国家自然科学基金(39970809)
- 作品数：6 被引量：43H指数：4
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- 相关机构：复旦大学复旦大学上海医学院更多>>
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- 体外培养人成骨细胞骨相关基因表达被引量：15
- 2002年
- 目的 探讨体外培养人成骨细胞骨相关基因表达情况。方法 应用组织块移行生长法分离培养人成骨细胞 ,活体观察与碱性磷酸酶染色观察其生物学特性 ,采用RT PCR方法检测培养 14d的二代人成骨细胞基因COL1,BGP ,OPG ,ON ,IGF 1,TGF β的表达情况 ,并用GAPDH予以矫正。结果 相差倒置显微镜观察可见细胞呈三角形、四角形或不规则形 ,5 0 %～ 90 %的细胞碱性磷酸酶呈阳性 ,培养 14d的二代人成骨细胞检测到基因COL1,BGP ,OPG ,ON ,IGF 1,TGF β的mRNA表达。结论 体外培养人成骨细胞可表达COL1,BGP ,OPG ,ON ,IGF 1,TGF
- 于明香金慰芳顾淑珠王洪复
- 关键词：成骨细胞体外培养基因表达老年性骨质疏松症RT-PCR
- 幼年成骨细胞体外培养传代衰老与70岁以上老年人成骨细胞的生物学特性比较被引量：3
- 2007年
- 目的通过对幼年人成骨细胞（osteoblasts，OB）体外培养传代衰老与70岁以上老年人成骨细胞的生物学特性比较，观察培养代数与年龄的相关性，拟建立幼年人成骨细胞体外培养传代模拟衰老模型。方法选取≤5岁（2例，男1，女1）和≥70岁（14例，男5，女9）两个年龄组的股骨颈松质骨进行成骨细胞体外培养，幼年组细胞自第二代开始每5～10d传代一次，至第17代终止。培养期间观察第2，5，10，15代细胞的形态、增殖能力与碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性，以及应用RT-PCR方法检测BGP，IGF-1，OPG，ODF基因mRNA表达，并与体外培养的70岁以上老年人成骨细胞进行比较。结果形态观察提示成骨细胞体外连续传代至第10-15代时，其胞体增大、折光性降低，呈塌陷状，细胞器稀少、糖原增多、溶酶体增多，与70岁以上老年人成骨细胞相似。MTT相对比值随传代次数增加而降低，第10-15代细胞明显低于第2-5代细胞，而与70岁以上老年人成骨细胞相似；ALP活性于10-15代时增高，与70岁以上老年人成骨细胞相似。幼年成骨细胞骨钙素（bone gla-protein／osteocalcin，BGP）、胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）、破骨细胞分化抑制因子（osteoprotegerin，OPG）、破骨细胞分化因子（osteoclast differentiation factor，ODF）、OPG／ODFmRNA表达随传代次数增加呈降低趋势，第10与15代细胞其表达量低于第2代细胞，也低于70岁以上老年人成骨细胞。结论幼年成骨细胞体外连续传代培养10-15代时，其形态结构、增殖能力与某些基因mRNA表达与体外培养第二代70岁以上老年人成骨细胞有相似性，有希望作为体外培养模拟衰老模型。
- 于明香王洪复金慰芳顾淑珠
- 关键词：人成骨细胞生物学特性
- 体外培养人成骨细胞随供体的增龄而改变被引量：12
- 2002年
