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23价肺炎球菌多糖疫苗体外诱导人气道上皮细胞hBD-2表达的机制被引量：3: 2013年; 目的探讨23价肺炎球菌多糖疫苗在体外诱导人气道上皮细胞人防御素2(humanβ-defensin 2,hBD-2)表达的机制。方法 0.5μg/ml的23价肺炎球菌多糖疫苗刺激原代人气道上皮细胞12 h,电泳迁移率变动分析法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测原代人气道上皮细胞中NF-κB的活性。激光扫描共聚焦显微镜技术检测原代人气道上皮细胞内钙离子浓度的变化情况。结果 23价肺炎球菌多糖疫苗刺激原代人气道上皮细胞24h后,细胞内NF-κB活性增高;静息状态下人气道上皮细胞内钙离子浓度为(38.4±1.21)nmol/L,随着刺激时间的延长,钙离子的浓度逐渐上升,20、30、40 min分别为(50.5±3.26)、(51±2.83)、(48±3.47)nmol/L,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 23价肺炎球菌多糖疫苗诱导hBD-2表达上调是通过激活NF-κB信号通路介导的,细胞内钙离子浓度增高可能是NF-κB激活的重要因素之一。; 沈桢巍沈李花雷撼; 关键词：细胞内钙离子

β防御素2对大鼠肺部炎症细胞因子的影响被引量：10: 2013年; 目的探讨β防御素2(rBD2)对大鼠肺部炎症反应的影响及其可能机制。方法构建大鼠rBD2的cDNA慢病毒载体和RNA干扰载体,双向调节rBD2在大鼠肺组织内的表达水平,ELISA法检测肺组织中IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-10的表达变化,Western blot检测肺组织中rBD2的表达,Real time PCR法检测肺组织中rBD2mRNA的表达。结果成功构建rBD2cDNA慢病毒和RNA干扰载体,并成功转染。大鼠肺部感染时,上调rBD2可降低IL-1α、IL-1β等促炎细胞因子的水平,提高抗炎细胞因子IL-4、IL-10的含量(P<0.01)。结论 rBD2可调节大鼠肺组织炎症相关细胞因子的水平,参与并抑制大鼠肺部炎症反应。; 沈桢巍方路姜敏敏刘显东雷撼; 关键词：细胞因子

安宫牛黄丸在重症监护室中的应用浅识被引量：1: 2012年; 本文论述安宫牛黄丸在重症监护领域的临床应用,认为应用安宫牛黄丸必须药证相符,继而论述安宫牛黄丸的服用方法及配伍应用,最后列举急性脑血管病(脑梗死)、重型颅脑损伤、肺部感染高热神昏3则验案,进一步具体地阐述安宫牛黄丸的临床应用心得。; 沈桢巍热兹宛蒋易高鹏飞沈宝藩; 关键词：安宫牛黄丸重症监护

b型流感嗜血杆菌结合疫苗促进人气道上皮细胞hBD-2表达: 2013年; 目的:检验b型流感嗜血杆菌结合疫苗在体外能否刺激人气道上皮细胞hBD-2表达,并探讨人工诱导防御素表达的方法。方法:体外分离、培养原代人气道上皮细胞。b型流感嗜血杆菌疫苗刺激原代人气道上皮细胞后,用RT-PCR和ELISA法检测培养上清液中hBD-2蛋白的表达。收集刺激后的细胞培养上清液进行抑菌实验。结果:浓度>1μg/ml的b型流感嗜血杆菌结合疫苗刺激原代人气道上皮细胞12 h后,可诱导hBD-2 mRNA的表达,与对照组相比较有显著差异(P<0.01),无剂量依赖性,同时细胞培养上清液中hBD-2蛋白的表达上调。1μg/ml b型流感嗜血杆菌结合疫苗浓缩后的细胞培养上清液具有抑菌作用。结论:一定浓度(1μg/mL)以上的b型流感嗜血杆菌结合疫苗作用于人原代气道上皮细胞可诱导hBD-2的表达,为人工方法刺激机体产生人β防御素-2,对抗病原菌感染提供新的策略。; 沈桢巍徐玮蒋易叶海燕雷撼; 关键词：B型流感嗜血杆菌结合疫苗

大鼠β防御素2基因慢病毒载体的构建及功能检测被引量：1: 2010年; 目的构建大鼠β防御素2（rBD2）基因慢病毒表达载体,并转染培养细胞检测其表达,为rBD2研究及大鼠体内实验奠定基础.方法提取大鼠上皮细胞总RNA,PCR扩增获得rBD2基因,双酶切PCR产物和慢病毒载体Lentivirus[含H1启动子和绿色荧光蛋白（GFP）],连接构成rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2,行测序鉴定.用慢病毒包装系统对LV-rBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度,病毒液感染培养细胞,RT-PCR和Western Blot检测rBD2表达.结果凝胶电泳和测序结果表明rBD2基因克隆到慢病毒载体中,序列正确.完成慢病毒颗粒包装,调整病毒滴度至1×105ifu/μl.RT-PCR和Western-Blot显示rBD2基因获得表达.结论 rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2被成功构建,能转染细胞并获得有效表达.; 雷撼方路何翔; 关键词：基因转染技术逆转录聚合酶链反应

