国家自然科学基金(30000163)
- 作品数：12 被引量：46H指数：5
- 相关作者：辛世杰段志泉张强冯宗承时德更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院重庆医科大学附属第一医院云南省第二人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金更多>>
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- 血管紧张素Ⅱ1型受体短发夹环RNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：8
- 2004年
- 目的 :RNA干扰 (RNAi)是一种新的高效特异地阻断基因表达的基因阻断技术。本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)的短发夹环RNA质粒 (pAT1R shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。 方法 :构建pAT1R shRNA质粒 ,并转染入鼠VSMC中 ,应用RT PCR及Westernblot检测血管平滑肌细胞AT1R的mRNA和蛋白表达的变化 ,验证 pAT1R shRNA是否具有RNAi作用 ;应用台盼蓝染色法和MTT法检测VSMC增殖情况。结果 :构建的质粒 pAT1R shRNA经测序鉴定验证与预期相符。转染组AT1R的mRNA和蛋白表达明显减少 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ;转染质粒同时加AngⅡ刺激的VSMC增生明显受到抑制 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :构建的pAT1R shRNA质粒具有RNAi作用 。
- 孙成林段志泉辛世杰冯宗承张京红张令宇张强
- 关键词：RNA干扰短发夹环RNA细胞增殖
- gax基因在移植静脉重塑早期过表达对平滑肌细胞转化态的影响被引量：7
- 2004年
- 目的 探讨 gax基因在移植静脉重塑早期过表达对平滑肌细胞 (VSMCs)表型转化的影响。方法 48只大鼠随机分为实验组与对照组 ,每组 2 4只 ,均行右颈内静脉移植到同侧颈总动脉显微手术。术后 14d取出移植静脉 ,检测并观察 gax基因、凋亡相关基因及VSMCs的表型转化状态。结果 实验组与对照组比较 :gaxmRNA表达明显增加 (10 6.9± 3 8.7,P <0 .0 1) ,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)阳性细胞明显增多 (5 0 .5± 2 0 .4,P <0 .0 1)和增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性细胞显著减少 (3 3 .86± 13 .3 8,P <0 .0 1) ;bcl 2表达明显下降 (13 .0±4.6,P <0 .0 1) ;p5 3、bax表达显著增高 (分别为 2 7.0 0± 7.2 5或 2 8.6± 5 .5 ,P均 <0 .0 1)。
- 杨镛宋清斌段志泉辛世杰张强时德陈翠菊罗开元
- 关键词：静脉平滑肌细胞
- 细胞间粘附分子-1在自体移植静脉中表达的动态变化被引量：7
- 2003年
- 目的 研究细胞间粘附分子 (ICAM ) 1在自体移植静脉中表达的动态变化规律 ,探讨其与内膜增生的关系及意义。方法 Wistar大鼠 5 6只 ,建立自体静脉移植模型 ,随机分为 7组 ,分别在移植后 1、3d ,1、2、4、6、8周切取移植静脉。半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)结合原位杂交定位研究移植血管中ICAM 1mRNA的表达 ,Westernblot联合免疫组织化学方法检测I CAM 1蛋白产物表达的变化。结果 ICAM 1mRNART PCR扩增见静脉移植 1～ 3d即出现表达增强 ,1～ 2周达到高峰 ,表达值分别为 ( 3 6.6± 12 .9) %和 ( 5 8.7± 11.1) % ,与其他组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,6～ 8周逐渐恢复正常 ,与原位杂交变化趋势基本一致。免疫组织化学结果见I CAM 1在移植 1～ 7d表达明显增多 ,2～ 4周达到高峰 ,分别为 ( 2 3 .5± 7.1) %和 ( 2 0 .6± 9.2 ) % ,与其他组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,8周恢复至正常水平 ,与Western蛋白印迹结果一致。结论ICAM 1与移植静脉内膜增生关系密切 ,可能成为防治内膜增生以及血管移植后狭窄闭塞一个新的治疗靶点。
