天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目(043802811)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
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- 人类U5·116 ku蛋白基因片段的克隆
- 2007年
- 目的:构建人类U5·116 ku基因全长真核表达质粒。方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,一步法合成单链cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人类U5·116 ku基因两段连续的序列,首先分别克隆至pTZ57R/T载体,两段序列连接成全长后再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒。结果:RT-PCR法获得U5·116 ku基因两段连续的序列,长度分别为1672bp和1246bp,分别与pTZ57R/T载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(-)真核表达载体进行连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒构建成功。结论:成功克隆了人类U5·116 ku的编码基因,并构建了其真核表达质粒pcDNA3.1(-)-U5·116 ku。
- 洪敬欣邵洁史雪彬姚智杨洁
- 关键词：HELA细胞质粒逆转录聚合酶链反应
- Prp8蛋白在前体mRNA剪接中的作用
- 2007年
- 前体mRNA的剪接是基因表达的关键一步,发生在蛋白质的转录之后与合成之前。在前体mR- NA剪接加工过程中需要将转录本中的内含子切除,因为它会干扰基因的转录。前体mRNA的剪接发生在细胞核中,是在一个大的RNA与蛋白质的复合物即剪接体的催化下完成的。Prp8(precursor mRNA process- ing)是参与前体mRNA剪接的最大的蛋白,其序列从酵母到人类是高度保守的。Prp8同时也是细胞核内一个最重要的剪接因子。在剪接过程中,Prp8组成剪接体的催化中心。有人推断Prp8是剪接体的支架蛋白,很可能在催化中心起到锚定RNA的作用,同时也调节着激活剪接体所必需的构象变化。Prp8还与色素性视网膜炎的发生密切相关。
- 洪敬欣姚智杨洁
- 关键词：前体MRNA支架蛋白
- 人Prp8蛋白基因片段的克隆
- 2007年
- 目的:构建人Prp8基因全长真核表达质粒。方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,两步法合成cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人Prp8基因的四段序列,首先克隆至pTZ57R/T载体,再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-Prp8重组质粒。结果:RT-PCR法获得Prp8基因的4段序列,长度分别为2025、1090、1966、1963bp,分别与pTZ57R/T载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(+)真核表达载体连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(+)-Prp8重组质粒构建成功。结论:成功克隆了人Prp8的编码基因,并构建了表达载体pcDNA3.1(+)-Prp8。
- 洪敬欣步天栩史雪彬邵洁姚智杨洁
- 关键词：基因表达质粒真核细胞逆转录聚合酶链反应
