公共文化服务平台

海外青年学者合作研究基金(30228018): 作品数：11 被引量：36H指数：3; 相关作者：白云宋敏熊加祥王艳艳许雪青更多>>; 相关机构：第三军医大学成都医学院更多>>; 发文基金：海外青年学者合作研究基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

PS1/APP双转基因阿尔茨海默病模型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析被引量：15: 2006年; 目的对所获的PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(A lzhe im er d isease,AD)模型小鼠进行基因鉴定,进一步对其进行组织学分析,检测老年斑(sen ile p laque,SP)的形成情况。方法设计特定的引物,PCR扩增转入基因组DNA中的APP基因,对转入PS1/APP的小鼠应用刚果红染色结合免疫组化观察Aβ沉积、小胶质细胞和星型胶质细胞的活化。结果与未转入的阴性对照相比,在PS1/APP双转基因的AD小鼠皮质和海马内可见Aβ斑块形成,围绕在Aβ斑块周围的小胶质细胞和星形胶质细胞处于活化状态,形成典型的SP结构。结论我们获得的PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD患者脑内的主要病理过程,提供有效的实验动物模型。; 宋敏唐军李达兵徐海伟白云; 关键词：阿尔茨海默病转基因小鼠老年斑

重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达: 2007年; 目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测。PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达。结果测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功。RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达。与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高。结论成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽。; 宋敏白云段文元章波杨晓亚许雪青; 关键词：血管活性肠肽腺病毒基因治疗

星形胶质细胞调节T细胞因子的分泌: 星形胶质细胞的免疫调控功能已受到广泛关注。不同状态（静息/活化）的星形胶质细胞可调节T细胞增殖和凋亡,并影响T细胞因子的分泌。Th1和Th2型细胞因子在CNS炎性疾病的发生发展过程中发挥不同角色,本研究利用IFN-γ刺激...; 熊加祥宋敏许雪青王艳艳杨晓亚白云; 关键词：星形胶质细胞 T细胞细胞因子; 文献传递

小胶质细胞表达OX40L对T细胞增殖与凋亡的影响被引量：4: 2006年; 目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用。方法通过RT- PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋白水平的表达变化,细胞免疫化学法鉴定原代小胶质细胞上OX40L表达情况。体外将小胶质细胞株N9与活化后T细胞共培养并阻断OX40L信号后,3H-TdR掺入实验和FITC-annexin-V／PI荧光染色方法分别检测T细胞的增殖和凋亡情况,ELISA检测T细胞分泌IL-2的水平。结果小胶质细胞株N9活化前后均有OX40L表达,其蛋白表达率由23％增加为94％;原代小胶质细胞活化后表达OX40L。小胶质细胞表达OX40L后显著增强了T细胞增殖和IL-2分泌,抑制了T细胞凋亡。结论小胶质细胞活化后表达OX40L分子,OX40L-OX40信号可促进活化后T细胞增殖,抑制其凋亡,从而可能在维持中枢神经系统内T细胞免疫应答效应中发挥重要作用。有助于了解中枢神经系统内固有细胞和T细胞的相互作用机制,进一步认识OX40L的表达及功能。; 王艳艳李茂全宋敏白云; 关键词：小胶质细胞 T淋巴细胞共刺激分子 OX40L 中枢神经系统

小胶质细胞人补体攻膜复合物亚溶破模型制作及功能鉴定被引量：3: 2006年; 目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用酵母多糖激活急性期患者血清制备补体优球蛋白C56，以新鲜正常人血清（NHS）作为C7-C9来源，体外组装小鼠小胶质细胞sMAC亚溶破模型，CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量，激光共聚焦显微镜（LSCM）鉴定sMAC沉积，脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力．ELISA法测定sMAC对小胶质细胞NO和TNF—α分泌量的影响．结果：确定C561：480，NHS1：20为小胶质细胞亚溶破补体量；LSCM显示sMAC沉积于小胶质细胞表面；sMAC刺激小胶质细胞后与对照组相比细胞脱落增加（P〈0．05），而活力正常．刺激后12hNO及TNF-α分泌量比对照组显著增加（P〈0．05），不同时相观察sMAC刺激后小胶质细胞TNF—α分泌量均显著高于失活sMAC（P〈0．05）．结论：sMAC刺激小胶质细胞后分泌NO及TNF—α增多，并且可降低小胶质细胞黏附力而不影响细胞活力，推测sMAC对小胶质细胞具有炎性刺激效应．; 罗娜白云周静然宋敏王艳艳杨晓亚许雪青段文元熊加祥; 关键词：小神经胶质细胞细胞活力肿瘤坏死因子

