国家自然科学基金(30800415)
- 作品数：15 被引量：15H指数：2
- 相关作者：李妍沈涛付勤姚远梁爽更多>>
- 相关机构：中国医科大学明尼苏达大学辽宁省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省博士科研启动基金辽宁省科技厅基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同固定液对胃癌细胞骨架及连接蛋白荧光染色标记效果的比较被引量：1
- 2012年
- 目的通过激光共聚焦技术,观察SGC-7901胃癌细胞系在不同固定液作用下的细胞骨架及连接蛋白荧光染色。方法接种SGC-7901细胞24 h后,分别用4%多聚甲醛、2.5%戊二醛及95%乙醇室温固定20 min,5%BSA(含0.2%Triton X-100)封闭透膜1 h,直标荧光一抗避光37℃孵育1 h,DAPI室温染核15 min,激光共聚焦扫描显微镜扫描。结果 4%多聚甲醛对细胞骨架微丝结构及连接蛋白Zo-1细胞膜定位均有较好的固定作用,2.5%戊二醛对微丝结构基本起到固定作用,而95%乙醇对于微丝的固定效果略差。后两种固定液固定细胞均出现连接蛋白胞质表达的非特异染色现象。结论 4%多聚甲醛对细胞骨架及细胞间连接蛋白的固定效果较优,荧光染色标记结果为后续研究提供依据。
- 高建郑倩倩李彦姝周末
- 关键词：固定液细胞骨架连接蛋白激光共聚焦
- RUNX3通过Akt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞迁移被引量：1
- 2014年
- 目的研究RUNX3对胃癌细胞迁移的影响。方法使用Western blot、Real-time PCR分别在蛋白和基因水平上观察RUNX3对Akt/β-catenin的影响,使用细胞划痕实验观察RUNX3对胃癌细胞迁移的影响。结果 RUNX3能够下调Akt、β-catenin蛋白和基因的表达,RUNX3能够抑制胃癌细胞的迁移。结论RUNX3通过影响Akt/β-catenin抑制胃癌细胞的迁移。
- 姚远代炜李艳李妍
- 关键词：RUNT相关转录因子3Β-链蛋白免疫印迹
- GST-hVinexin融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
- 2012年
- 目的构建GST-hVinexin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hVinexin基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hVinexin,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果电泳后酶切结果证实hVinexin大小为990bp,测序证明成功构建了原核表达质粒GST-hVinexin,并诱导表达GST-hVinexin融合蛋白,进一步用Western blot方法验证了其融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-hVinexin原核表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌表达,为进一步纯化Vinexin及研究其结构与功能提供了前提基础。
- 沈涛史立伟杨礼庆巴根梁爽付勤
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 小鼠3D3／LYRIC基因重组质粒构建及蛋白表达和定位
- 2011年
- 目的构建小鼠3D3/LYRIC真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取小鼠乳腺上皮细胞系C127的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增m3D3/LYRIC全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到腺样囊性癌细胞系ACC-2中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用免疫荧光显微镜观察pEGFP-m3D3/LYRIC在腺样囊性癌ACC-2细胞内的定位。结果 m3D3/LYRIC全长基因序列克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为1 740 bp。Western blot检测到融合蛋白GFP-m3D3/LYRIC表达,分子量约为91 kDa。pEGFP-C1-m3D3/LYRIC主要在细胞质内定位,在细胞核内未见表达。结论成功构建了m3D3/LYRIC全长基因真核表达载体,pEGFP-m3D3/LYRIC蛋白主要定位于细胞质内。
- 代炜李彦姝李妍孙长伏
- 关键词：腺样囊性癌AEG-1
- hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
- 2012年
- 目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot。最后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位。结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功。Western blot检测GFP-hCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000。pEG-FP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。
