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8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在快速老化小鼠SAMP8海马中表达的增龄性变化研究被引量：1: 2009年; 目的观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-7,8-dihydroguanine,8-oxo-dG)在快速老化小鼠SAMP8海马不同区域的表达,探讨其变化与SAMP8增龄的关系。方法选用1、4、8、12月龄快速老化小鼠SAMP8(每组各6只),对照组为同龄抗快速老化小鼠SAMR1(每组各6只),用免疫组化法检测海马不同区域内8-oxo-dG的表达水平。结果8-oxo-dG在海马不同区域均有表达,且主要在海马神经细胞胞核内表达。对照组SAMR1小鼠海马各区域8-oxo-dG的吸光度定量结果显示各月龄组间无统计学差异(P>0.05);1、4月龄组SAMP8小鼠海马各区域8-oxo-dG的吸光度定量结果与同龄匹配的SAMR1小鼠间无统计学差异(P>0.05);8、12月龄组SAMP8小鼠海马各区域8-oxo-dG的吸光度定量结果分别显著高于1月龄和4月龄组(P<0.05),也分别显著高于同龄SAMP1对照组(P<0.05)。结论8-oxo-dG在SAMP8快速老化小鼠海马中的水平随增龄而显著增高。; 郑君德宋晓宁林静蔡剑平; 关键词：SAMP8 阿尔茨海默病

氧化应激与老年性痴呆发病的相关性研究被引量：14: 2008年; 氧化应激作为老年性痴呆的发病机制之一越来越受到学术界关注。活性氧可氧化DNA、RNA和蛋白质导致基因突变、转录错误、转录效率降低、翻译错误,以及影响蛋白质正常功能的发挥。该文就氧化应激对DNA、RNA和蛋白质的氧化损伤与老年性痴呆发病的相关性进行综述。; 郑君德宋晓宁林静蔡剑平; 关键词：老年性痴呆 DNA RNA 蛋白质氧化应激

MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响被引量：2: 2011年; 目的建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响。方法设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包装病毒颗粒,将病毒转染HeLa细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性克隆株,用western b lot技术检测克隆株的MTH1的表达量以确定干扰效果最理想的稳定细胞株,用API5000型质谱仪检测稳定细胞株RNA中的8-oxoG与G的含量以评价RNA的氧化程度。结果本研究设计的3条siRNA中有2条干扰效率可达90%以上,所建立的敲减MTH1基因HeLa细胞稳定细胞株的干扰效果达80%以上,质谱检测结果表明MTH1基因低表达的稳定细胞株每106个G中含有14.9个8-oxoG,而对照细胞中则仅含9.7个8-oxoG。结论 MTH1基因的低表达可引起HeLa细胞中RNA氧化程度明显升高。; 戴大鹏干伟张立群聂犇徐仁爱蔡剑平; 关键词：RNA干扰

MTH2蛋白与8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在阿尔茨海默病患者海马组织中的表达变化被引量：1: 2009年; 目的:观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)及8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxodG)在阿尔茨海默病(AD)患者海马组织标本中的表达变化,探讨在AD患者海马中二者表达的相关性。方法:选用临床及病理均诊断为AD的尸检海马组织石蜡切片作为实验组,年龄匹配且临床及病理诊断均排除AD的尸检海马组织石蜡切片作为对照组,每组各3例,用免疫组化的方法分别检测人脑海马中8-oxo-dG的含量及MTH2蛋白的表达。结果:免疫组化定量结果显示,在人脑海马组织CA1及CA3区,AD患者8-oxo-dG的表达显著高于年龄匹配对照组,而AD患者MTH2的表达显著低于年龄匹配的对照组。结论:在人脑海马组织中,DNA氧化产物8-oxo-dG含量在AD患者比年龄匹配对照组有显著提高,抗氧化修复蛋白MTH2的表达量却显著降低,提示人脑海马组织中MTH2蛋白表达量的减少及8-oxo-dG含量的增加与AD的发病过程相关。; 宋晓宁郑君德刘东戈黑爱莲蔡剑平; 关键词：阿尔茨海默病

快速老化小鼠SAMP8海马组织中基因表达谱的研究被引量：1: 2010年; 目的观察快速老化小鼠P8(SAMP8)与同龄正常老化小鼠R1(SAMR1)海马组织中基因表达谱的差异。方法选用1、4、6、8、12月龄的SAMP8小鼠,用SAMR1作为对照组,每组各9只,快速处死后取海马组织提取总RNA,用纯化后的总RNA合成cDNA并标记荧光染料,与32k小鼠寡核苷酸微阵列芯片杂交,用共聚焦扫描仪LuxScanTM10KA及LuxScan3.0软件进行图像采集与数据处理,用SAM软件分析差异表达的基因,用MAS系统对差异基因进行通路(pathway)分析。结果正常老化小鼠SAMR1各月龄间表达谱差异无显著性,快速老化小鼠SAMP8各月龄间差异显著,两种品系小鼠的比较结果显示1月龄、12月龄基因表达差异最为显著,6月龄无显著差异。Pathway分析结果显示MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。结论SAMP8小鼠与SAMR1小鼠海马的基因表达存在明显的差异,以MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。; 戴大鹏宋晓宁郑君德蔡剑平; 关键词：快速老化小鼠基因芯片

