国家重点基础研究发展计划(G1999011904)
- 作品数：21 被引量：144H指数：6
- 相关作者：常惠芸王在时谢庆阁丛国正独军政更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所中国兽医药品监察所武汉大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家攀登计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 持续感染口蹄疫病毒VP1和3ABC基因变异研究
- 为了明确口蹄疫病毒持续感染和口蹄疫病毒基因变异之间的潜在关系,研究口蹄疫病毒结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在持续感染动物体内的动态变化规律。用O／Akesu／58 FMDV以104ID50／mL剂量舌面穿刺接种5...
- 沈小燕丛国正常惠芸邵军军独军政林彤谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒基因变异VP1
- 文献传递
- 猪瘟病毒野强毒株持续感染细胞模型的初步研究
- 2002年
- 经过筛选和连续传代 ,建立了稳定的猪瘟病毒野强毒株 (CSFV2 2 )感染猪肾传代细胞系 (PK 15 )的持续感染细胞模型 ,获得CSFV2 2 PK15病毒持续感染的传代细胞株 用免疫荧光技术、RT PCR技术、透射电镜、流式细胞仪研究了CSFV2 2 PK15细胞株连续传代中病毒在细胞内持续感染的基本特性 结果显示传代细胞表现为病毒持续感染的基本特征 .
- 郑从义童攒应松成屈三甫王在时
- 关键词：猪瘟病毒细胞模型传代细胞细胞周期
- miRNA干扰口蹄疫病毒基因组早期复制的初步研究
- 2009年
- 根据miRNA的设计要求,以miR-31为模型通过软件设计出潜在的能够使3D基因沉默的特异性miRNA序列3D-1203,并以pcDNA3.1(+)质粒为载体构建能够表达成熟miRNA的重组质粒,将其转染到BHK-21细胞后感染口蹄疫病毒,研究3D-1203的miRNA的干扰作用。蚀斑实验结果显示特异性miRNA可以在早期抑制口蹄疫病毒的复制,与阳性对照相比,病毒复制效率降低53.0%。实时TaqMan荧光定量RT-PCR检测数据表明特异性miRNA干扰病毒基因组增殖的效率达66.7%。本研究证明,利用miR-31设计的特异性miRNA在病毒复制早期能够特异的干扰口蹄疫的复制。
- 袁婷婷熊义纪怡冰郑从义屈三甫李勇黄旋
- 关键词：口蹄疫病毒MIRNA
- 由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒被引量：12
- 2003年
- 通过RT-PCR获得猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)强毒株cF114株(中国标准强毒F114株经PK-15细胞增殖)全长基因组cDNA并测序. 与已知其他几株CSFV代表毒株F114, Brescia, Alfort和C株的核苷酸同源性分别为99.41%, 96.80%, 86.03%和95.70%; 氨基酸同源性分别为99.28%, 98.54%, 93.33%和97.41%. 将获得的各基因片段按病毒基因组顺序连接成全长cDNA, 插入pMC18质粒SalⅠ/ XbaⅠ之间, 得到含病毒全长基因组的重组质粒pMC12297. 用T7 RNA聚合酶进行体外转录, 转录出的RNA转染PK-15细胞, 细胞上清液经扩增后, 测定上清液中病毒滴度. 质粒来源的CSFV(vM12297)在抗原反应性和复制能力方面与父代病毒相似. 将疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分别替换到pMC12297相应位置, 获得嵌合体基因组质粒pM/CE01和pM/CE2, 体外恢复获得嵌合体病毒vM/CE01和vM/CE2. 两种嵌合体病毒均能感染PK-15, SK-6和原代猪睾丸细胞, 间接免疫荧光检测显示较vM12297弱, 在PK-15细胞上滴度达到8×105 F-PFU/mL. 这一工作为进一步研究和探讨CSFV增殖与致弱的机理提供了重要的实验和理论资料.
