浙江省重大科技专项基金(2007C13010)
- 作品数：2 被引量：15H指数：2
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- 发文基金：浙江省重大科技专项基金国家科技支撑计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：环境科学与工程更多>>
- pUCD-recA重组发光菌构建及对遗传毒性污染物响应作用被引量：6
- 2009年
- 基因重组发光菌在水质毒性的评价中具有重要的作用,本研究从分析污染物毒性损伤的机制出发,构建新型pUCD-recA基因重组发光菌.用PCR法从大肠杆菌W3110中扩增recA基因,将其与pGEM-T easy载体连接后测序.测序正确的recA片段及pUCD615载体均用BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,连接后电转化导入宿主菌JM109.挑取克隆,提取质粒用PCR鉴定,阳性克隆再进行测序.将构建成功的pUCD-recA载体转化入大肠杆菌RFM443,加入相应的遗传毒性污染物,观察发光响应作用.结果表明,recA基因PCR扩增出的片段为293 bp,测序结果与GenBank中的recA序列进行BLAST比对,同源性为99%,表明扩增序列正确.与pUCD615载体连接后的测序结果表明,recA基因已正确地插入到pUCD615的多克隆位点,方向和读码框正确,重组发光菌载体构建成功.将构建好的重组载体转化入RFM443宿主菌,加入遗传毒性污染物观察响应效果.丝裂霉素C（MMC）对pUCD-recA重组发光菌诱导效果最好,0.01 mg/L即可有很好的响应曲线;N′-甲基-N′-硝基亚硝基胍（MNNG）则在50-100 mg/L时可发挥最佳响应作用.
- 黄新新何苗罗虹施汉昌蔡强
- 关键词：遗传毒性
- 用于环境污染物遗传毒性评价的重组发光细菌载体的构建被引量：10
- 2008年
- 基因重组发光菌在水质毒性的评价中具有重要的作用,本研究从污染物遗传毒性损伤的机制出发,构建2种遗传毒性新型基因重组发光菌载体PUCD-uvrA、PUCD-alkA.用PCR法从大肠杆菌W3110中扩增uvrA、alkA基因,将其与pGEM-T easy载体连接后测序.测序正确的uvrA、alkA片段及PUCD615载体均用BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,连接后电转化导入宿主菌JM109.挑取克隆,提取质粒用PCR鉴定,阳性克隆再进行测序.结果表明,uvrA、alkA基因PCR扩增出的片段为237 bp3、26 bp,测序结果与GenBank中uvrA、alkA序列进行BLAST比对,同源性均为99%,表明扩增序列正确.与PUCD615载体连接后的测序结果表明,uvrA、alkA基因已正确地插入到PUCD615的多克隆位点,方向和读码框正确,2种载体构建成功.通过优化连接及转化条件,可将大片段的PUCD615载体与短片段的插入序列连接成功,构成重组载体.
- 黄新新何苗施汉昌蔡强
- 关键词：遗传毒性
- 用于环境污染物综合毒性评价的重组发光细菌载体的构建
- 基因重组发光菌在水质毒性的评价中具有重要的作用,本研究从分析污染物综合毒性损伤的机制出发,构建新型基因重组发光菌载体PUCD-rpos。用PCR法从大肠杆菌W3110中扩增rpos基因,将其与pGEM-Teasy载体连接...
- 黄新新蔡强何苗施汉昌
- 关键词：综合毒性
- 文献传递
