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国家自然科学基金(81102714): 作品数：14 被引量：68H指数：5; 相关作者：张韧林海雄王晓彤邝枣园孙砚辉更多>>; 相关机构：广州中医药大学广州中医药大学第一附属医院广东省中医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省大学生创新实验项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

玉竹及其多糖对2型糖尿病大鼠血糖血脂及坐骨神经NGF mRNA表达的影响被引量：14: 2017年; 目的:探索玉竹及其多糖对2型糖尿病大鼠血糖血脂及坐骨神经NGF mRNA表达的影响。方法:用高脂饲料联合链脲佐菌素构建2型糖尿病大鼠模型,建模后,空白组和模型组以生理盐水灌胃,玉竹多糖组予玉竹多糖0.5g/(kg·d)腹腔注射,玉竹中高剂量组分别予1.35、2.7 g/(kg·d)的剂量灌胃,二甲双胍组予0.5g/(kg·d)灌胃。治疗4周后,测定餐后0、2 h血糖,取胰脏做病理切片,测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平和坐骨神经NGF mRNA的相对表达量。结果:玉竹及其多糖干预后,大鼠胰岛细胞排列较为紧密,坏死细胞减少,餐后2h血糖除了玉竹中剂量组外均明显降低(P<0.05),餐后0 h血糖、TG水平均降低(P<0.05),坐骨神经NGF mRNA相对表达量增高(P<0.01)。结论:玉竹及其多糖通过改善胰脏功能,提高降糖降脂作用,其防治糖尿病局部神经病变的机制可能与上调坐骨神经NGF mRNA表达水平有关。; 王晓彤林海雄郭爱琳李志城丘树林李明珠张韧; 关键词：玉竹胰脏血糖血脂 NGF

人ApoC-Ⅰ基因的克隆、原核表达与纯化: 2015年; 【目的】进行含信号肽ApoC-Ⅰ(signal-ApoC-Ⅰ)和ApoC-Ⅰ成熟肽(mature-ApoC-Ⅰ)的基因克隆、原核表达和纯化。【方法】取肝癌切除手术患者的癌旁组织,提取总RNA后,逆转录成c DNA,并设计带酶切位点的特异引物分别扩增出signal-Apo C-Ⅰ、mature-Apo C-Ⅰ基因;将扩增出的基因通过T克隆入PMDTM19-T载体;T克隆经测序验证后,双酶切出目的基因,连入同样双酶切后的PET28a载体,构建原核表达质粒;再次测序验证后,将质粒转入BL21Star(DE3)中,表达条件优化后进行融合表达;将表达后产物用Ni-NTA树脂亲和层析进行重组蛋白纯化;纯化产物采用Western blot进行验证。【结果】构建了PET28a-signal-ApoC-Ⅰ、PET28a-mature-Apo C-Ⅰ表达质粒,重组质粒都经过测序鉴定正确;PET28a-signalApoC-Ⅰ诱导表达后能抑制宿主菌生长,但经过条件优化2个表达质粒都在BL21Star(DE3)菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大量表达和纯化,Western blot证实了表达的结果。【结论】含信号肽ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅰ成熟肽的基因克隆、原核表达和纯化成功,为进一步研究重组人Apo C-Ⅰ的作用奠定了基础。; 谢伟群邝枣园孙砚辉张晓圆陈健刘思颖张韧; 关键词：基因克隆基因表达蛋白纯化

桂皮醛对肾阳虚大鼠GABAa受体mRNA表达的影响被引量：4: 2016年; 目的探讨桂皮醛对肾阳虚大鼠γ-氨基丁酸(GABA)受体mRNA表达的影响。方法采用腺嘌呤皮下注射(剂量为0.2 g·kg-1·d-1)构建肾阳虚大鼠模型,桂皮醛灌胃(高、中、低剂量分别为0.4,0.2,0.1 g·kg-1),观察各组大鼠外观及肾脏切片,测定自主活动度,实时荧光定量PCR法测定GABAa受体mRNA的表达。结果造模后,大鼠睾丸增大,体重减轻(P<0.05);肾皮质固缩,与髓质界限不清,有灰褐色沉积物;与模型组比较,各给药组大鼠自主活动度明显降低(P<0.05),GABAa受体mRNA表达显著增高(P<0.05)。结论桂皮醛短时间内未能明显改善阳虚症状,但可能通过提高GABAa受体mRNA表达水平发挥镇静作用。; 王晓彤林海雄杜秀婷刘敏马博张徐雯张韧; 关键词：桂皮醛肾阳虚病理基因表达调控

