浙江省重大科技专项资金(2009C03004)
- 作品数：2 被引量：3H指数：2
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- 凋亡素融合蛋白质高表达菌株的筛选及其产物活性测定被引量：2
- 2012年
- 目的筛选凋亡素-HBD融合蛋白质高表达的工程菌株,验证其目标产物具有抑制肿瘤细胞增值的活性。方法在不同大肠杆菌宿主中凋亡素融合蛋白质表达,筛选出高表达工程菌,随后诱导表达和纯化凋亡素融合蛋白质,并通过噻唑蓝法(MTT法)检测目标产物对肿瘤细胞的抑制活性。结果凋亡素-HBD融合蛋白质在SG工程菌的表达量较好。MTT法检测表明,凋亡素融合蛋白质有抑制HeLa细胞增值的活性。结论获得一种凋亡素-HBD融合蛋白质的高表达工程菌株,并证实其产物能够进入HeLa细胞并诱导细胞凋亡。
- 王焕焕汪雅雯曹晨赵健陆玉婷王富军
- 关键词：噻唑蓝法
- 带有突变穿膜肽重组凋亡素可溶性表达的研究被引量：2
- 2012年
- 目的构建apoptin(凋亡素)-HBDCK-pET28a突变体重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现高效可溶性表达,并观察突变后穿膜肽(CPP)在HeLa细胞中的转导活性。方法采用PCR介导突变方法将重组蛋白apoptin-HBD及EGFP-HBD的HBD结构域中的Cys(C)突变为Lys(K)。突变的重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,进一步观察HeLa细胞突变后HBD的转导活性。结果经双酶切鉴定和序列分析,突变后的重组质粒apoptin-HBDCK-pET28a及EGFP-HBDCK-pET28a构建正确。转化E.coli BL21(DE3)后,融合蛋白均获得可溶性表达。EGFP-HBDCK作用于HeLa细胞13 h后,可观察到细胞内强绿色荧光。结论 HBD结构域中C突变为K,可达到融合蛋白可溶性表达的目的,且仍能保持很强的转导活性,可携带EGFP蛋白进入HeLa细胞。
- 汪雅雯王焕焕杨广超单含文谢先文赵健张惠展
- 关键词：可溶性表达凋亡素
