国家自然科学基金(30670986)
- 作品数：16 被引量：63H指数：6
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- Heymann肾炎RAP全长及氨基端融合蛋白表达载体的构建及表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建大鼠Heymann肾炎致病源RAP全长和氨基端多肽原核融合表达载体,表达并纯化融合蛋白。方法采用RT-PCR法获得RAP全长的cDNA,将其与pGEM-T克隆载体连接并转化,筛选阳性克隆测序;设计针对RAP全长和氨基端的引物进行PCR扩增,获得相应的DNA。纯化后与PGEX-4T-1载体连接,亚克隆到感受态细菌BL21中,经IPTG诱导,表达融合蛋白并纯化,经SDS-PAGE和Western Blot检验。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定结果表明成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083/258,并表达出RAP全长70kD和氨基端36kD的融合蛋白。Western Blot结果显示分别在70、36 kD处出现特异性条带,与理论相符。结论RAP1083/258与pGEX-4T-1融合基因表达载体的成功构建及其融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,为后续研究RAP不同区段在Heymann肾炎发病机制中的作用奠定了基础。
- 达展云范亚平董海霞施岚施辉陈晓岚
- 关键词：HEYMANN肾炎受体相关蛋白原核表达载体融合蛋白
- 低蛋白合并α-酮酸饮食对被动型Heymann肾炎大鼠肾小球足细胞Nephrin表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察低蛋白合并α-酮酸饮食对被动型Heymann肾炎大鼠肾小球足细胞Nephrin表达的影响。方法将40只SD大鼠分为对照组、模型组(PHN组)、低蛋白饮食组(LPD组)和低蛋白合并α-酮酸饮食组(LK组),对照组经尾静脉注射1 mL/100 g生理盐水,其他三组经尾静脉注射1 mL/100 g新西兰大耳兔抗FX1A血清。对照组、PHN组饮食蛋白占饲料质量的10%,LPD组饮食蛋白占饲料质量的5%,LK组饮食蛋白占饲料质量的5%(其中α-酮酸提供1%的蛋白)。4周后检测各组24 h尿蛋白定量、血清肌酐、TG、TC及血清白蛋白,激光共聚焦显微镜免疫荧光检查大鼠肾小球足细胞Nephrin表达情况。结果激光共聚焦显微镜显示,PHN组、LPD组肾小球内Nephrin荧光强度较对照组明显减弱,且部分节段有缺失;LK组肾小球内Nephrin荧光强度较对照组减弱。结论低蛋白合并α-酮酸饮食对被动型Heymann肾炎大鼠具有肾脏保护作用。
- 王锋范亚平达展云吴建华张义德
- 关键词：NEPHRIN限制蛋白质Α酮酸
- 乙肝病毒相关性膜性肾病足细胞Nephrin表达的改变被引量：8
- 2008年
- 目的:观察乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(hepatitis B virus associated membranous nephropathy,HBV-MN)肾小球足细胞Nephrin的表达,以探讨其发病意义。方法:经肾活检病理检查确诊的HBV-MN患者8例及原发性膜性肾病(IMN)患者5例,采用间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察足细胞Nephrin表达的变化。结果:HBV-MN组肾小球内Nephrin荧光强度较IMN组明显减弱,且部分节段有缺失。结论:肾小球足细胞裂孔膜蛋白Nephrin表达降低可能在HBV-MN发病中起一定的作用。
- 王锋达展云范亚平
- 关键词：乙肝病毒膜性肾病NEPHRIN
- 膜性肾病肾活检组织中TRPC6和podocalyxin表达改变及其意义被引量：5
- 2012年
- 目的检测膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者肾活检组织中肾小球足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)和podocalyxin的表达和分布,探讨足细胞蛋白TRPC6和podocalyxin在MN蛋白尿发生中的作用。方法采用常规组织病理以及免疫组化检查,并行免疫荧光双套色染色于激光共聚焦显微镜下观察TRPC6、podocalyxin在各组肾组织中表达及分布的改变,以计算机图像分析系统进行半定量分析。结果对照组肾组织podocalyxin沿肾小球毛细血管壁连续均匀分布,阳性荧光信号表达强,MN组表达减弱,且分布不均或节段性缺失,部分呈点状、短线状不连续分布,肾病综合征组较非肾病综合征组减弱更明显;TRPC6在对照组肾小球有一定的表达,沿肾小球基膜呈均匀连续线型分布,MN组TRPC6荧光强度有不同程度增强,且呈点状、团块状不均匀分布,肾病综合征组较非肾病综合征组更明显。结论 TRPC6和podocalyxin在正常肾组织沿肾小球基膜呈连续线状均匀分布;MN患者肾小球内TRPC6表达增加,podocalyxin表达减少,且分布形式亦发生变化,提示TRPC6和podocalyxin等足细胞相关蛋白表达改变及分布异常可能是MN蛋白尿发生的重要病理机制。
- 李大勇曹海霞范亚平王锋达展云张天一
