湖南省自然科学基金(05JJ30173)
- 作品数：4 被引量：42H指数：3
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- 肿瘤坏死因子α对体外血脑屏障模型通透性的影响(英文)被引量：4
- 2007年
- 背景:以往的研究发现,感染性脑损伤时脑组织中白细胞介素1和肿瘤坏死因子α含量明显增加,并与脑损害呈正相关关系,其能否导致血脑屏障通透性增高?目的:观察肿瘤坏死因子α对体外血脑屏障模型通透性的影响及其可能的调控机制。设计:体外细胞模型对照实验。单位:中南大学湘雅医院儿科,中南大学湘雅医学院生化系。材料:选用20只生后7d健康SD大鼠,雌雄不拘,清洁级,由中南大学湘雅医学院动物部提供;肿瘤坏死因子α购自sigma公司;DMEM液体培养基、胎牛血清购自Hyclone;Rhok的特异性拮抗剂Y-27632购自Alexis公司,兔抗人Ⅷ因子相关抗原购自Zymed公司;小鼠抗大鼠神经胶质纤维酸性蛋白单抗(GFAP)购自Neomarkers公司。方法:实验于2004-03/2005-04在中南大学湘雅医院完成。利用脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞共培养建立体外大鼠血脑屏障模型,共培养至10d开始干预,实验分为模型组、Y-27632对照组、肿瘤坏死因子α干预组和Y-27632预处理组。模型组仅给予血脑屏障模型制备,肿瘤坏死因子α干预组向血脑屏障模型内加入肿瘤坏死因子α0.01g/L干预5h;Y-27632预处理组指向血脑屏障模型内加入Y-2763230μmol/L预处理1h后,再予肿瘤坏死因子α0.01g/L干预5h,Y-27632对照组造模后仅加入Y-27632干预,方式同Y-27632预处理组。取分组处理后待用模型,分别于30,60,120,240min采用γ计数仪检测125Ⅰ-牛血清白蛋白的通透量观察肿瘤坏死因子α对血脑屏障通透性的影响。主要观察指标:各组干预后不同时间点体外大鼠血脑屏障模型对125Ⅰ-牛血清白蛋白的通透量。结果:处理后30,60,120,240min,肿瘤坏死因子α干预组体外血脑屏障模型125Ⅰ-BSA通透量均高于其他组别(P<0.01),240min时达高峰;处理后30,60min,Y-27632预处理组125Ⅰ-BSA通透量低于肿瘤坏死因子α干预组(P<0.01),表现出拮抗肿瘤坏死因子α的作用,自120min后,Y-2763
- 彭镜尹飞曾卫民甘娜张红媛
- 关键词：血脑屏障通透性肿瘤坏死因子ΑRHO
- MMP-9和细胞骨架肌动蛋白参与缺氧缺血诱导的体外血脑屏障模型通透性增加被引量：10
- 2008年
- 目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和细胞骨架肌动蛋白(actin)在体外模拟缺氧缺血诱导的血脑屏障(BBB)模型通透性增高中的变化及其机制。方法:利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星型胶质细胞(AS)共培养建立体外大鼠BBB模型,模型随机分为正常对照组、缺氧缺血组、BB-1101预处理组。通过γ计数仪检测大分子物质[125I]-牛血清白蛋白([125I]-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,直接免疫荧光和Western印迹法检测actin表达量及分布的改变,并利用金属蛋白酶抑制剂BB-1101探讨MMP-9是否参与缺氧缺血诱导的BBB通透性增加。结果:缺氧缺血刺激后5h,缺氧缺血组[125I]-BSA的通透量增加、MMP-9表达增加,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。直接免疫荧光下观察周边actin丝带模糊,细胞间连接松散,出现裂隙,但表达总量没有变化。BB-1101预处理可以减轻缺氧缺血所致的MMP-9表达增加和对actin连接的破坏,[125I]-BSA通透量低于缺氧缺血组(P<0.01)。结论:缺氧缺血诱导MMP-9表达增加进而促使actin蛋白重组,是导致BBB通透性增加的机制之一。
- 甘娜尹飞彭镜王卫东
- 关键词：血脑屏障肌动蛋白基质金属蛋白酶9通透性
- 紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加被引量：28
- 2008年
- 目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。
- 吴丽文尹飞彭镜王卫东甘娜
- 关键词：血脑屏障紧密连接蛋白ACTINZO-1OCCLUDIN通透性
- 肿瘤坏死因子-α对体外血脑脊液屏障模型通透性的影响及其机制研究被引量：1
- 2006年
- 目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外血脑脊液屏障(BBB)模型通透性的影响及其调控机制。方法利用脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞共培养建立大鼠体外BBB模型,并随机分为正常对照组、TNF-α干预组和Y-27632预处理组。采用γ计数仪检测125I-BSA的通透量观察TNF-α对血脑脊液屏障通透性的影响。结果TNF-α使体外BBB模型对125I-BSA通透量明显增加,Y-27632预处理能明显拮抗TNF-α的上述作用(P<0.01)。结论TNF-α可导致BBB通透性增高,Rho/Rhok细胞信号传导通路可能参与此过程的调控。
- 尹飞曾卫民彭镜甘娜张红媛
- 关键词：血脑脊液屏障通透性肿瘤坏死因子-Α
