重庆市卫生局科研项目(05-1-017)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘洛同顾应江郭宗铎孙晓川郐莉更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院泸州医学院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目四川省教育厅青年基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人APOEε2及ε4等位基因修饰的神经干细胞的建立被引量：1
- 2010年
- 目的构建APOEε2和APOEε4的真核表达载体,转染APOE敲除鼠神经干细胞,分别建立转染APOEε2和ε4的神经干细胞系。方法以前期克隆得到的APOEε3cDNA为基础,通过定点突变技术得到APOEε2和APOEε4cDNA,亚克隆入表达载体pEGFP-N1,构建pEGFP-N1-APOEε2及pEGFP-N1-APOEε4的真核表达载体,经双酶切和测序确定序列及阅读框正确。以脂质体转染法转染APOE敲除鼠神经干细胞,通过G418筛选,建立转染APOEε2和ε4的神经干细胞系。采用RT-PCR、Westernblot及免疫荧光法检测APOE的表达。结果APOE敲除鼠NSCs转染6h后发出绿色荧光,48h达到高峰,荧光显微镜下观察转染率约(40.0±2.3)%,转染pEGFP-N1-APOE的NSCs在筛选至第10天可见细胞克隆形成。经鉴定保持了自我更新、多向分化保持性,其中分化为神经元的比例为(32.15±2.61)%,各组之间无明显差异。结论成功构建了稳定表达源性APOEε2及ε4的神经干细胞克隆,相应等位基因修饰的神经干细胞能高效表达目的基因蛋白并保留其干细胞特性。
- 江涌吴海涛孙晓川陈礼刚郐莉郭宗铎顾应江刘洛同
- 关键词：载脂蛋白E类等位基因真核表达载体神经干细胞
