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生化工程国家重点实验室开放基金: 作品数：21 被引量：53H指数：5; 相关作者：余蓉苏志国吴梧桐熊平汪浩勇更多>>; 相关机构：中国科学院过程工程研究所四川大学中国药科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：化学工程生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

透析法体外复性抗凝溶栓双功能HV12p-rPA融合蛋白被引量：7: 2009年; 探索表达于大肠杆菌中的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白(The fusion protein of 12 peptide of hirudin and reteplase,HV12p-rPA)的体外复性方法。采用直接透析复性和氧化复性结合透析复性两种方式,并分析复性时间、温度、适宜的氧化-还原体系比例对复性率的影响。分别测定其体外抗凝活性和纤溶活性,确定复性效果。结果显示:将变性溶解的HV12p-rPA在含8mol/L脲,0.05mmol/LGSSG,0.7mol/LL-Arg的50mmol/LGly-NaOH(pH9.20)缓冲液中于25℃氧化复性6h后,再在含0.5mol/LL-Arg,1mmol/L胱氨酸,2mmol/L半胱氨酸的20mmol/LGly-NaOH(pH9.20)缓冲液中于4℃进行梯度脲浓度透析,每隔8h换液一次,透析48h,可获得具有抗凝活性为730ATU/mg,纤溶活性为19768IU/mg的可溶性蛋白质。; 梁兰余蓉邓璇李磊吴梧桐; 关键词：包涵体复性

人肠道病毒71型VP0蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2011年; 目的:原核表达并纯化人肠道病毒71型(EV71)VP0蛋白,免疫豚鼠制备多克隆抗体,并鉴定其用于EV71检测的反应性和特异性。方法:PCR方法扩增VP0基因,构建原核表达质粒pET-VP0并转化大肠杆菌,诱导表达并纯化VP0重组蛋白,免疫豚鼠制备抗VP0多克隆抗体,ELISA方法检测抗VP0抗体效价,细胞免疫荧光和Western blot方法鉴定抗体特异性。结果:VP0重组蛋白在大肠杆菌BL21中高效表达,制备的抗VP0抗体效价为1∶106。细胞免疫荧光及Western blot检测结果显示,抗VP0多克隆抗体可以识别原核表达及EV71感染细胞中的VP0蛋白。结论:原核表达了EV71的VP0蛋白并制备出抗VP0多克隆抗体,为EV71的临床诊断、疫苗开发和分子病毒学研究提供了新的研究工具和手段。; 冯嫣芳刘庆伟库志强闻洁君单虎黄忠; 关键词：手足口病人肠道病毒71型 VPO 多克隆抗体

胶原的百年研究历程回顾与展望被引量：1: 2023年; 胶原作为细胞外基质的主要成分,是脊椎动物体内含量最丰富的蛋白。胶原研究历程与人们对生命本质的认识过程密不可分,从纤维学说到细胞学说确立经历了数百年的历程。近百年来,胶原的应用从制革和黏合剂等,逐渐拓展至食品、药品、化妆品、生物材料,近年来拓展至组织工程、再生医学及干细胞定向转化等。结合已有的文献报道及相关研究经验,针对胶原的研究历程、应用范围以及相关技术在胶原研究中的应用、取得的阶段性进步或成果等进行梳理。以期为胶原领域的研究人员提供胶原研究的最新动向,使其充分理解技术进步与科学研究之间的关系,同时有助于促进不同学科领域的交叉与融合。; 张贵锋高建萍徐丽明罗希赵凌云; 关键词：胶原细胞外基质