MTH2蛋白在快速老化P8小鼠海马中表达的增龄性变化被引量：6: 2008年; 目的观察8氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2（MTH2）在快速老化P8小鼠（SAMP8）海马中的表达，探讨其与SAMP8增龄性变化的关系。方法该实验选用1、4、8、12月龄的sAMP8及同龄的抗快速老化R1小鼠（SAMR1）作为实验对象，每组8只，用免疫组化和免疫印迹法分别检测海马中MTH2蛋白的表达。结果免疫组化结果显示，MTH2主要在SAMP8神经元胞浆内表达；海马不同区域均有表达，尤以CA1和CA3区表达最多。定量结果显示，SAMR1海马各区域MTH2的表达随增龄无显著性改变；而在SAMP8MTH2的表达随月龄增加而下降，8月龄海马CA1区的吸光度值（A值）为0．0473、CA3区为0．0510，显著低于4月龄海马CA1区的0．0619、CA3区的0．0680；12月龄海马CA1区的A值为0．0369、CA3区为0．0465，显著低于8月龄；8月和12月龄A值SAMP8分别显著低于同龄的SAMR1（P〈0．05）。免疫印迹结果显示，4～12月龄SAMP8海马内MTH2表达的灰度值（greylevel）分别为0．529、0．313、0．032，显著低于同龄SAMR1（P〈0．05）。结论MTH2蛋白的表达量在SAMP8随增龄而下降，8月龄和12月龄SAMP8的MTH2蛋白表达量与同龄对照组比较差异有统计学意义，提示MTH2蛋白表达量的减少与SAMP8的快速老化相关。; 郑君德宋晓宁蔡剑平; 关键词：衰老阿尔茨海默病

8-oxo-G在快速老化小鼠SAMP8海马中表达的增龄性变化研究被引量：2: 2008年; 目的观察8-氧鸟嘌呤核苷(8-oxo-G)在SAMP8品系快速老化小鼠海马不同区域的表达,以探讨其与SAMP8小鼠增龄性变化的关系。方法选用1、4、8、12月龄的快速老化小鼠SAMP8以及同龄抗快速老化小鼠SAMR1(对照组),每组各6只,采用免疫组化方法检测小鼠海马不同区域8-oxo-G的表达。结果8-oxo-G主要在SAM小鼠海马神经元胞浆内表达。对照组SAMR1 1月龄小鼠海马CA1和CA3区8-oxo-G表达显著高于其他月龄组(P<0.05),4、8、12月龄小鼠间其表达差异无统计学意义(P>0.05);SAMP8 12月龄小鼠海马8-oxo-G的表达显著高于1、4、8月龄组(P<0.05);SAMP8和SAMR1小鼠之间比较,1、4月龄间差异无统计学意义(P>0.05),8、12月龄间差异有统计学意义(P<0.05)。结论SAMP8小鼠海马8-oxo-G的表达除1月龄外随月龄增加而增加,提示8-oxo-G的表达增加与SAMP8小鼠的快速老化相关,有可能为增龄,甚至AD的生物学标志。; 宋晓宁郑君德林静蔡剑平; 关键词：SAMP8 阿尔茨海默病

淀粉样前体蛋白在快速老化痴呆小鼠P8海马中表达的免疫组化学研究被引量：4: 2007年; 目的:观察淀粉样前体蛋白(APP)在快速老化痴呆小鼠P8(SAMP8)海马中的表达,探讨其与SAMP8小鼠增龄性变化的关系。方法:选用1、4、8、12月龄的SAMP8,用同龄正常老化小鼠R1(SAMR1)作为对照组,每组各8只,用免疫组化方法检测海马区APP的表达。结果:APP主要在SAM鼠海马神经元胞浆内表达,海马不同区域均有表达。定量结果显示对照组SAMR1小鼠海马各区域APP的表达随月龄增加无显著性改变(P>0.05);而SAMP8小鼠APP的表达则随月龄增加而增加,8月龄和12月龄SAMP8小鼠CA1区的表达量显著高于1月龄组(P<0.05),也分别显著高于同月龄对照组(P<0.05),CA3区APP的改变稍晚于CA1区,与同品系1月龄小鼠及同龄对照组比较,12月龄时显示有显著性增加(P<0.05)。结论:SAMP8小鼠海马APP的表达随月龄增加而增加,提示APP表达量的增加与SAMP8小鼠的快速老化相关。; 郑君德宋晓宁蔡剑平; 关键词：淀粉样前体蛋白氧化应激阿尔茨海默病

一种快速构建单靶或双靶基因位点RNAi质粒载体的方法被引量：1: 2009年; 目的开发一种快速构建RNA干扰(RNAi)质粒载体的方法。方法以pBluescriptⅡ质粒载体为母体,逆向导入人U6和H1启动子序列,仅用两条互补的寡核苷酸链,可快速构建单靶基因位点RNAi质粒载体;利用RNAi表达框两侧的MunⅠ及EcoRⅠ酶切位点,将多个干扰表达框串联,可快速构建多靶基因位点RNAi质粒载体;根据以上原则,构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因和萤火虫荧光素酶(LUC)基因的单靶点及双靶点RNAi质粒载体,以检测其干扰效果。结果构建的RNAi质粒载体可产生较理想的干扰效果,单靶点RNAi载体的干扰效率可达90%,双靶点RNAi载体的干扰效率可达87.5%。结论该方法可快速构建单靶点及双靶点的RNAi质粒载体,可在同一细胞内同时对多个靶基因实施有效的RNA干扰。; 戴大鹏蔡剑平; 关键词：RNA干扰

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国际科技合作与交流专项项目(2006DFB31410)

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