- 关键词：膜性肾病蛋白尿TRPC6PODOCALYXIN
- 受体相关蛋白不同区段对Heymann肾炎大鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、synaptopodin及podocalyxin表达和分布的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察受体相关蛋白（RAP）不同区段对被动型Heymann肾炎（PHN）大鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）、synaptopodin、podocalyxin表达和分布的影响。方法给雄性SD大鼠分别注射兔抗RAP全长（RAP—FL组）、氨基端（RAP—N组）和羧基端（RAP—C组）抗血清，建立相应3种PHN模型，对照组注射等量正常兔血清。分别于造模前和造模1周末检测24h尿蛋白量、血清白蛋白和肌酐；造模1周末取大鼠肾皮质行光镜病理及间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察足细胞TRPC6、synaptopodin、podocalyxin的表达和分布。结果造模1周末各模型组24h尿蛋白量显著高于自身造模前和对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．01），血清白蛋白和肌酐无明显改变。光镜下各模型组均见肾小球基底膜节段性不均匀增厚，系膜细胞和系膜基质无明显增生。间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察显示，对照组足细胞TRPC6、synaptopodin、podocalyxin沿肾小球基底膜呈均匀、连续线样分布；各模型组TRPC6沿肾小球基底膜呈团块状不均匀分布，荧光强度较对照组有不同程度增强，RAP—FL组较RAP-N组和RAP—C组更为明显，差异有统计学意义（P〈0．05），RAP—N组和RAP—C组间差异无统计学意义（P〉0．05）；各模型组synaptopodin和podocalyxin沿肾小球基底膜呈点状、短线状不连续分布，部分节段表达缺失，荧光强度较对照组均有不同程度的减弱，差异均有统计学意义（均P〈0.05）；各模型组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论RAP全长及其羧基端与氨基端均存在病理性抗原决定簇，在PHN模型中可上调TRPC6表达，但下调synaptopodin和podocalvxin表达，并改变它们的分布模式，与PHN蛋白尿的发生有关，但在PHN发病中的病理作用仍有待进一步研究。
- 曹海霞李大勇范亚平达展云王锋陈晓岚吴亚君施岚
- 关键词：受体相关蛋白SYNAPTOPODINPODOCALYXIN
- 2种Heymann肾炎受体相关蛋白融合蛋白的制备及其意义被引量：1
- 2009年
- 目的:构建Heymann肾炎致病原受体相关蛋白(RAP)全长和羧基端多肽的原核融合表达载体,表达并纯化相应的融合蛋白。方法:通过RT-PCR法获得RAP全长的cDNA,将其与pGEM-T克隆载体连接并转化,对阳性克隆进行测序分析,设计针对RAP全长和羧基端带有EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点的特异引物,通过PCR合成RAP全长359个氨基酸和羧基端108个氨基酸的DNA。纯化后与含有GST的pGEX-4T-1载体体外重组连接,亚克隆到感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,表达的融合蛋白通过GST-Sepharose 4B亲和层析法纯化,并经SDS-PAGE和Western Blot检测。结果:酶切分析、PCR及DNA序列测定结果表明成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083和pGEX-4T-1-RAP324,含有重组质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达出RAP全长70ku和羧基端40ku的融合蛋白。Western Blot结果显示分别在分子质量70ku、40ku处出现特异性条带,与理论相符。结论:成功构建了RAP1083、RAP324与pGEX-4T-1融合基因表达载体,融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续研究Heymann肾炎的分子发病机制奠定了基础。
- 达展云范亚平张伟兰施岚施辉陈晓岚
- 关键词：肾小球肾炎基因表达重组融合蛋白质类
- 足细胞抗原与肾小球疾病被引量：4
- 2009年
- 肾小球足细胞的损伤及其相关蛋白的表达异常是蛋白尿形成的主要原因,足细胞表面抗原在肾小球疾病发病机制中发挥了重要作用。人类膜性肾病第一个足细胞抗原-中性内肽酶以及第一个裂孔隔膜组成分子Nephrin的发现开辟了足细胞研究的新纪元。随着足细胞抗原在肾小球疾病及蛋白尿产生机制中的深入研究,将为临床进一步揭示肾小球疾病的发病机制和寻找特异有效的防治蛋白尿的新的分子靶点提供理论依据。
- 达展云范亚平
- 关键词：足细胞抗原肾小球疾病
- Nephrin和Podocin在3种膜性肾病表达中的差异及其意义被引量：9
- 2009年
