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哈尔滨医科大学附属第一医院科研基金(2009824)
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缺氧对视网膜色素上皮细胞基质细胞衍生因子-1和整合素连接激酶表达的影响
被引量:1
2012年
背景缺氧是诱导新生血管形成的主要因素,近年来越来越多的研究证实基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和整合素连接激酶(ILK)在新生血管性疾病中发挥着重要作用,而缺氧对视网膜色素上皮(RPE)细胞SDF-1和ILK表达的影响尚未阐明。目的探讨缺氧对体外培养RPE细胞中SDF-1和ILK表达的影响。方法从4周龄SPF级健康C57BL/6小鼠眼球中获取RPE组织并进行消化和培养,将达到80%融合的细胞进行传代。取第3代细胞制作细胞爬片后用细胞角蛋白18(CKl8)抗体进行免疫组织化学检测和鉴定,以5×104个/ml密度将RPE细胞接种于含胎牛血清的DMEM/F12培养液的培养瓶中,无血清饥饿培养24h后常氧组在常规培养基中进行培养,缺氧组在CoCl2浓度为200μmol/L的含胎牛血清的DMEM/F12培养液中进行培养,2个组根据培养时间的不同再亚分为1、3、6、12、24、48、72h组。采用逆转录PCR(RT-PCR)检测RPE细胞中SDF-1mRNA和ILKmRNA的表达,采用Westernblot检测RPE细胞中SDF-1蛋白和ILK蛋白的表达,均以目的基因A值/β-actinA值表示。结果培养的RPE细胞呈不规则多边形,细胞质内布满黑色素颗粒,90%以上的细胞对CK18呈阳性反应。随着CoCl2培养时间的延长,SDF-1mRNA和ILKmRNA的表达量逐渐增加,总体比较差异均有统计学意义(SDF-1 mRNA:F=281.875,P=0.000;ILKmRNA:F=187.566,P=0.000),12h达高峰,之后略有降低,但仍高于常氧组,缺氧1h组SDF-1mRNA及蛋白表达无明显变化;缺氧培养3、6、12、24、48、72h组SDF-1mRNA和ILKmRNA的表达量均明显高于常氧培养组,差异均有统计学意义(P〈0.01)。随着CoCl2培养时间的延长,SDF-1蛋白和ILK蛋白的表达量逐渐增加,差异均有统计学意义(SDF-1:F=44.719,P=0.000;ILK:F=144.481,P=0.000)。缺氧1h组SDF-1及ILK蛋白表达无明显变化;缺氧3、6、12、24、48、72h组SDF-1蛋�
王业青
李霞
吕勇
王健
张晓梅
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基质细胞衍生因子-1
整合素连接激酶
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