基于扩散强化的Pickering界面生物催化系统构建及CO_(2)矿化过程研究被引量：1: 2022年; CO_(2)的有效利用有助于解决环境和生态问题.碳酸酐酶(CA)等酶分子可精准活化CO_(2)分子以降低反应能垒,为CO_(2)的高效和高选择性转化提供了一种有前景的途径.然而,酶离开生物体后易失活,且难以重复利用.目前,包埋型固定化酶是常用且有效的提高酶稳定性与回用率的方法之一,但载体的存在会造成反应物CO_(2)内扩散阻力增加,降低反应活性.此外,CO_(2)酶促转化是一个气-液-固三相反应过程,反应体系中CO_(2)的外扩散性能也需要加强.金属有机骨架(MOFs),特别是咪唑酯骨架(ZIFs),常被用作酶固定化的载体.ZIFs的拓扑结构可被设计成不同形貌,进而通过ZIFs的结构工程来加强分子向其中的内扩散.Pickering乳液是指以固体颗粒代替常规表面活性剂而稳定的乳液.当固体颗粒具有催化活性时,催化剂颗粒会扩大液-液-固或气-液-固三相接触面积,从而有效协调反应物在不同相中的扩散时间.如果酶被用作这些颗粒的活性中心,所制备的Pickering乳液也可能具备类似的特性,可加强底物分子向酶的外扩散.本文选择两种具有不同结构的ZIFs(ZIF-L和ZIF-8),原位包埋CA后形成CA@ZIFs颗粒以稳定Pickeirng乳液.ZIF-L和CA@ZIF-L颗粒显示出独特的二维层状堆叠结构.ZIF-8和CA@ZIF-8颗粒呈棱角清晰的十二面体结构.与CA@ZIF-8颗粒相比,CA@ZIF-L颗粒显示出更大的孔径和更宽的孔径分布,这有助于CO_(2)从CA@ZIF-L颗粒表面扩散至酶活性中心.利用酶活测试来研究内扩散是否通过结构工程得到了加强,发现CA@ZIF-L颗粒的活性比CA@ZIF-8颗粒高22.3%,推测这是由于CA@ZIF-L颗粒特殊的十字花状结构会缩短CO_(2)从颗粒表面扩散至酶活性中心的距离.同时,十字花状结构可暴露更多的酶活性位点(CA@ZIF-L颗粒的暴露面积是CA@ZIF-8颗粒的~8倍),从而提升了反应物浓度并显示出更高的催化活性.本文还设计了吸附实验来进一步验证上述假�; 张博禹石家福赵阳王涵储子仪陈裕吴振华姜忠义; 关键词：二氧化碳转化碳酸酐酶金属有机骨架

混合模式吸附色谱分离纯化贻贝粘蛋白的研究被引量：4: 2010年; [目的]研究高强度琼脂糖基质混合模式吸附介质分离纯化贻贝粘蛋白的方法并探讨分离机理。[方法]考察在不同酸碱度、不同离子强度下,贻贝粘蛋白在凝胶上的静态吸附、动态吸附及解吸附过程。[结果]氯化钠浓度从0增加到0.5mol/L,介质和蛋白之间平衡吸附量变化在6%以内;而酸碱度对吸附的影响较大,当酸碱度跨越蛋白等电点时,单位酸碱度(pH)最大吸附量变化百分比达23%。[结论]介质的复合配基与贻贝粘蛋白间表现了离子交换、疏水作用、氢键吸附的混合吸附作用,采用酸碱度高于等电点的洗脱液洗脱贻贝粘蛋白,得到纯度为90%的贻贝粘蛋白。; 范恒瑞高敏Jan-Christer Janson顾铭; 关键词：纯化

聚乙二醇20k修饰与转铁蛋白偶联睫状神经营养因子的生物活性对比研究被引量：1: 2017年; 为了延长重组睫状神经营养因子在体内的保留半衰期,基于CNTF中天然的游离半胱氨酸残基,在前期工作中采用聚乙二醇修饰和转铁蛋白偶联的两种方式对CNTF进行了改造。此后又采用常规分析手段对PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF进行对比表征。高效凝胶过滤和动态光散射分析结果显示两者拥有相近的表观分子体积。细胞试验结果显示两种耦合物的活性分别下降至未修饰CNTF的50.6%和65.8%。抗体CNTF抗体亲和力结果显示PEG20k修饰后亲合力下降至原蛋白的3.8%,转铁蛋白偶联后保留89.9%原蛋白亲合力。药代动力学结果显示PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF在SD大鼠血液中的保留半衰期分别为5.34±0.26和8.65±0.60小时,与未修饰rh CNTF相比延长了约21.4倍和34.6倍。药效学结果显示在每周两次每次1.0 mg/kg(rh CNTF等量)的给药频率和剂量下,PEG20k-CNTF比Tf-PEG5k-CNTF更显著地降低实验小鼠体重。; 迟胜男李增兰张纯殷爽冯翠王祺王祺刘永东; 关键词：聚乙二醇修饰睫状神经营养因子减轻体重