苏子降气汤对慢性支气管炎模型小鼠TNF-α、IL-8表达的影响被引量：18: 2015年; 目的探究炎性细胞因子TNF-α和IL-8在慢性支气管炎模型小鼠中的表达及苏子降气汤对慢性支气管炎的影响机制。方法将27只小鼠随机分为空白组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组,使用烟熏法联合LPS构建慢性支气管炎小鼠模型,造模共32天,以苏子降气汤进行小鼠灌胃干预,连续用药11天后检测小鼠血清中TNF-α和IL-8的含量,并观察气管及肺部组织结构病理形态的变化。结果与空白组相比,模型组血清中IL-8、TNF-α浓度明显升高(P<0.01);治疗后,与模型组相比,高、低剂量组小鼠的血清中IL-8、TNF-α浓度均显著降低(P<0.01),且中药高剂量组比中药低剂量组的降低更为显著(P<0.01);从各组的病理切片可观察到模型组小鼠肺组织、支气管、粘膜上皮、肺泡等结构出现不同程度的病变,中药干预后,小鼠肺部组织结构得到一定的改善。结论苏子降气汤对慢性支气管炎小鼠有一定的治疗作用,其作用机制可能通过抑制炎症发生过程中炎性细胞因子的生成从而达到抗炎作用。; 杜秀婷林海雄卓桂锋王晓彤林锐珊张韧; 关键词：苏子降气汤慢性支气管炎 TNF-Α IL-8

参苓白术散对高脂血症小鼠血糖血脂及瘦素水平的影响被引量：11: 2017年; 目的:探讨参苓白术散对高脂血症小鼠总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血糖(Glu)及瘦素(Lep)的影响。方法:将小鼠分成3组,空白组(普通饲料+生理盐水),模型组(高脂高糖饲料+生理盐水),参苓白术散组(高脂高糖饲料+参苓白术散)。各组经饲养20 d后筛选合格小鼠灌服相应药物21 d,测定体重、附睾周围脂肪质量、Lee’s指数、血清TC、HDL-C、血糖及Lep的变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠体重、附睾周围脂肪质量、Lee’s指数、TC、Glu及Lep水平均显著增高(P<0.05),HDL-C显著降低(P<0.05);与模型组比较,参苓白术散组小鼠TC、Lep水平均显著降低(P<0.05)。结论:参苓白术散可降低高脂高糖小鼠TC、Lep水平,其调脂作用可能与改善瘦素抵抗有关。; 林海雄王晓彤王菁陈秒旬张晓莹招文华张学武邓银河张韧邝枣园; 关键词：参苓白术散高脂血症瘦素

人参皂苷Rh2对LoVo细胞迁移和转移能力的影响及机制研究被引量：2: 2016年; 【目的】探讨人参皂苷Rh2对人结肠癌Lo Vo细胞迁移和转移能力的影响。【方法】通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定不同浓度Rh2对Lo Vo细胞增殖的影响,并确定用于研究抑制Lo Vo细胞迁移和转移功能作用的Rh2浓度和作用时间。设置空白对照组及Rh2实验组（5、10、20、40、60μmol/L）,通过划痕试验,对Lo Vo细胞划痕加药处理24 h后,观察不同浓度Rh2对细胞迁移的影响。采用Transwell法观察不同浓度Rh2对细胞转移的影响。采用Western blot检测不同浓度Rh2对CD44、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）、E-Cadherin和β-catenin表达水平的影响。【结果】MTT结果显示：0～40μmol/L Rh2处理Lo Vo细胞24 h对其生长无明显影响。随Rh2作用时间的延长和浓度的增加,Rh2对Lo Vo细胞抑制作用逐步增强。划痕试验和Transwell结果表明：随着Rh2浓度增加,其对Lo Vo细胞迁移和转移能力的抑制作用增强,20μmol/L以上浓度的Rh2处理Lo Vo细胞24 h与空白对照组比较具显著抑制作用。Western blot结果表明：随着Rh2浓度的升高,CD44、MMP2蛋白表达水平下降,TIMP2、E-Cadherin和β-catenin蛋白表达水平上升。【结论】人参皂苷Rh2对人结肠癌Lo Vo细胞迁移和转移能力有抑制作用,其抑制作用具有时间和浓度依赖性。; 张晓圆李荣江孙继贤孙砚辉张苗苗伍志学张韧邝枣园; 关键词：人参皂苷RH2 LOVO细胞细胞迁移细胞转移细胞培养

UQCRB基因的原核表达和纯化: 2016年; 目的为研究UQCRB(ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein)与中药的作用机制,本实验室进行了UQCRB基因的克隆、原核表达和纯化。方法提取人肝癌SMMC-7721细胞总RNA,反转录后采用特异引物进行PCR扩增获取UQCRB基因全长,产物纯化后连入T载体测定正确,克隆经NheI、XhoI双酶切后连入PET28a(+)载体,构建PET28a(+)-UQCRB原核表达质粒。在BL21(DE3)宿主菌中表达超声处理后,应用Amicon○R Pro Affinity Concentration Kit-Ni-NTA纯化,表达及纯化产物用westernblot验证。结果构建了PET28a(+)-UQCRB表达质粒,经过酶切鉴定和测序鉴定正确。重组UQCRB在BL21(DE3)中的最优表达条件为IPTG 1mM诱导5h。Westernblot证实了表达和纯化结果。结论重组UQCRB的原核表达和纯化成功,为进一步研究UQCRB的作用奠定了基础。; 孙砚辉张广献邝枣园张晓圆张韧; 关键词：克隆纯化