- 目的比较足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和Podocin在特发性膜性肾病(IMN)及两种常见继发性膜性肾病V型狼疮性肾炎(LN-V)与乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)中表达的差异,探讨Nephrin和Podocin在膜性肾病发病中的作用。方法选取2005年1月～2008年6月行肾穿刺活检确诊的IMN15例、LN-V12例、HBV-MN9例,另取5例正常肾脏组织作对照,收集尿常规、24h尿蛋白定量、肝肾功能、血脂和尿C3等临床检验指标,肾组织标本行间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察各组足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和Podocin表达的改变。结果3组病例24h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐和尿C3差异无统计学意义,LN-V组尿红细胞计数高于IMN组,LN-V组及HBV-MN组血清总胆固醇、三酰甘油低于IMN组;间接免疫荧光激光共聚焦显微镜显示3组膜性肾病Nephrin和Podocin表达均较对照组减弱,但以IMN组最为明显,LN-V与HBV-MN两组间无差别。结论足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和Podocin在原发性及继发性膜性肾病中表达均减弱,免疫介导的足细胞损伤所致足细胞裂孔膜蛋白减少可能参与了原发性与继发性膜性肾病蛋白尿的发生;但IMN中Nephrin、Podocin表达减弱较继发性膜性肾病更为明显,推测后者蛋白尿的发生还有其他因素参与。
- 达展云范亚平沈良兰施岚王锋刘海泉
- 关键词：特发性膜性肾病V型狼疮性肾炎足细胞PODOCIN
- Heymann肾炎受体相关蛋白羧基端融合蛋白的表达及其对nephrin表达和分布的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨Heymann肾炎（HN）受体相关蛋白（RAP）羧基端抗原决定簇在HN发病机制中的作用。方法通过PCR及分子克隆技术，构建RAP全长和羧基端多肽的原核融合表达载体，表达融合蛋白，制备针对RAP全长和羧基端融合蛋白的抗血清，免疫荧光法检测其在肾组织中的定位。利用该抗血清制备两种HN模型，测定24h尿蛋白定量，免疫荧光法检测肾组织中nephrin表达和分布，并比较组间差异。结果成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083/324，表达了RAP全长（相对分子质量，70×10^3）和羧基端（40×10^3）的融合蛋白，并制备了相应的抗血清，免疫荧光显示制备的两种抗血清均对肾小管上皮细胞有高亲和性。利用两种抗血清成功制备了HN模型，模型组大鼠24h尿蛋白定量分别达（21．31±4．15）mg和（19．054±3．72）mg，与正常对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。nephrin在RAP324诱发的大鼠HN肾组织中表达较RAP1083嘲中减弱明显。结论Heymann肾炎RAP羧基端存在病理性抗原决定簇，能够诱发大鼠HN模型。nephrin在两种HN中表达减少，推测RAP作用机制与减少肾小球内nephrin的表达有关。
- 达展云范亚平施岚钱捷郭根凯管青聪陈桢
- 关键词：HEYMANN肾炎受体相关蛋白羧基端足细胞NEPHRIN
- 膜型狼疮肾炎中NEPH1与Nephrin的研究被引量：4
- 2010年
- 目的 研究肾小球足细胞相关蛋白NEPH1和Nephrin在膜型狼疮肾炎（V-LN）蛋白尿产生中的作用.方法 选择V-LN 25例,18例同期住院的特发性膜性肾病（IMN）作对照,另取5例因肾脏肿瘤行一侧肾切除的远端相对正常肾脏组织作为健康对照 检测尿常规、尿蛋白定量（24 h）、肝功能、肾功能、血脂、血清补体、尿补体（C3）及尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）,2组病例肾组织作常规病理检查和NEPH1、Nephrin免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察NEPH1、Nephrin表达和分布的变化,组间两两比较采用t检验.结果 2组病例尿蛋白定量（24 h）[（3.5±0.6）和（3.7±0.7）g]、血清白蛋白[（26±3）和（24±3）g/L]、血清肌酐[（108±9）和（102±8）μmol/L]、尿C3[（3.4±0.8）和（3.8±1.1）mg/L]差异无统计学意义（P〉0.05）,V-LN组血清总胆固醇[（6.3±0.9）mmol/L]、甘油三酯[（2.0±0.3）mmol/L]、血清补体C3[（0.40±0.16）g/L]、C4[（0.05±0.02）g/L]均低于IMN组[分别为（9.2±1.3）、（3.7±0.5）mmol/L,（0.72±0.06）、（0.12±0.01）g/L]（P〈0.05）,而V-LN组尿红细胞和尿NAG（P〈0.05,P〈0.01）均高于IMN组 间接免疫荧光显示V-LN及IMN患者肾组织中NEPH1、Nephrin的表达均减弱,但V-LN组的表达减弱不如IMN组明显.结论 足细胞相关蛋白NEPH1、Nephrin表达下降可能参与了LN蛋白尿的发生,其他机制如肾小管上皮细胞的损害可能在V-LN蛋白尿的发生中也起了一定作用.
- 达展云施岚郭根凯钱捷顾志峰曹海霞李大勇范亚平
- 关键词：狼疮肾炎蛋白尿生物医学研究