人补体杀伤小鼠N9小胶质细胞及亚溶破模型的建立: 2006年; 目的:探讨正常人血清(norm al hum an serum,NHS)补体杀伤小鼠N9小胶质细胞的机制,建立人补体攻膜复合物(sub lytic m embrane attack comp lex,sMAC)N9细胞亚溶破刺激模型。方法:用阻断补体活化途径的方法探讨N9细胞活化人补体系统的机制;采用微量补体反应性溶破法,以酵母多糖(Zymosan,Z)活化急性期病人血清制备补体优球蛋白C56,EDTA-NHS作为C7-C9的来源,组装N9细胞sMAC亚溶破模型;CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积;脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力。结果:未致敏N9细胞可通过旁路途径直接活化人血清补体系统;当C56稀释度在1∶500以上,NHS(含1 mmol/L EDTA)稀释度为1∶20时,膜攻击复合物(m embrane attack comp lex,MAC)活性逐渐降低,细胞溶破减少,确定C56 1∶500,NHS 1∶20为N9细胞亚溶破补体量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积于N9细胞表面;亚溶破剂量MAC刺激N9细胞后与对照组相比细胞脱落增加(P<0.05),而细胞活力正常。结论:探讨了小鼠N9细胞活化人补体的机制;通过建立N9细胞人补体sMAC亚溶破模型,证实sMAC刺激N9细胞后可降低细胞黏附力但不影响细胞活力;为sMAC对中枢神经系统小胶质细胞亚溶破刺激效应的深入研究提供了理论与实验基础。; 罗娜白云周静然; 关键词：补体

小胶质细胞表达B7-H1及LPS刺激对其表达影响的研究被引量：3: 2006年; 目的了解共刺激分子B7-H1在小鼠中枢神经系统小胶质细胞上的表达,及LPS刺激后的表达变化情况,探讨小胶质细胞在大脑炎症状态下的免疫功能变化。方法利用小鼠小胶质细胞株N9,以LPS刺激其活化,应用RT-PCR、定量PCR、流式细胞术、免疫组化检测B7-H1在刺激前后的表达变化规律;分离培养小鼠原代小胶质细胞并进行GSA-IB4染色鉴定,应用免疫组化检测原代小胶质细胞在LPS刺激前后的表达变化。结果①小鼠小胶质细胞株N9在未刺激状态下表达B7-H1的mRNA和蛋白分子;LPS刺激细胞活化后释放肿瘤坏死因子α,一氧化氮增加,同时B7-H1的mRNA和蛋白表达水平增加。②分离培养的小鼠原代小胶质细胞经GSA-IB4染色鉴定纯度在95%以上,免疫组化显示原代小胶质细胞组成性表达B7-H1,LPS刺激后表达明显上调。结论小鼠小胶质细胞株N9小胶质细胞组成性表达共刺激分子B7-H1,LPS刺激后表达上调,提示其参与了中枢神经系统免疫应答的调节。; 宋敏白云王艳艳熊加祥杨旭冉罗娜; 关键词：T细胞共刺激分子小胶质细胞 LPS B7-H1

炎性介质脂多糖、γ干扰素活化星形胶质细胞效应被引量：3: 2008年; 目的研究炎性介质脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激离体星形胶质细胞的效应。方法LPS、IFN-γ刺激离体培养纯化的小鼠星形胶质细胞,ELISA检测细胞分泌TNF-α,Griess法测定NO浓度,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)。结果LPS(500ng/ml)、IFN-γ(100U/ml)刺激星形胶质细胞24h后,NO和TNF-α的分泌显著升高,联合应用有协同作用;延长IFN-γ作用时间,分泌量升高。CLSM检测LPS、IFN-γ刺激24h后的星形胶质细胞[Ca2+]i的荧光值,显示荧光相对值比正常细胞明显升高;LPS、IFN-γ急性刺激正常培养细胞发现[Ca2+]i振荡上升;而作用于IFN-γ刺激24h后的细胞,[Ca2+]i上升明显减缓。结论LPS、IFN-γ可以活化星形胶质细胞,表现为[Ca2+]i升高,TNF-α和NO分泌上调。; 熊加祥白云宋敏许雪青王艳艳杨晓亚; 关键词：脂多糖 Γ干扰素星形胶质细胞活化

PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ_(1-40)海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较被引量：4: 2006年; 目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免疫组织化学方法观察脑内Aβ沉积和星形胶质细胞的活化情况。结果①PS1/APP双转基因AD小鼠刚果红染色显示皮质和海马内广泛圆形Aβ沉积,周围绕以胶质细胞带,免疫组化显示GFAP阳性细胞活化呈团块聚集。②AD大鼠刚果红染色显示单侧海马齿回区有Aβ斑块状沉积,Nissl’s染色显示注射针道附近海马锥体层细胞丢失,注射侧海马GFAP阳性细胞增多。结论Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠尽管可以模拟人类AD疾病的部分特征病理改变,但是不能模拟疾病渐进性的病理学改变。PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理改变与渐进性过程,是较为理想的实验动物模型,但该模型未发现细胞丢失。; 李达兵唐军范晓棠宋敏徐海伟周光纪白云; 关键词：转基因小鼠 Β淀粉样多肽

载体介导的SIRNA抑制B7-H1在星形胶质细胞上的表达被引量：2: 2006年; 目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利用荧光载体N1平行观察转染效果,RT-PCR方法检测B7-H1的MRNA表达,免疫组化检测蛋白表达水平,以观察干扰效率。结果星形胶质细胞株CRL-2541经RNAI沉默后B7-H1MRNA表达下调,免疫组化发现其蛋白水平下降。结论成功建立具有双向启动子的SIRNA载体,并在星形胶质细胞中抑制B7-H1的表达。; 熊加祥许雪青白云陈雪丹王璞宋敏; 关键词：RNAI B7-H1 星形胶质细胞

海外青年学者合作研究基金(30228018)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

海外青年学者合作研究基金(30228018)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