国家高技术研究发展计划(2002AA230011)
- 作品数：3 被引量：42H指数：2
- 相关作者：杨金亮柳斌赵霞魏于全秦慧更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院四川大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白质组学方法筛选维甲酸耐药相关蛋白被引量：8
- 2007年
- 目的比较维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异蛋白表达谱,分析、筛选维甲酸耐药相关蛋白。方法双向凝胶电泳分离维甲酸耐药细胞株 MR2及维甲酸敏感细胞株 NB4的全蛋白,经PDQuest v7.1分析软件筛选出差异表达的蛋白质点,质谱分析获得差异蛋白质的肽质量指纹图谱,以此通过 Mascot 软件查询 SWISS-PROT 蛋白数据库,进行差异蛋白质的鉴定,获得候选维甲酸耐药相关蛋白。采用蛋白质印迹试验及半定量 RT-PCR 在蛋白水平和 mRNA 水平对差异蛋白质进行验证。结果获得了分辨率高、重复性好的 APL 细胞的双向电泳图谱,维甲酸耐药细胞株 MR2及维甲酸敏感细胞株 NB4的 pH 4-7双向凝胶电泳图谱显示平均蛋白点分别为890±45和912±56。在二者间分析到57个差异蛋白点,23个蛋白点在 RA 耐药细胞株 MR2中上调,34个蛋白点下调。25个差异蛋白点经质谱鉴定,17个获得成功鉴定,对应于13个不同分子,其中一个是未知功能的新蛋白FLJ00279,其余分属于癌蛋白(DJ-1),转录相关蛋白(MYC 启动子结合蛋白1),分子伴侣[热应激蛋白(HSP)HSP70、HSP60及蛋白质二硫键异构酶],代谢类蛋白(抑制素、磷酸丙糖异构酶1及钙网蛋白)和信号转导(Rho GDP dissociation inhibitor beta)以及细胞骨架蛋白(ACTG1蛋白、β-5-微管蛋白抑制素及角蛋白10)。癌蛋白 DJ-1、calreticulin、HSP60及 ACTG1在 RA 耐药细胞株 MR2中为高表达,其余为低表达。蛋白印迹试验结果与双向电泳结果一致且展现了 DJ-1和 calreticulin 在多个异构体上有差异表达。但半定量 RT-PCR 显示 HSP70和 HSP60的蛋白质表达差异与其 mRNA 水平变化无相关一致性。两种实验结果提示翻译后蛋白的修饰或剪切介导了蛋白的表达差异。结论应用双向凝胶电泳连接质谱的蛋白质组学方法筛选到新蛋白 F1300279以及功能已知的 DJ-1、calreticulin、HSP70、HSP60、抑制素及 MYC 启动子结合蛋白1等维甲�
- 秦慧刘霆杨金亮黄欣柳斌宋鑫赵霞魏于全
- 关键词：维甲酸蛋白质组电泳抗药性髓样
- 几种双向凝胶电泳蛋白质检测方法的比较被引量：32
- 2006年
- 本研究对蛋白质染色法进行比较和分析,以求获得满足蛋白质组研究所需的适宜的蛋白质检测法。实验采用2-D电泳分离急性早幼粒白血病细胞株NB4的全蛋白及1-D电泳分离蛋白质分子量标准物,从蛋白质检测的灵敏性、质谱兼容性、操作的简便性等角度,比较了传统考马斯亮蓝染色法、胶体考马斯亮蓝染色法、改良考马斯亮蓝染色法和银染法4种蛋白质着色法对凝胶分离蛋白质的检测影响,探讨了影响蛋白质染色与鉴定的影响因素。结果显示,银染检测灵敏度最高,但质谱鉴定相容性差,鉴定率近10%;改良考马斯亮蓝染色法检测灵敏度也高,可达4ng/spot,质谱鉴定率可接近55%。结论:改良考马斯亮蓝染色法的蛋白质检测灵敏度高,与质谱兼容好,能满足蛋白质组研究需要。
- 秦慧刘霆柳斌宋鑫黄欣杨金亮赵霞魏于全
- 关键词：蛋白质组双向凝胶电泳蛋白质检测银染
- 应用蛋白质组技术对维甲酸耐药相关蛋白的初步分析被引量：2
- 2006年
- 目的探讨采用蛋白质组学技术研究维甲酸的耐药机制。方法提取维甲酸敏感细胞株NB4及维甲酸耐药细胞株MR2的总蛋白,进行双向凝胶电泳识别差异表达蛋白,经质谱分析、数据库搜索进行蛋白鉴定。结果单张凝胶电泳图上呈现约600多个蛋白点,组间的匹配性较好,初步筛选出三个表达差异蛋白,经鉴定分别为DJ-1蛋白、热休克蛋白70及KIAA1289未知功能蛋白。结论应用双向电泳连接质谱的蛋白质组学方法有助于筛选到耐药相关的表达蛋白,为进一步研究维甲酸耐药机制提供分子基础。
- 秦慧刘霆杨金亮杨寒朔孟文彤阚兵魏于全赵霞柳斌宋鑫
- 关键词：蛋白质组学双向凝胶电泳