甲状腺影像检查的人工智能应用进展被引量：4: 2022年; 甲状腺疾病的发病率近年不断升高。甲状腺疾病的诊断主要依靠影像分析,但肉眼观察能够发现的信息有限,难以进行全面分析,而且诊断依赖医师的主观判断。人工智能是一门能够模拟与延伸人的智能、方法与技术的技术科学,它可以提取和量化关键的图像信息,使图像诊断从主观的定性任务转变为客观的定量分析。本文将对近年基于影像学资料的人工智能技术辅助诊断甲状腺疾病的相关研究进行综述.; 邱永康陈钊杨琦康磊; 关键词：甲状腺疾病人工智能

离子增加基因工程运动发酵单胞菌乙醇产量的研究: 2010年; 本研究是AkE．coii K-12中的cbpA基因中分离出的一段质子缓冲序列Pbp（编码24个氨基酸）整合到运动发酵单胞菌的基因组中，成功的筛选出一株乙醇产量高，耐酸性好的菌株Z．M．GH3。与原始菌种相比，Z．M．GH3平均产量可提高6．4％。在Z．M．GH3中，三种无机盐离子：0．12％七水合硫酸镁，0．2％硫酸铵和0．1％磷酸二氢钾分别可以提高8．9，7．5和5．9％的乙醇产量。在pH4．5的发酵培养基中添加0．12%的七水合硫酸镁，菌株Z．M．GH3乙醇产量为70．01g／1，较未加镁离子的培养基产量提高12．6％，基本上接近pH6．0时的产量70．11g／1。; 罗敏曾一梅魏娜熊平汪浩勇; 关键词：耐酸性 PBP 镁离子运动发酵单胞菌

HV12p-rPA血栓靶向脂质体的制备及体内溶栓实验: 2011年; 将通过蛋白质工程获得的抗凝溶栓双功能蛋白水蛭素12肽-瑞替普酶(HV12p-rPA)制备成靶向脂质体,并考察其体内溶栓效果。用薄膜分散-超声法制备HV12p-rPA脂质体,通过正交设计优化处方,采用碳二亚胺法偶联抗纤维蛋白原单克隆抗体(McAbSZ-65)制备HV12p-rPA靶向脂质体,采用大鼠颈总动脉血栓模型,考察HV12p-rPA靶向脂质体的体内溶栓效果。结果:最佳处方中HV12p-rPA脂质体的粒径为(142.45±1.20)nm,Zeta电位为(-30.63±0.48)mV,平均包封率为(91.59±1.39)%。靶向脂质体组(0.48±0.083)mg在相同剂量下(80k IU/kg)与PBS空白对照组(2.04±0.114)mg、游离HV12p-rPA组(1.2±0.100)mg和普通HV12p-rPA脂质体组(0.74±0.089)mg分别比较,其血栓干重明显减轻(P<0.05);靶向脂质体组与5倍剂量(400k IU/kg)的游离HV12p-rPA组(0.52±0.084)mg比较,其血栓干重较之偏轻(P>0.05)。制备出的靶向HV12p-rPA脂质体具有体内靶向溶栓效果。; 邓璇梁兰高漫潞康丽梅余蓉苏志国吴梧桐; 关键词：脂质体

疏水相互作用与亲水相互作用组合色谱纯化缩宫素被引量：2: 2010年; 将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合,建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺.先以纯水为流动相,采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集,后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化,两步纯化后,峰面积纯度达93.5%,提高了5.96倍,总回收率为50.1%,与用C18为介质的传统两步反相色谱纯化的结果相当.本方法有机溶剂用量仅为传统反相色谱的1/7,且两种介质都能耐受极端pH值清洗条件,重复利用率高.; 张晓鸥宋茂谦王长海Jan-Christer Janson顾铭; 关键词：聚己内酰胺琼脂糖凝胶缩宫素纯化

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