±0.05、1.22±0.07、1.22±0.04、0.97±0.04,实验组与阴性及空白对照组均有显著差异(P<0.001)。流式细胞术检测出实验组在连续照射第1天增殖速度最快,增殖最旺盛,后逐渐下降,第5天增殖最慢,增殖活性最低;对照组第3天增殖速度最快,第5天增殖最慢。结论:CUL5基因沉默的CNE2细胞连续分割照射期间加速增殖现象有所改变。
- 朱小东李烨曲颂李龄黎丹戎张玮
- 关键词：CNE2细胞照射增殖
- 干扰CDC25A基因对CNE2细胞连续照射期间增殖的影响
- 2011年
- 目的采用RNA干扰技术沉默CDC25A基因,观察其对鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)在连续照射中后期加速增殖现象的影响。方法构建、培养出CDC25A基因沉默效果稳定的CNE2-psilence4.1-CDC25A,接受射线2Gy/d连续照射5 d,分别采用MTT法、流式细胞术检测细胞的生长增殖活性,并在mRNA及蛋白水平上应用RT-PCR、Western Blot法进行验证。结果 MTT法检测结果表明,CNE2-psilence4.1-CDC25A细胞存活分数(SF)在第5天达到高峰,CNE2-psilence4.1-Control细胞SF在第3天达到高峰。流式细胞术检测结果显示,CNE2-psilence-4.1-CDC25A细胞在照射第5天S期细胞比(SPF)及增殖指数(PI)为最高值,CNE2-psilence4.1-Control细胞在照射第3天SPF值最高,在照射第4天PI值最高;RT-PCR、Western Blot法进一步验证CNE2-psilence4.1-CDC25A细胞在照射第1、3、5天的CDC25A的表达与MTT法、流式细胞术检测结果基本吻合。结论与CNE2-psilencer4.1-Control细胞相比,基因沉默的CNE2-psilencer4.1-CDC25A细胞在连续分割照射期间,细胞的生长速度减慢、生长高峰延迟。
- 曲颂朱小东李相德李龄黎丹戎张玮
- 关键词：RNA干扰CDC25ACNE-2