- 胡新华张强段佩琰王新文辛世杰段志泉
- 关键词：自体移植静脉基因表达
- 内皮素、内皮素转化酶在自体静脉移植术后内膜增生中的作用被引量：2
- 2004年
- 目的探讨内皮素 1(endothelin 1,ET 1)及内源性内皮素转化酶 (endothelinconvertingenzyme ,ECE)在自体静脉移植术后内膜增生中的作用。 方法建立自体静脉移植模型 ,采用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学方法 ,对ECE、ET 1和增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)在移植静脉的表达情况进行分析。 结果移植术后 6h ,吻合口处静脉中膜即出现PCNA阳性平滑肌细胞 ,并随着时间推移逐渐增高 ,在 1～ 2周左右达到高峰。 2周后 ,PCNA阳性SMC开始减少 ,于术后 8周趋于平稳。移植血管ET 1、PCNA主要在平滑肌细胞中表达。在mRNA水平 ,随着移植术后时间的推移 ,ECE的表达逐渐增高 ,术后 1～ 2周达到高峰 ,在 8周左右趋于平稳 ,ET 1与ECE密切相关 (r =0 975 )。结论ET 1、ECE的动态变化过程具有相关性 ,ECE可能通过ECE→ET 1→SMC通路促进内膜增生。
- 宋清斌段志泉辛世杰罗英伟张海强张健
- 关键词：内皮素内皮素转化酶自体静脉移植内膜增生增殖细胞核抗原
- 血管紧张素Ⅱ1型受体短发夹环RNA抑制其在哺乳动物细胞中的表达被引量：1
- 2004年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的短发夹环RNA质粒(pAT1RshRNA)能否抑制AT1R在哺乳动物细胞中的表达。方法构建质粒并转染入鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中,24h后应用RTPCR及Westernblot检测VSMC的AT1R的mRNA和蛋白表达变化。结果构建的质粒经测序鉴定验证与预期相符,转染细胞后RTPCR吸光度值比值结果两质粒转染组分别为1.371±0.148和1.453±0.123,与对照组2.088±0.258比较差异有非常显著性(P<0.01);Westernblot结果两质粒转染组分别为1.121±0.037和1.202±0.068,与对照组3.168±0.210比较差异有非常显著性(P<0.01)。提示两质粒均能明显降低AT1R的mRNA和蛋白表达。结论构建的pAT1RshRNA具有RNA干扰作用,能在哺乳动物细胞中抑制该特异基因的表达。
- 孙成林段志泉冯宗承辛世杰古峻张京红张强
- 关键词：RNA哺乳动物细胞平滑肌细胞
- 人肝细胞生长因子基因腺病毒重组体的构建及转染血管平滑肌细胞的表达被引量：1
- 2004年
- 为探讨构建能表达肝细胞生长因子基因的腺病毒重组体的方法,以及这种腺病毒重组体能否在血管平滑肌细胞表达。将含有肝细胞生长因子基因片段的质粒用限制内切酶酶切,以琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因片段;将它用DNA连接酶插入至腺病毒穿梭质粒中,并用限制内切酶鉴别插入方向,得到插入方向正确的重组腺病毒穿梭质粒。用限制内切酶酶切重组腺病毒穿梭质粒和表达载体,使它们线性化;以电转化方法使它们共转化至BJ5183细胞中进行同源重组,构成肝细胞生长因子基因腺病毒重组体。以脂质体为转染介质,将肝细胞生长因子基因腺病毒重组体转染到人胚肾细胞中进行包装,使病毒复性具有感染能力。用包装后的肝细胞生长因子基因腺病毒重组体感染体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞;经逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹检测发现肝细胞生长因子呈现过表达。此外,酶切及测序发现重组腺病毒穿梭质粒和肝细胞生长因子基因腺病毒重组体是正确的;绿色荧光蛋白标记对重组体在人胚肾细胞中的包装及包装后感染大鼠主动脉平滑肌细胞进行了荧光示踪。结果提示。肝细胞生长因子基因腺病毒重组体构建成功,为血管疾病转基因治疗奠定了基础,具有一定临床价值。
- 冯宗承胡新华于彭孙达欣辛世杰张强
- 关键词：基因重组肝细胞生长因子腺病毒载体同源重组血管平滑肌细胞绿色荧光蛋白
