国家自然科学基金(81060013)
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 相关作者：李菊香程晓曙洪葵孙国芳丁浩更多>>
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- Rock可能通过抑制PI3K/Akt通路促进缺氧诱导的心肌细胞凋亡被引量：3
- 2014年
- 目的：通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用。方法：（1）原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。（2）利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1 h、3 h、6 h、9 h,以正常氧培养的心肌细胞作为对照。（3）用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTT检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表达情况。结果：（1）缺氧1 h、3 h、6 h、9 h后,心肌细胞凋亡率分别为（8.76±1.51）%、（15.36±2.34）%、（26.50±3.43）%、（41.96±4.22）%,与对照组[2.60±0.34）%]比较均有显著差异（P〈0.01）;存活率分别为（93.20±4.12）%、（86.14±3.10）%、（75.53±7.25）%、（60.21±6.75）%,与对照组[（97.60±1.12）%]比较均有显著差异（P〈0.05）。（2）ROCK-1和ROCK-2缺氧1 h即开始升高,3-6 h表达达高峰,9 h开始回落,且均明显高于对照组（P〈0.05）。（3）Caspase-3在缺氧1 h开始逐渐活化,在随后观察的时点内持续处于活化状态,与对照组比较均有显著差异（P〈0.01）。（4）p-PI3K在缺氧1 h后开始升高,3 h达高峰,6 h开始回落,9 h表达基本消失,各时点比较差别有统计学意义（P〈0.05）。结论：ROCK-1和ROCK-2在缺氧后表达逐渐升高,与细胞凋亡的过程相一致。ROCK可能通过抑制p-PI3K信号途径,促进缺氧心肌细胞凋亡。
- 董家龙李菊香孙国芳洪葵
- 关键词：心肌细胞缺氧细胞凋亡
- siRNA对人脐静脉内皮细胞中人剪切修复基因表达和凋亡的影响
- 2014年
- 目的向人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中导入靶向人剪切修复基因D干扰序列(XPD-siRNA),观察其对HUVEC的XPD基因表达和凋亡的影响。方法以XPD为靶基因,构建3个特异性siRNA重组质粒,经转染后观察其对HUVEC中XPD的沉默作用;并转染沉默效率最佳的siRNA,观察其对细胞凋亡的影响。结果Western blot和RT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,3个重组质粒XPD-siRNA的转染均能降低HUVEC中XPD的表达(P<0.01),其中XPD-siRNA-2的沉默效率最高(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,与阴性对照组相比,XPD-siRNA-2组能降低HUVEC凋亡率(P<0.01)。Western blot结果显示,与阴性对照组相比,转染XPDsiRNA-2能下调Bax(P<0.01)和上调Bcl-2(P<0.01)的表达。结论 XPD-siRNA转染能有效沉默HUVEC中XPD基因的表达。所筛选沉默效率最佳的XPD-siRNA能抑制HUVEC凋亡,而Bax和Bcl-2可能参与了此过程。
- 俞菊梅孙国芳李菊香洪葵程晓曙
- 关键词：人脐静脉内皮细胞转染
- 脂联素的抗动脉粥样硬化作用被引量：1
- 2011年
- 动脉粥样硬化是一种以慢性轻度炎症为特征的疾病。脂联素是一种由脂肪细胞分泌的血浆蛋白，具有改善胰岛素敏感性、保护内皮功能、抗炎、抗动脉粥样硬化等作用。脂联素是目前唯一被证明与心血管疾病呈负相关的一种抗炎因子，本文就脂联素的抗动脉粥样硬化作用作一综述。
- 张南李菊香
- 关键词：脂联素动脉粥样硬化炎症
- 沉默bim的表达对缺氧所致大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨唯BH3域蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧所致大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:在体外原代培养出生1～3 d的大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA。实验分组:(1)正常对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+脂质体组;(4)缺氧+阴性对照siRNA组;(5)缺氧+bim-siRNA组。倒置显微镜下观察心肌细胞的搏动频率和节律。全自动生化分析术检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,用MTT法测定心肌细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blotting检测细胞Bim、Bax、Bcl-2和p-p38 MAPK和p38 MAPK蛋白的表达。结果:免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。bim-siRNA转染均能有效沉默bim基因的表达(P<0.01),其中第2对沉默效率最高,达到86.73%。缺氧使心肌细胞的搏动频率显著减慢,节律不规则,而沉默bim基因的表达能使细胞搏动频率增加。缺氧损伤导致细胞培养液中LDH含量较空白对照组明显增加(P<0.01),心肌细胞存活率明显下降(P<0.05),细胞凋亡率较空白对照组明显增加(P<0.01),转染bim-siRNA后细胞培养液中LDH含量显著减少,细胞存活率升高,细胞凋亡率下降。缺氧损伤导致心肌细胞Bax和p-p38 MAPK表达升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01),bim-siRNA的转染能够抑制缺氧导致的上述改变(P<0.01或P<0.05),并且与心肌细胞凋亡发生率降低一致,p38 MAPK表达无明显变化。结论:沉默bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制Bax、p-p38 MAPK的表达和增强Bcl-2蛋白表达有关,这有望为冠心病的治疗提供新方向。