- 目的 观察体外培养的不同年龄组人成骨细胞形态、增殖与功能改变。方法 选取≤5岁 ,30～ 4 0岁 ,5 0～ 6 0岁和≥ 70岁四个年龄组的髂骨、股骨近端或股骨颈松质骨进行培养。培养期间应用相差倒置显微镜活体观察与碱性磷酸酶染色观察成骨细胞的生物学特性。一代成骨细胞生长至汇合时消化计数继续培养 ,二代成骨细胞分别于培养 1天 ,5天检测细胞增殖率 (MTT法 ) ,5天时检测碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,14天时送电镜室进行透射电镜观察。结果 活体观察提示成骨细胞随增龄其胞体增大、变薄、空泡增多、突起拉长 ,汇合时趋向于长梭形 ,各年龄组成骨细胞碱性磷酸酶染色均呈阳性反应 ;电镜观察提示成骨细胞随增龄变得瘦长、细胞器减少、高尔基体不发达、糖原增多并呈堆积现象、溶酶体增多、出现空泡 ,细胞核内异染色质增多。成骨细胞生长至汇合时的细胞数与MTT相对比值随增龄而降低 (P <0 .0 1) ;ALP活性随增龄呈增高趋势 ,但差异无统计学意义。
- 于明香金慰芳顾淑珠王洪复
- 关键词：成骨细胞
- 体外培养人成骨细胞I型胶原合成与表达的增龄性改变
- 2005年
- 目的探讨体外培养不同年龄组人成骨细胞I型胶原(COL-1)表达的增龄性改变. 方法选择＜5岁、30～40岁、50～60岁及70～79岁4个年龄组骨折患者的松质骨,用1:1 DMEM-Ham F-12培养液进行培养.第2代细胞培养至7 d和13 d,分别定量留取培养48 h的条件培养液,第2代细胞一部分经诱导培养至14 d进行电镜观察,另一部分培养至14 d抽提细胞内总RNA,用逆转录聚合酶链反应方法半定量检测COL-1基因表达,并进行各年龄组比较. 结果成骨细胞经体外诱导培养后透射电镜下观察,细胞外基质中可见大量原胶原;细胞培养至7 d和13 d I型前胶原羧基端前肽(PICP)检测值均随年龄增长逐渐降低,与年龄之间呈显著负相关(男性7 d: r=-0.503, P＜0.05, 13 d: r=-0.662, P＜0.01; 女性7 d: r=-0.658, P＜0.01, 13 d: r=-0.770, P＜0.01);各年龄组成骨细胞均检测到COL-1基因mRNA表达,表达量＜5岁组较低,30～40岁组最高,之后随年龄增长逐渐降低,其表达量和年龄呈显著正相关(男性r=0.331,女性r= 0.327,均为P＜0.05),性别间差异无统计学意义. 结论体外培养人成骨细胞可合成原胶原,PICP分泌随增龄而降低,不同年龄组人成骨细胞均表达COL-1 mRNA,30～40岁后表达量随年龄增长而降低.
- 于明香王洪复金慰芳顾淑珠
- 关键词：成骨细胞
- 体外培养人成骨细胞OPG、ODF基因表达与增龄相关被引量：8
- 2004年
- 选择≤ 5岁 ,3 0～ 40岁 ,5 0～ 60岁 ,≥ 70岁四个年龄组的松质骨进行成骨细胞培养 ,第二代细胞培养至 14天用RT PCR检测骨保护蛋白 (OPG)、破骨细胞分化因子 (ODF)基因表达 ,结果显示不同年龄组人成骨细胞OPGmRNA。
- 于明香王洪复金慰芳顾淑珠
- 关键词：成骨细胞基因表达增龄
- 体外培养人成骨细胞BGP、IGF-1基因表达的增龄改变被引量：10
- 2002年
- 目的 探讨体外培养不同年龄组人成骨细胞BGP、IGF 1基因表达的增龄改变规律。方法 选择≤ 5岁、3 0～ 4 0岁、5 0～ 60岁、≥ 70岁 4个年龄组的松质骨 ,用 1∶1DMEM HamF 12培养液进行培养。不同年龄组两代人成骨细胞培养至 14d抽提细胞内总RNA ,应用RT PCR方法半定量检测BGP、IGF 1基因表达情况 ,并进行各年龄组比较。结果 各年龄组体外培养至 14d的两代人成骨细胞所抽提的细胞内总RNA量随增龄而降低 (男r=- 0 .783 ,女r=- 0 .873 ,均P <0 .0 0 1) ;各年龄组成骨细胞均检测到BGP与IGF 1的mRNA表达。BGP与IGF 1mRNA表达量于幼年组较低 ,3 0～ 4 0岁最高 ,之后随年龄增长逐渐降低 ,其表达量和年龄明显相关 (BGP男r2 =0 .3 2 8,女r2 =0 .3 0 1;IGF 1男r2 =0 .3 0 3 ,女r2 =0 .3 3 8,均P <0 .0 5 ) ,性别之间未见明显差异。结论 体外培养人成骨细胞的总RNA量随增龄而降低 ,不同年龄组人成骨细胞均表达BGP、IGF 1mRNA 。
- 于明香金慰芳顾淑珠王洪复
- 关键词：人成骨细胞体外培养基因表达增龄IGF-1