- 鼠血管紧张素Ⅱ受体1短发夹环RNA质粒的构建与鉴定
- 2005年
- 目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体 1 (AT1R)的RNAi对血管紧张素II(AngⅡ )功能的影响,我们构建了AT1R短发夹环RNA(shRNA),以期为进行这方面研究提供基础。方法:在GeneBank中查到鼠AT1R的mRNA基因序列并输入到相应设计软件中,以此设计引物序列。经PCR扩增、酶切后,克隆于T载体并行酶切鉴定。结果:构建的鼠AT1RshRNA质粒经测序鉴定验证与预期相符。结论:本研究结果为进一步研究AT1RshRNA质粒的RNAi功能及其对AngⅡ功能影响的研究奠定了基础。
- 孙成林段志泉辛世杰冯宗承张令宇张强
- 关键词：短发夹环RNA
- 抑制核转录因子-κB对移植静脉内膜增生的影响被引量：7
- 2003年
- 目的 研究核转录因子 κB(NF κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯 (PDTC)对移植静脉内膜增生的影响。方法 Wistar大鼠 64只 ,建立自体静脉移植模型 ,随机分为 4组 :对照组、阴性对照组、PDTC 5 0mg/kg组、PDTC 2 0 0mg/kg组。实验组腹腔注射不同剂量的PDTC连续 3d ,对照组给以生理盐水或不予处理 ;分别在术后 1、2周取材 ,比较内膜增生程度 ;逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)检测NF κBp65mRNA及细胞间粘附分子 (ICAM) 1mRNA的表达 ,原位杂交定位ICAM 1的mRNA表达 ,Westernblot和免疫组织化学方法检测 p65、ICAM 1蛋白产物表达。结果PDTC明显抑制内膜增生 (P <0 .0 5 ) ,2 0 0mg/kg组受抑制程度明显 ,与 5 0mg/kg组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,抑制率 3 1%～ 5 4%。PDTC能够抑制 p65及ICAM 1的mRNA表达 (P <0 .0 1) ,p65和ICAM 1蛋白表达也显著低于各对照组 (P <0 .0 1) ,抑制率 44 %～ 68%。 结论 PDTC可显著抑制移植静脉内膜增生 ,其作用机制可能是通过抑制核转录因子 κB激活、减少黏附分子基因及蛋白产物表达而实现的。
- 胡新华张强辛世杰张真发段佩琰
- 关键词：内膜增生吡咯烷二硫代氨基甲酸酯细胞粘附分子-1静脉移植
- gax和HIF-1α基因在原发性肝癌组织中的表达及意义被引量：7
- 2005年
- 目的探讨同源盒基因(gax)和缺氧诱导因子(HIF1α)表达产物与原发性肝癌发生、发展的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白质印迹技术(Westernblot)分别检测20例原发性肝癌患者癌及癌旁肝组织中gax和HIF1α的mRNA以及蛋白质表达水平。结果肝癌组织中HIF1αmRNA(118.1±33.2)及蛋白表达(10.86±2.76)水平显著高于癌旁组织(分别为42.7±10.5与3.52±1.53,P均<0.05);肝癌组织中gaxmRNA表达(39.5±13.8)及其蛋白表达(4.10±1.26)水平低于癌旁组织(P均<0.05)。结论gax和HIF1α基因是调控肝癌组织血管生长的重要基因之一,与gax表达下调及HIF1α表达下调肝癌发生发展密切相关。
- 杨镛段志泉辛世杰陈翠菊罗开元时德
- 关键词：肝肿瘤缺氧诱导因子-1Α同源盒基因
- 移植静脉肌-内皮连接偶联系统早期重建对平滑肌细胞转化态的影响及意义被引量：1
- 2006年
- 目的探讨肌-内皮连接偶联系统在移植静脉重塑早期对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化态的影响。方法20只大鼠随机分为实验组(基因转染组)与对照组(非基因转染组),于术后14d取出移植静脉,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)及电镜等检测并观察缺氧诱导因子-1α(HIF-α)表达水平、肌-内皮连接结构、血管内皮细胞(VEC)及血管平滑肌细胞(VSMC)表型。结果实验组较对照组HIF-Iα过表达,VEC增生显著,VSMC以收缩表型居多,肌-内皮连接结构重建显著(P均<0.01)。结论肌-内皮连接偶联系统是稳定移植静脉重塑早期VSMC转化态重要的组织结构和评估血管结构与功能良好重建的重要标志物之一。
- 杨镛段志泉辛世杰罗开元时德
- 关键词：静脉
