国家自然科学基金(30800462)
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
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- 低氧调控p53RFP基因启动子活性的初步研究
- 2023年
- 目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技术构建HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体并转染HEK293细胞,分别置于常氧和低氧条件下培养,双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。结果低氧处理不同时间点p53RFP mRNA表达水平均显著增加,差异有统计学意义(F=96.493,P<0.001);低氧组p53RFP及HIF-1α蛋白表达量均呈时间依赖性递增。成功构建了HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告基因检测显示,与常氧组相比,低氧条件下野生型p53RFP基因启动子活性增加(t=-19.504,P<0.001),HRE单突变或双突变后启动子活性均较野生型降低(F=160.891,P<0.001)。结论低氧可诱导p53RFP基因表达上调;成功构建了HRE突变型p53RFP双荧光素酶报告基因载体,HRE位点可能在低氧调控p53RFP基因启动子活性中发挥关键作用。
- 裴静娴莫沛王月刚
- 关键词：低氧启动子低氧反应元件
- 钙离子拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂对高血压患者动脉僵硬度影响的荟萃分析被引量：1
- 2012年
- 目的系统评价钙离子拮抗剂(calcium channel blockers,CCBs)和血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin-converting-enzyme inhibitor,ACEI)对原发性高血压(高血压)患者血管功能作用的差异。方法按循证医学的要求,制定相应的纳入、排除标准及其检索策略。通过PubMed、EMBASE、Ovid EBM Reviews、中国期刊全文数据库、中文科技期刊全文数据库、万方数据库,检索相关的临床对照研究,计算机检索时间从各数据库建库至2012年1月;同时辅助其他检索,纳入CCBs和ACEI治疗高血压患者的随机对照试验(randomized controlled trials,RCT)。两名评价者独立评价纳入研究的质量,并用统一的表格提取资料,采用RevMan5.0软件进行统计分析。比较CCBs和ACEI对高血压患者脉搏波传导速度、收缩压、舒张压、脉压等指标的影响。结果共纳入4篇RCT,共计226例患者。文献异质性检验显示数据存在异质性(Q=54.80,P<0.001)。荟萃分析结果显示,ACEI在改善动脉僵硬度方面优于CCBs,差异有统计学意义(标准差=135.01,95%CI:59.87～210.16;Z=3.52,P=0.0004,P<0.05);但在降低收缩压(标准差=-4.73,95%CI:-9.35～-0.12,P<0.04)和舒张压(标准差=-10.42,95%CI:-19.16～-1.69,P<0.02)方面较CCBs弱;在降低脉压(标准差=-6.12,95%CI:-2.3～14.55,P<0.15)方面与CCBs相比,差异无统计学意义。结论ACEI在改善高血压患者动脉僵硬度方面优于CCBs,该作用与其降压作用无关。
- 张艺军裴静娴吴平生钟武装
- 关键词：钙离子拮抗剂血管紧张素转换酶抑制剂
- EnSite Velocity指导下室上速、室性心律失常的绿色消融被引量：3
- 2018年
- 零X线下进行电生理的各类射频消融手术被称作"绿色消融"。随着医疗器械设备的完善和术者临床操作水平的提高,它已成为治疗快速心律失常的重要方法。绿色消融具有无辐射、成功率高、并发症少等优点,能高效安全地完成电生理手术。Ensite Velocity三维电解剖系统具备较好的兼容性,任何导管只要与体内接触产生电阻后即可显示,可利用任何导管进行血管径路和心腔建模。2017年6至9月,南方医科大学南方医院在Ensite Velocity系统指导下尝试进行了22例零X线绿色消融,成功消融21例,1例左侧旁路因患者身材矮小致导管不能到位而失败,改为X线透射下成功消融。手术种类包括普通室上速、三尖瓣峡部依赖型房扑、右室流出道室早等。零X线下能完成绝大部分室上速和常规室早的消融,但也存在一些缺陷,如不能实时显示血管和心脏解剖结构、对术者操作手感要求较高、成本更高等。实施零X线手术时应当有床旁超声,以备安全;最好能在数字减影血管造影室进行手术,以便消融失败时能立即改为X线透射下消融。
- 王月刚孙祝华黎健勇董剑廷
- 关键词：ENSITE阵发性室上速室性早搏
- p53RFP基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定被引量：3
- 2017年
- 目的构建人p53RFP基因启动子序列不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,研究启动子的转录活性。方法 PCR扩增人p53RFP基因启动子区域不同长度的目的片段,克隆到pGL3-Basic中,构建启动子区域3个不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,经双酶切和基因测序鉴定正确后,转染HEK293细胞,双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了p53RFP启动子不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,经双荧光素酶报告基因检测分析,3个启动子片段均具有转录活性。结论成功构建了人p53RFP基因启动子荧光素酶报告基因载体,为研究p53RFP基因的转录调控机制提供了实验基础。