不同构建方法对肾阳虚大鼠模型的影响被引量：6: 2016年; 目的:探讨简便有效的肾阳虚建模方法及对大鼠的影响,为方剂药效学及机制研究奠定基础。方法:用腺嘌呤皮下注射和氢化可的松肌肉注射构建肾阳虚大鼠模型,观察大鼠表现及肾脏睾丸病理变化,测定其脏器指数、自主活动度、游泳时间、血清尿素(SU)、血清肌酐(Cr)、SOD和MDA活力。结果:与空白组相比,两种建模方法均使大鼠自主活动度和游泳时间降低(P<0.05),肾脏指数和睾丸指数增高(P<0.05);腺嘌呤组大鼠的Cr水平、SOD活力和MDA活力均升高(P<0.05);氢化可的松组大鼠的Cr水平和SOD活力降低(P<0.05)、MDA活力升高(P<0.05);病理变化上,两种建模方法均出现炎性细胞浸润肾间质、睾丸生精小管略萎缩,排列疏松,各级生精细胞排列松散等现象。结论:腺嘌呤与氢化可的松构建肾阳虚模型在虚证表现和肾脏睾丸病变上相似,但腺嘌呤可能是通过损害肾滤过水平、睾丸生理功能等引起Cr、SOD和MDA活力升高,氢化可的松则可能是通过耗散机体能量,减弱机体抵抗能力,影响Cr生成、降低SOD活力和增高MDA活力,具体原因有待进一步探究。; 林海雄王晓彤江明洁马松英黄宏羽张晓莹邓银河库婉邓林菲张韧; 关键词：肾阳虚病理生化腺嘌呤

湿热证慢性乙型肝炎T7噬菌体cDNA文库的建立: 2014年; 【目的】利用T7噬菌体展示技术建立湿热证乙型肝炎患者肝组织的cDNA噬菌体文库,为淘选治疗湿热证慢性乙型肝炎中草药的作用靶标等工作奠定基础。【方法】选择2例中医诊断为肝胆湿热证的慢性乙型肝炎性肝癌患者,肝移植术后分别取其手术摘除肝脏的癌旁组织,采用RNAiso Plus试剂提取总RNA,用含有dC10T30寡核苷酸的聚腺苷酸序列亲和试剂Oligotex Suspension纯化mRNA,逆转录合成双链cDNA后,加上Hind芋和EcoR I接头,并与酶切后的T7Select 10-3b载体连接,体外包装并扩增得到湿热证慢性乙型肝炎T7噬菌体cDNA文库。【结果】构建了湿热证慢性乙型肝炎T7噬菌体cDNA文库,文库初始滴度为3×105噬菌斑形成单位(pfu)/mL,扩增后文库滴度为1.8×109pfu/mL。随机挑取44个克隆经PCR后,琼脂糖凝胶电泳显示均为阳性克隆,测序结果显示其中1个阳性克隆的插入子为核糖体前体基因,其他均为mRNA。【结论】成功构建了人湿热证慢性乙型肝炎T7噬菌体cDNA文库,为下一步在中医理论指导下淘选和鉴定湿热证乙型肝炎相关中医药物有效成分的直接结合蛋白靶标奠定基础。; 孙砚辉张广献邝枣园宋梦微张韧; 关键词：湿热证慢性乙型肝炎 CDNA文库

苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎患者的临床疗效及安全性Meta分析被引量：6: 2017年; 目的:用循证医学方法探索苦参碱注射液治疗抗病毒慢性乙型肝炎患者的临床疗效及安全性。方法:收集2016年12月以前CNKI、CBM、维普、万方、Pub Med数据库、Cochrane图书馆、OVID数据库苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎患者的临床试验资料,文章的质量评分用Cochrane系统评价的方法。利用Rev Man5.3软件对多个研究结果进行Meta分析。结果:共纳入23篇RCTs文献,Meta分析结果示:苦参碱注射液可增加51%的HBe Ag阴转率[RR=1.51,95%Cl(1.38,1.64),P<0.00001];增加39%的HBV-DNA阴转率[RR=1.39,95%Cl(1.28,1.50),P<0.00001];增加84%的HBs Ag阴转率[RR=1.84,95%Cl为(1.27,2.68),P=0.001];增加45%抗HBe阳转率[RR=1.45,95%Cl为(1.26,1.67),P<0.00001];降低45%的白细胞、血小板下降的发生风险[RR=0.55,95%Cl(0.36,0.85),P=0.007];ALT复常率、流感样症候群结局无明显差别。结论:苦参碱注射液可提高抗病毒乙肝患者的临床疗效及降低不良反应。; 王晓彤林海雄张韧; 关键词：苦参碱注射液慢性乙型肝炎 META分析

国家自然科学基金(81102714)

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