大鼠β防御素2基因RNAi慢病毒载体的构建及效应测定被引量：1: 2010年; 目的构建大鼠β防御素2（rBD2）基因RNAi慢病毒重组载体,转染培养细胞,检测其沉默效应,筛选出最佳的RNAi慢病毒载体.方法序列软件设计3条针对rBD2基因CDS区的siRNA序列,合成单链后退火形成双链DNA,分别与酶切处理的慢病毒载体lentivirus连接构成3个RNAi慢病毒重组载体,再转化细菌,测序鉴定.脂质体法转染细胞,荧光实时定量PCR（RT-PCR）及Western免疫印迹测rBD-2 mRNA及蛋白表达,筛选沉默效果最佳的为LV-shrBD2载体.用慢病毒包装系统对LV-shrBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度.结果凝胶电泳显示3个RNAi慢病毒重组载体的PCR产物为316 bp,测序结果表明序列正确.转染细胞后RT-PCR及Western免疫印迹检测,siRNA序列1构建的重组载体mRNA抑制率达82%,干扰效率最高,为所需的rBD2基因RNAi慢病毒载体LV-shrBD2.包装慢病毒颗粒并调整病毒滴度至1×105ifu/μl.结论成功构建并筛选出沉默效应最佳的rBD2基因RNAi慢病毒表达载体LV-sh1rBD2,为进一步开展rBD2研究提供了依据.; 雷撼方路汪蜀何翔; 关键词：慢病毒属 RNA干扰沉默效应

流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人气道上皮细胞hBD-2表达的研究: 2012年; 目的研究流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人原代气道上皮细胞后能否促进人β防御素2(humanβ-defensin-2,HBD-2)的表达及分泌,探讨人工诱导增强防御素表达的方法。方法分离培养人原代气道上皮细胞,以不同浓度流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人原代气道上皮细胞,分别于刺激后6、12、24 h提取细胞总RNA及培养细胞上清液,RT-PCR、ELISA检测hBD-2的mRNA和蛋白表达,纸片法观察杀菌效果。结果不同浓度流行性感冒病毒裂解疫苗刺激气道上皮细胞6 h后,各组细胞中hBD-2的mRNA和蛋白表达与对照组相比无明显变化;12h后,疫苗浓度>1.0μg/ml的各组细胞中mRNA表达和蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),但24 h后均下降。1.0μg/ml流行性感冒病毒裂解疫苗作用12 h后的细胞培养上清液有明显的杀菌效果。结论一定浓度的流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人原代气道上皮细胞,可促进hBD-2 mRNA的表达和hBD-2蛋白浓度的增加,为人工方法刺激机体产生hBD-2,对抗病原菌感染提供新的方向。; 沈桢巍唐瑾雷撼; 关键词：流行性感冒病毒裂解疫苗

23价肺炎球菌多糖疫苗刺激人气道上皮细胞hBD-2表达的研究: 2013年; 目的研究以23价肺炎球菌多糖疫苗刺激人原代气道上皮细胞后能否促进8防御素2（hBD-2）的表达及分泌，探讨人工诱导增强防御素表达的方法。方法分离培养人原代气道上皮细胞，以不同浓度23价肺炎球菌多糖疫苗刺激人原代气道上皮细胞，分别于6、12、24h提取细胞总RNA及培养细胞上清液，R，rPCR、ELISA检测hBD-2的mRNA和蛋白表达。纸片法观察杀菌效果。结果不同浓度23价肺炎球菌多糖疫苗刺激气道上皮细胞，6h后各组细胞中hBD-2的mRNA和蛋白表达与对照组相比无明显变化；12h后，疫苗浓度〉0．5mg／L的各组细胞中mRNA表达和蛋白水平显著升高（P〈0．05），但24h后均下降。疫苗（0．5mg／L）作用后12h的细胞培养上清有明显的杀菌效果。结论一定浓度的23价肺炎球菌多糖疫苗（〉0．5mg／L）刺激人原代气道上皮细胞，可促进hBn2mRNA的表达和hBD-2蛋白浓度的增加，从而发挥hBD-2天然抗微生物的作用。; 沈桢巍蒋易雷撼

老年人呼吸生理的变化被引量：4: 2011年; 随着人口老龄化的加剧，老年医学的研究越来越受到重视。老年人自有其特殊的生理功能和变化，与各种疾病的发生发展有着密切的联系。人体的呼吸系统约在25～30岁左右生长发育成熟，肺泡数明显增加，肺功能也在这段时期达到峰值。此后呼吸系统开始老化，肺组织结构逐渐出现退行性变，功能随着年龄的增长而逐渐衰退。60岁以后老化现象更加明显，; 雷撼沈桢巍; 关键词：老年人呼吸生理老化现象肺组织结构老年医学生理功能

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国家自然科学基金(30670932)

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