- 裴静娴王月刚张艺军刘城吴平生
- 关键词：启动子荧光素酶报告基因
- 重组腺病毒低氧诱导因子-1α对兔急性缺血后肢血流灌注的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨重组腺病毒低氧诱导因子-1α(adenovirus mediated hypoxia-inducible factor-1α,Ad-HIF-1α)对兔急性缺血后肢血流灌注情况的影响。方法:20只新西兰大白兔建立急性后肢缺血模型,随机分成3组,分别在术后即刻肌注生理盐水(NS组,n=6)、腺病毒空载体(Ad-null组,n=6)和Ad-HIF-1α(Ad-HIF-1α组,n=8)。术后10d行Real-time PCR检测外源基因在转染部位骨骼肌的表达情况;对比超声(contrast enhanced ultrasound,CEU)检查了解Ad-HIF-1α对缺血局部血流灌注的改善情况;伊文思兰法对缺血局部新生血管通透性进行评价。结果:基因转染后10d,Real-time PCR可检测到外源HIF-1α在转染局部骨骼肌的表达;CEU结果示Ad-HIF-1α组血流灌注优于Ad-null组和NS组(P<0.01);伊文思兰法检测3组新生血管通透性相似,定量评价差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Ad-HIF-1α能改善缺血肢体的血流灌注,未明显增加新生血管的通透性。
- 李明琰陈建威王月刚范彩霞陈冬冬魏璇吴平生
- 关键词：缺血低氧诱导因子-1Α血管新生通透性
- 三突变型低氧诱导因子-1α对人微血管内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人微血管内皮细胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白表达的影响。方法三突变型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空载腺病毒载体(Ad-Null)分别在HEK293A细胞大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,终点稀释法测定病毒滴度;双荧光素酶报告系统检测三突变型HIF-1α与野生型HIF-1α的转录活性;各重组腺病毒载体以最佳转染复数转染体外培养的hMVECs,Western blotting测定HIF-1α和VEGF蛋白表达;MTS检测Ad-HIF-1α564/402/803对细胞增殖的影响。结果三突变型HIF-1α转录活性显著高于野生型HIF-1α(P<0.001);Ad-HIF-1α564/402/803组HIF-1α和VEGF蛋白表达量高于Ad-HIF-1αnature及其他组;VEGF蛋白表达水平与HIF-1α呈剂量依赖关系。Ad-HIF-1α564/402/803组第3、5天吸光度值均显著高于Ad-HIF-1αnature及其他组(P<0.01)。结论三突变型HIF-1α在体外常氧条件下稳定高效表达,可诱导hMVECs VEGF蛋白表达上调,促进hMVECs增殖。
- 裴静娴王月刚刘城魏璇李明琰陈建威吴平生
- 关键词：低氧诱导因子-1Α腺病毒载体微血管内皮细胞
- p53RFP对SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响被引量：1
- 2022年
- 目的:观察p53RFP过表达对SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:利用脂质体介导法将p53RFP表达载体转染SW480细胞,Western blot检测p53RFP蛋白表达水平,实时定量RT-PCR检测细胞周期相关蛋白mRNA表达。采用CCK-8检测p53RFP表达上调对SW480细胞增殖的影响、PI染色流式细胞术进行细胞周期分析、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果:p53RFP转染后48 h、72 h、96 h细胞增殖受到显著抑制(P<0.001),p53RFP转染后48 h细胞G2期细胞含量显著高于空载转染组(P<0.05),细胞凋亡率亦显著高于空载对照组(P<0.05)。p53RFP过表达可诱导p21 WAF1/CIP1mRNA表达增加(P<0.05),对CyclinB1、CyclinD1、CDK1 mRNA表达无显著影响。结论:p53RFP过表达可抑制SW480细胞增殖、介导G2期阻滞、诱导细胞凋亡。
- 裴静娴王月刚程诚刘城吴平生
- 关键词：增殖细胞周期凋亡
- p53RFP表达载体的构建及其对HEK293A细胞增殖的抑制作用被引量：1
- 2012年
- 目的构建p53RFP表达载体,观察p53RFP表达上调对HEK293A细胞生长的影响。方法利用DNA克隆技术,将人p 53RFP基因的编码序列克隆至质粒pcDNA4/Myc-HisA,经限制性酶切、DNA测序鉴定重组载体。质粒扩增提取,经脂质体介导法转染HEK293A细胞,实时定量RT-PCR、Western blot检测转染后p53RFP mRNA及蛋白的表达水平。采用CCK-8检测p53RFP表达上调对HEK293A细胞增殖的影响。结果 p 53RFP转染后其mRNA及蛋白表达水平均显著上调;p 53RFP转染后72 h、96 h,细胞增殖受到显著抑制(P<0.01)。结论成功构建p53RFP表达载体pcDNA4-p53RFP,并可在HEK293A细胞内有效表达,其表达可抑制HEK293A细胞增殖。
- 裴静娴王月刚张艺军赖文岩吴平生