- 沈涛梁峰杨礼庆李妍粱爽薛峰付勤
- 关键词：WESTERNBLOT绿色荧光蛋白质粒构建
- GST-hPlk2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
- 2012年
- 目的构建GST-hPlk2融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hPlk2基因全长,通过BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hPlk2,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,通过限制性内切酶酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-hPlk2,并用Western blot方法证实了GST-hPlk2融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-hPlk2原核表达载体,并证实了其在原核细胞E.coli中的表达,为进一步纯化Plk2及研究其结构与功能提供了前提基础。
- 沈涛杨礼庆李妍梁峰梁爽付勤
- 关键词：原核细胞融合蛋白
- 骨肉瘤细胞中SORBS1的表达和定位
- 2012年
- 目的构建人SORBS1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以GST-hSORBS1为模板,利用PCR扩增hSORBS1基因cDNA全长,并将其克隆至3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光显微镜观察3*Flag-hSORBS1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化hSORBS1蛋白。结果hSORBS1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体3*Flag中,Western blot检测到3*Flag-hSORBS1融合蛋白表达,且在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞周边,并成功纯化hSORBS1蛋白。结论成功构建3*Flag-hSORBS1真核表达质粒,同时鉴定其融合蛋白的表达,并纯化hSORBS1蛋白。3*Flag-hSORBS1蛋白主要定位在细胞周边。
- 沈涛代炜李妍许晓军巴根付勤
- 关键词：骨肉瘤真核表达载体融合蛋白免疫沉淀
- MTA1在胃癌细胞系和胃癌组织中的表达定位以及临床意义被引量：6
- 2012年
- 目的:探索肿瘤转移相关基因1(MTA1)在胃癌细胞系中的表达情况和定位,研究MTA1在胃癌组织中的表达和临床意义。方法:提取胃癌细胞系蛋白,使用Western blot技术探测内源性MTA1的表达;选取高表达MTA1的胃癌细胞株,利用共聚焦激光扫描显微镜观察MTA1的定位;收集临床胃癌组织标本,测定MTA1的表达情况。结果:在8种胃癌细胞株中有6种胃癌细胞表达MTA1,主要定位在细胞核中。在胃癌组织中,高表达MTA1的比例达到63.6%(11对样品)。结论:胃癌细胞系中表达MTA1主要定位在细胞核中。胃癌组织中高表达MTA1,对胃癌临床诊断提供理论依据。
- 姚远李艳赵鸿梅
- 关键词：肿瘤转移相关基因1胃癌
- 骨肉瘤细胞中Sestrin2的表达和定位被引量：1
- 2017年
- 目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-h Sesn2并同时检测其在骨肉瘤细胞中的表达及定位。方法:以GST-h Sesn2作为模板,利用聚合酶链反应扩增目的基因h Sesn2的c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒酶切并测序分析鉴定,转染至MG-63骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白后进行Western blot检测重组蛋白表达。此外利用荧光共聚焦激光扫描显微镜检测3*Flag-h Sesn2在MG-63细胞系中的定位,并最终利用免疫沉淀方法纯化人源Sesn2蛋白。结果:h Sesn2基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,利用Western blot检测3*Flag-h Sesn2融合蛋白表达,分子量约为55k Da。3*Flag-h Sesn2在MG-63骨肉瘤细胞系中主要定位于细胞质及核周,进一步成功纯化了h Sesn2蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Sesn2真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-h Sesn2融合蛋白的表达,最终成功纯化h Sesn2蛋白。其中3*Flag-h Sesn2蛋白主要定位在细胞质和核周。
- 沈涛陈之光李妍巴根郭然杨蕾郭洲洋付勤
- 关键词：WESTERNBLOT免疫沉淀
- Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4对胃癌侵袭转移的作用
- 2013年
- 细胞表面蛋白水解酶为丝氨酸蛋白水解酶家族,能够通过激活蛋白发挥重要的调节作用。近年来发现的多个跨膜丝氨酸蛋白酶,广泛表达于细胞膜上并参与多种细胞活动,包括细胞表面蛋白水解、胞外基质降解、与细胞骨架相互作用、细胞信号转导和侵袭转移[1]。
- 刘欢李彦姝
- 关键词：癌侵袭转移蛋白水解酶细胞信号转导细胞活动基质降解