- 夏珍李菊香丁浩孙国芳洪葵吴延庆程晓曙
- 关键词：BIM蛋白小干扰RNA心肌细胞缺氧细胞凋亡
- shRNA沉默ROCK1和ROCK2表达对缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK1)和ROCK2在缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。将ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染细胞,48 h后给予缺氧6 h处理。实验分为5组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+阴性对照shRNA组;(4)缺氧+ROCK1-shRNA组;(5)缺氧+ROCK2-shRNA组。用倒置显微镜观察心肌细胞搏动频率与节律;用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量;用MTT检测细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用Western blotting检测ROCK1和ROCK2的表达,并检测caspase-3和p-PI3K的表达情况。结果:鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。缺氧损伤后心肌细胞搏动频率较对照组明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。全自动生化分析仪检测发现,缺氧能导致细胞培养液LDH含量升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.01)。MTT检测发现,缺氧能导致心肌细胞存活率降低(P<0.05),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,缺氧能导致心肌细胞凋亡率升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测发现,ROCK1-shRNA的转染能降低ROCK1的表达(P<0.05),ROCK2-shRNA的转染能降低ROCK2的表达(P<0.01);缺氧能导致caspase-3表达升高(P<0.05)、p-PI3K表达降低(P<0.01),ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。结论:ROCK1和ROCK2表达下调能抑制缺氧损伤导致的大鼠心肌细胞凋亡,其机制与抑制caspase-3活化和增强p-PI3K的表达有关。
- 孙国芳丁浩李菊香洪葵董家龙吴清华程晓曙
- 关键词：SHRNA缺氧细胞凋亡
- ShRNA对大鼠心肌细胞ROCK1和ROCK2表达的沉默作用被引量：1
- 2011年
- 背景:已有研究发现,ROCK1和ROCK2参与了细胞的凋亡过程,由此假设下调ROCK1和ROCK2表达能抑制心肌细胞凋亡。目的:验证ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能否有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选沉默效率最高的shRNA。方法:以ROCK1和ROCK2为靶基因,分别构建了3个特异性shRNA重组质粒,转染这些shRNA后观察其对SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的沉默作用,并筛选出沉默效率最佳的shRNA。结果与结论:WesternBlot结果显示,与对照组相比,3个重组质粒ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染均能明显降低SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达(P<0.05或P<0.01),其中ROCK1-shRNA1和ROCK2-shRNA2的沉默效率最高(P<0.05),分别为(82.15±7.53)%和(89.42±5.81)%。这表明ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选出了沉默效率最高的shRNA。
- 丁浩李菊香孙国芳洪葵程晓曙
- 关键词：短发夹RNAROCK2心肌细胞
- 心肌兴奋-收缩偶联在心力衰竭中的研究进展被引量：2
- 2014年
- 心肌兴奋-收缩偶联(ECC)是心脏电活动转换成机械收缩的过程,Ca2+释放通道(RyR2)在ECC中起核心作用。Ca2+和Na+转运参与ECC的全过程。Ca2+转运蛋白和细胞内激酶与心力衰竭的发生发展密切相关,Ca2+转运的改变常发生在心功能衰竭之前。Ca2+转运与Na+转运相互影响,细胞内Na+转运因细胞内Na+浓度和晚钠电流增加而受到干扰,舒张期Ca2+持续增加导致舒张功能障碍,并诱导心律失常。
- 李青李菊香
- 关键词：钙钙转运钠转运
- 转录因子FoxO4的研究现状被引量：3
- 2011年
- 自1989年Weigle等首次从果蝇中发现第一个Fox基因即Forkhead以来，对该基因家族的研究就一直进行着。目前发现Fox家族共有19个（A-S）亚家族，FoxO（forkhead box subtype O，FoxO）是其中研究最深的一个亚类。
- 黄茶花李菊香程晓曙
- 关键词：转录因子基因家族X基因亚家族
- 一氧化氮合酶与心房颤动
- 2013年
- 心房颤动（房颤）是临床上最常见的心律失常。研究证实，氧化应激参与房颤的发生发展，而房颤本身又加重氧化应激。氧化应激参与房颤发生的机制除与离子通道功能失调、NADPH氧化酶途径及线粒体损伤等有关外，大量证据表明其与一氧化氮合酶（NOS）密切相关。NOS是体内氧化剂来源之一，可催化一氧化氮（NO）合成，在特定条件下，NOS解偶联催化生成超氧化物阴离子，形成一种强大的自由基和氧化剂，从而促进房颤的发生与维持。
- 俞菊梅李菊香
- 关键词：房颤氧化应激一氧化氮合成酶
- 内质网应激机制与心力衰竭
- 2014年
- 内质网是细胞中蛋白质翻译合成的场所，是细胞内的钙库，调节细胞应激反应，维持细胞内稳态。适当程度的内质网应激尚能保护细胞避免损伤，而过度应激时，保护机制不能与损伤相抗衡，则会激活凋亡信号通路而导致细胞凋亡。心力衰竭是心血管疾病晚期共有的器官损害，其病理生理基础是细胞凋亡。内质网应激参与心力衰竭的发生发展，干预内质网应激可能成为心力衰竭治疗的新靶点。
- 夏珍李菊香
- 关键词：内质网应激细胞凋亡心力衰竭
