国家科技型中小企业技术创新基金(06C26226200591)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：王晓清马瑾廖世奇张丽琼张宁更多>>
- 相关机构：甘肃省医学科学研究院兰州理工大学兰州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技型中小企业技术创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIV-P24核酸适配体的筛选被引量：5
- 2012年
- 目的利用SELEX技术筛选HIV-P24的核酸适配体,为艾滋病的诊断和治疗奠定基础。方法以重组P24为筛选靶,用SELEX技术从随机寡核苷酸库中筛选与HIV-P24结合的寡核苷酸,利用凝胶阻滞实验鉴定第12轮筛选到的寡核苷酸与HIV-P24的结合,再用Dot-blot法筛选出与HIV-P24结合的核酸适配体,并检测核酸适配体识别HIV-P24的特异性。结果 Dot-blot筛选到5条与HIV-P24有较强结合能力的核酸适配体,且均为不同的序列。特异性检测显示,18和26号配体只与HIV-P24特异性结合,而与人血清白蛋白、牛血清白蛋白和脱脂奶粉均无明显结合。结论成功筛选到2条特异结合HIV-P24的核酸适配体,为其应用于艾滋病诊断和治疗提供了实验基础。
- 张宁毛爱红马瑾廖世奇张丽琼王晓清马君
- 关键词：SELEX技术核酸适配体
- 抗体Fc片段特异寡核苷酸配基介导的实时定量免疫PCR被引量：1
- 2012年
- 目的:利用小鼠IgG抗体Fc片段高特异、高亲和寡核苷酸配基,构建实时定量免疫PCR检测方法,提高抗体检测的灵敏度。方法:用SELEX技术从随机寡核苷酸文库中筛选抗体Fc片段特异寡核苷酸配基,设计合成信标序列,通过不对称PCR法,制备IgG Fc片段的核酸信标配基分子;32P标记核酸信标配基,采用琼脂糖凝胶阻滞双显色法鉴定核酸信标配基与IgG Fc片段结合的亲和力和特异性;制备IgG Fc特异性寡核苷酸信标配基-抗体复合检测分子,构建小鼠IgG Fc片段特异核酸信标配基介导的实时定量免疫PCR检测方法。结果:制备了IgG Fc片段的核酸信标配基分子;凝胶阻滞放射自显影和考马斯亮蓝二次染色结果显示该核酸信标配基分子与IgG Fc片段具有高度亲和力和活性,而且只与非变性IgG结合,与变性IgG不结合;IgG Fc片段的特异核酸信标配基与IgG结合形成复合检测分子,有效完成了信号传递和实时定量PCR信号放大过程。结论:初步建立了一种全新的核酸信标配基介导的免疫PCR检测方法,可有效提高现有IgG类抗体免疫检测的灵敏度和特异性。
- 张伟华王晓清廖世奇王黎马瑾田彩平马君
- 关键词：SELEX
- 靶标替换消减SELEX技术筛选小鼠IgG Fc片段的DNA配基及其活性鉴定被引量：4
- 2011年
- 建立高特异性和亲和力的小鼠IgGFc片段DNA配基筛选方法.采用几种小鼠IgG亚类(鼠抗HBV-IgG、小鼠IgG的Fc,IgG1,IgG2a)作为靶分子,利用靶标替换消减SELEX筛选方法进行16轮筛选.利用dot-blot,高压液相色谱以及凝胶阻滞(EMSA)方法对所得配基进行活性鉴定.经过16轮筛选,得到了与小鼠IgG不同亚类相同Fc片段特异性结合的寡核苷酸配基(IgG的Fc配基).特异性分析显示,此配基只与小鼠IgG特异性结合,与胰蛋白酶、小牛血清白蛋白、人血清均无明显结合.高压液相色谱和凝胶阻滞结果均说明了配基和靶蛋白具有特异结合.通过使用靶标替换消减SELEX技术可以有效得到小鼠IgG不同亚型相同部分Fc片段的特异性结合配基,为不同分子相同部位的分子作用机制,以及应用于小鼠抗体亲和层析的研究奠定基础.
- 陈桦葛廷王小琦廖世奇马瑾王黎庞鑫张宁张丽琼张洁瑜王晓清
- 关键词：SELEX特异性