- 聂玉春陈建国丁明孝
- 关键词：猪瘟病毒全长CDNA克隆转染体外转录氨基酸核苷酸
- 实验室人工感染诱发猪瘟野毒垂直传播被引量：2
- 2003年
- 利用 2头人工感染中等毒力猪瘟野毒耐过猪进行配种 ,诱发了猪瘟野毒垂直传播。带毒母猪于带毒后 1 71 d产下 9头仔猪 ,其中 3头为死胎 ,6头为木乃伊。直接免疫荧光抗体试验和 RT- PCR检测 ,9头均为阳性。测序结果表明 ,3头测序仔猪中 ,2头仔猪所分离病毒 E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的一致 ;另 1头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的同源性高于与母猪所接种病毒的同源性。母猪在与公猪配种前后 ,其所分离病毒 E2基因主要抗原编码区序列发生了变化 ,配种后与公猪所分离病毒的一致 。
- 赵耘宁宜宝王在时王琴宋立张广川秦玉明沈青春丘惠深
- 关键词：猪瘟野毒猪瘟病毒基因测序E2基因
- 猪瘟病毒野毒株持续感染细胞模型的建立被引量：5
- 2002年
- 采用猪瘟病毒野毒珠（ＣＳＦＶ３９）感染猪肾传代细胞系ＰＫ－１５，经连续传７９代，建立了稳定的病毒持续感染细胞模型，获得ＣＳＦＶ３９－ＰＫ１５细胞株。用免疫荧光、ＲＴ－ＰＣＲ检测、透射电镜跟踪观察了ＣＳＦＶ３９－ＰＫ１５细胞株连续传代中病毒在细胞内的存在情况。结果表明第９，２９，７９代细胞仍有猪瘟病毒存在，表现出病毒持续感染的基本特征。这为深入研究猪瘟病毒持续感染机理奠定了基础。
- 应松成郑从义屈三甫张楚瑜王在时
- 关键词：细胞模型RT-PCR
- 口蹄疫病毒3ABC绿色荧光蛋白载体构建及表达被引量：4
- 2006年
- 将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109大肠埃希菌增殖。提取PEGFPN1-3ABC质粒转染入BHK细胞,在荧光显微镜下直接观察表达结果。
- 孙德惠独军政常惠芸才学鹏
- 关键词：绿色荧光蛋白口蹄疫病毒
- 用原位RT-PCR对BHK-21细胞中的FMDV检测和定位被引量：1
- 2005年
- 目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法。方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位。结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性蓝染颗粒,阴性对照细胞中没有蓝染颗粒出现,也没有明显的背景染色。结论结果表明FMDV RNA在细胞的细胞质中进行复制和增殖,同时也表明原位RT-PCR是检测细胞内病毒的一种敏感、特异的方法。
- 邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁
- 关键词：FMDVBHK-21细胞原位杂交
- 原位PCR技术及其应用被引量：6
- 2003年
- 邵军军常惠芸谢庆阁
- 关键词：原位PCR技术原位杂交ISH核酸分子探针
- 口蹄疫病毒感染细胞的研究进展被引量：11
- 2005年
- 口蹄疫是引起偶蹄动物的急性发热性水泡性疾病,具有高度接触传染性,对发病国家和地区经济有破坏性作用和不良的政治影响。口蹄疫病原体为小RNA病毒科的口蹄疫病毒,是一类单股正链RNA病毒,该病毒有多种血清型及其亚型,相互之间无交叉保护力或保护力极其有限。目前,口蹄疫病毒感染的分子机理还不是很清楚。口蹄疫病毒感染细胞的过程主要包括病毒与细胞的吸附、病毒穿透细胞壁进入细胞、病毒粒子的脱衣壳、病毒RNA的翻译转录、病毒基因组的复制以及病毒粒子的成熟过程,最后是成熟的病毒粒子衣壳包装成为完整病毒。文章就口蹄疫病毒感染细胞的过程做一概述。
- 沈小燕常惠芸丛国正刘永生王建华谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒基因复制口蹄疫
