北京市自然科学基金(5102036)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：李艳华裴雪涛张静陈琳岳文更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京中兴医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金更多>>
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- 神经元限制性沉默因子在NTera2/CloneD1细胞向神经元分化模型中表达的检测
- 2011年
- 目的:建立NTera2/CloneD1细胞向神经元分化的模型,检测神经元限制性沉默因子(NRSF)经分化培养基诱导后表达的变化。方法:收集正常培养的NTera2/CloneD1细胞及经全反式维甲酸(RA)、阿糖胞苷(AraC)、尿苷分阶段诱导共28 d的细胞,显微镜下观察诱导前后细胞的形态学变化;免疫荧光法检测NTera2/CloneD1细胞诱导前后干性标志Nestin、Sox2和成熟神经元特异性标志NF-200、β-tubulinⅢ的表达情况;应用RT-PCR和免疫荧光法对NRSF进行mRNA和蛋白水平的检测。结果:显微镜下观察到正常培养的NTera2/CloneD1细胞呈克隆样生长,经分化培养基诱导后的NTera2/CloneD1细胞表现出典型的神经元样细胞形态。免疫荧光检测表明,未诱导的NTera2/CloneD1细胞表达神经干细胞的标志Sox2、Nestin,不表达成熟神经元特异性蛋白NF-200、β-tubulinⅢ;而经RA等诱导分化的细胞则不表达Sox2、Nestin,表达NF-200、β-tubulinⅢ。RT-PCR和免疫荧光检测显示,NRSF在诱导分化后的NTera2/CloneD1细胞中的表达量显著降低。结论:建立了NTera2/CloneD1细胞向神经元分化的模型,NRSF在诱导后的NTera2/CloneD1细胞中表达量显著下调,提示NTera2/CloneD1细胞在诱导过程中可能通过下调NRSF,使受到NRSF负性调控的神经元特异性蛋白启动表达并上调,进而实现NTera2/CloneD1细胞向神经元的定向分化。
- 张静王思涵张博文姚海雷陈琳吕洋南雪岳文李艳华裴雪涛
- 关键词：神经元分化神经元限制性沉默因子
- 神经元限制性沉默因子与胰岛素在成年小鼠胰腺中的表达
- 2011年
- 目的:观察神经元限制性沉默因子(NRSF)在正常成年小鼠胰腺组织中的表达情况。方法:以6～8周BALB/c小鼠胰腺为实验材料,制备冰冻切片,与地高辛标记的NRSF cDNA探针进行原位杂交,观察mRNA表达,并结合免疫组织化学方法检测NRSF和胰岛素的表达。结果:原位杂交显示,NRSF mRNA仅表达于胰腺组织外分泌部腺泡腺细胞中,胞浆呈蓝紫色,与免疫荧光组织化学检测NRSF蛋白表达的部位一致,而胰岛细胞中无NRSF mRNA及蛋白的表达。免疫酶组织化学染色显示,胰岛大部分细胞中表达胰岛素,胞浆染成黄棕色,而腺泡腺细胞则不表达胰岛素。结论:NRSF与胰岛素不存在共定位关系,即成年小鼠胰岛细胞不表达NRSF,而表达胰岛素。提示NRSF蛋白表达的消失可能是建立完全分化成熟、具有完好分泌反应的胰岛细胞所必需的。
- 陈琳郭小丽岳文吕洋谢小燕姚海雷陈海旭南雪李艳华裴雪涛
- 关键词：神经元限制性沉默因子胰岛素胰岛细胞原位杂交
- 内含子序列对CART基因转录调控作用的初步研究被引量：6
- 2011年
- 目的研究内含子序列对可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)基因转录水平的调控作用。方法分别以HeLa细胞和人源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因组DNA为模板,PCR扩增CART内含子Ⅰ(Intron)、CART截短内含子Ⅰ(去除NRSE基序,NRSEnonIntron)序列,克隆入载体pGL3-Basic-CART32,构建pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron荧光素酶报告载体。经质粒酶切和DNA测序进行鉴定。将报告载体瞬时转染入NT2/CloneD1细胞系,进行荧光素酶活性的分析。取1×107NT2/CloneD1细胞,采用抗NRSF和抗IgG抗体进行染色质免疫共沉淀,分析NRSF与CART内含子区NRSE的体内结合情况。结果构建的pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnonIntron报告载体经酶切和测序鉴定正确。pGL3-Basic-CART32-Intron荧光素酶活性相对pGL3-Basic-CART32下调57.9%(P<0.05),pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron相对pGL3-Basic-CART32-Intron上调53.8%(P<0.05)。在NT2/CloneD1细胞中,CART内含子区NRSE调控元件能与NRSF蛋白结合。结论研究结果表明,CART内含子序列对CART基因转录发挥负调控作用,内含子中的NRSE序列参与介导了其对CART基因的转录负调控作用。
- 张静王思涵杨印祥姚海雷陈琳吕洋南雪岳文李艳华裴雪涛
- 关键词：可卡因-苯丙胺调节转录肽内含子转录调控神经元限制性沉默因子
- 神经元限制性沉默因子在干细胞发育及分化中的作用
- 2011年
- 神经元限制性沉默因子NRSF/REST(neuron-restrictive silencer factor,NRSF;又称RE-1 silencing transcription factor,REST)是一种具有锌指结构的蛋白质,通过与特异的作用元件NRSE(neuron-restrictive silencer element,NRSE;又称Repressorelement,RE1)相结合,调节靶基因的转录.NRSF/REST通过与多种辅助因子的相互作用不同程度地影响靶基因的表达,其功能受到干扰则导致多种病理状态.近年来研究表明,NRSF/REST蛋白参与调控胚胎干细胞自我更新和全能性的维持,及干细胞的定向分化等多个生理过程.综述了最近NRSF/REST的研究进展,探讨其在胚胎干细胞自我更新、胚胎早期发育,以及干细胞向神经元、胰岛细胞分化中的作用.
- 张静李艳华裴雪涛
- 关键词：神经元限制性沉默因子胚胎干细胞神经元胰岛细胞分化
