目的调节性T细胞(regulatory T cell,Treg cell)在肿瘤局部免疫耐受中发挥了重要作用,但其产生机制尚不清楚。本实验通过将吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)基因转染小鼠Lewis肺癌细胞,体外研究对Treg细胞的诱导增殖作用,为肺癌免疫耐受产生机制研究提供新的依据。方法采用阳离子脂质体Lipofectmine2000,将含人全长IDO基因的pEGFP-IDO真核表达质粒转染到小鼠Lewis肺癌细胞,G418筛选获得Lewis-IDO细胞,同时设置空白对照组(Lewis细胞)及空质粒转染组(Lewis-EGFP细胞),将3种细胞分别与小鼠T淋巴细胞混合培养,利用流式细胞技术分析3种细胞对Treg细胞的诱导增殖作用。结果IDO基因成功转染到小鼠Lewis细胞,与小鼠T淋巴细胞共培养后,Treg细胞增殖明显,和Lewis-EG-FP细胞(6.2%:4.9%,P<0.05)及Lewis细胞(6.2%:5.0%,P<0.05)相比差异有统计学意义。结论IDO基因转染小鼠Lew-is肺癌细胞在体外能明显增强Treg细胞的增殖,为肺癌局部免疫耐受机制研究提供了新的实验依据。
目的探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)基因转染对小鼠Lewis肺癌细胞侵袭和转移能力的影响,并对其机制进行初步探讨。方法通过基因转染技术,利用阳离子脂质体将含有人全长IDO基因序列的真核表达质粒pEGFP-IDO转染到小鼠Lewis细胞,G418筛选获得Lewis-IDO细胞,设置空白对照组(Lewis细胞)及空质粒转染组(Lewis-EGFP细胞),观察细胞形态学改变,利用transwell侵袭小室检测3种细胞侵袭能力,将3种细胞分别种植到C57/LB小鼠,检测不同细胞种植瘤和转移灶的形成、小鼠外周血中调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)的增殖。结果与Lewis-EGFP细胞和Lewis细胞相比,Lewis-IDO细胞贴壁比例增加,形态变为长梭形,伪足明显增多延长,前二者形态相似;Lewis-IDO细胞侵袭能力增强,破坏matrigel基质蛋白胶层进入下室内的细胞数明显增多,Lewis-IDO细胞、Lewis-EGFP细胞及Lewis细胞分别为237.4±22.1、166.0±14.2和185.6±19.5,前者与后二者比较差异具有统计学意义(P<0.05);种植Lewis-IDO、Lewis-EGFP及Lewis细胞的小鼠发生肝肺转移的小鼠数量及转移灶分别为12只44处、5只7处及4只7处,前者与后二者比较具有统计学意义(P=0.01);流式细胞术分析,种植Lewis-IDO细胞的小鼠外周血中Treg细胞比例明显高于Lewis-EGFP细胞组和Lewis细胞组,其比例分别为(13.7±4.5)%、(8.9±3.3)%和(9.2±3.4)%,前者与后二者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论IDO基因转染能改变Lewis细胞的培养形态,可以明显增强Lewis细胞的侵袭能力和转移能力,其机制可能与IDO对Lewis细胞形态学改变及诱导Treg细胞的增殖有关。
