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MRG15的克隆及其在正常和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达被引量：10: 2005年; 目的克隆死亡因子相关基因15(MRG15)并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达,比较二者的差异。方法用改良的消减杂交法克隆死亡因子相关基因15,地高辛标记MRG15cDNA片断制作探针,用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达,并作统计学处理。结果克隆到了死亡因子相关基因15的cDNA片断,长约639bp,死亡因子相关基因15在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;经统计分析,其在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达高于其在正常晶状体上皮细胞中的表达。结论MRG15在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中,其表达较正常晶状体增高,提示其可能在白内障的发生中起重要作用。; 刘燕周健刘新平药立波苏景宽惠延年; 关键词：MRNA 年龄相关性白内障晶状体上皮细胞

新基因c24的克隆及其在正常及白内障晶状体上皮细胞中的表达: 2007年; 目的克隆新基因c24并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(LECs)中的表达,并比较二者表达的差异。方法用改良的消减杂交法克隆新基因c24,地高辛标记c24cDNA片断制作探针,用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达,并进行统计学处理。结果克隆到了新基因c24的cDNA片断,长约532bp,c24在正常晶状体和年龄相关性白内障LECs中均有表达;其在年龄相关性白内障LECs中的表达高于其在正常LECs的表达。结论c24在正常晶状体和年龄相关性白内障LECs中均有表达;在年龄相关性白内障LECs中,其表达较正常晶状体增高,提示其可能在白内障的发生中起一定的作用。; 刘燕周健刘新平药立波惠延年; 关键词：年龄相关性白内障晶状体上皮细胞

硅油眼晶状体前囊膜及上皮细胞的病理学改变及Caspase-3表达被引量：8: 2003年; 目的　观察硅油充填眼晶状体前囊膜及上皮细胞的病理学改变及 Caspase- 3表达 ,探讨硅油引起白内障的病因及与凋亡的关系。方法　收集 2 7只晶状体前囊膜 ,通过HE染色和免疫组化方法对硅油眼的晶状体前囊膜和上皮细胞及 Caspase- 3在其上的表达进行观察。结果　前囊膜下许多空间被硅油滴占据 ;Caspase- 3在晶状体上皮细胞有很好的表达 ,2 7例中有 2 3例呈阳性表达。结论　硅油滴与白内障的发生、发展有关 ;; 孙红惠延年韩泉洪马吉献; 关键词：硅油晶状体上皮细胞

一种用少量标本快速构建老年性白内障消减cDNA文库的方法被引量：3: 2002年; 为从少量标本中获得含较多大片段的、高质量的老年性白内障消减cDNA文库 ,利用磁珠分离、生物素标记的改良消减杂交法获得差异cDNA ,利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,从而成功构建老年性白内障消减cDNA文库 .在文库中随机挑取的 2 2个克隆中 ,10 0 0bp以上的片段有 7个 ,占 31 8% ,75 0bp以上有 15个 ,占 6 8 2 % .所得cDNA片段较大 ,可以满足下一步研究需要 .; 刘燕周健刘新平药立波王吉村苏景宽惠延年; 关键词：老年性白内障

老年性白内障与正常晶体上皮细胞中差异表达基因的筛选被引量：6: 2003年; 目的 :筛选老年性白内障与正常晶体上皮细胞的差异表达基因 .方法 :利用改良消减杂交法获得差异cDNA ,利用PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,将其克隆入质粒载体 ,通过反向点杂交排除假阳性克隆后 ,阳性克隆测序与Gen Bank中的序列进行比较 ,新序列进行计算机分析 .结果 :在文库中随机挑选约 6 0 0个克隆酶切鉴定 ,获得≥ 75 0bp片段4 0 0个 .经反向点杂交 ,排除假阳性克隆后 ,共得到阳性克隆15 0个 ;测序的 5 0个片段中 ,有 30个已知基因 (包括 2 0个功能已知基因、10个序列已知但功能未知基因 ) ,3个新序列 .新序列中有一个的氨基酸序列与假想的锌指蛋白有 4 5 %同源性 ,可能参与细胞生长调控与代谢 .结论 :改良消减杂交法可以快速有效地获得老年性白内障差异表达基因。; 刘燕刘新平药立波周健王吉村柴玉波胡丹苏景宽惠延年; 关键词：上皮细胞差异表达基因

人MRG15基因荧光真核表达载体的构建及其在培养人晶状体上皮细胞的表达: 2005年; 目的克隆人MRG15(MORF4-related-gene on chromosome15)的编码基因,构建荧光表达载体,并检测其在培养人晶状体上皮细胞中的表达,为研究MRG15与年龄相关性白内障(age related cataract,ARC)的相关性奠定基础。方法用RT-PCR的方法从人ARC的晶状体前囊膜中扩增MRG15的编码基因,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至荧光真核表达载体pEGP-N2中,酶切鉴定正确后采用脂质体法,瞬时转染培养人晶状体上皮细胞,荧光显微镜下检测MRG15-pEGP-N2的定位。结果测序证实,从人ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码基因的序列及读框全部正确。重组质粒MRG15-pEGP-N2经酶切后产生与理论预期长度相符的片段。脂质体法转染后24h,观察到其主要在培养人晶状体上皮细胞的细胞核中表达。结论克隆了人MRG15的编码基因,成功构建了荧光真核表达载体MRG15-pEGP-N2,并可在培养人晶状体上皮细胞中表达。; 张自峰周健惠延年张健刘燕刘新平药立波王雨生; 关键词：克隆年龄相关性白内障

用改良消减杂交结合选择性PCR法构建老年性白内障消减cDNA文库被引量：2: 2003年; 为构建含较多大片段的高质量的老年性白内障消减cDNA文库 ,利用生物素标记、磁珠分离的改良消减杂交法获得差异cDNA .利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA ,将其与T 载体进行T A连接并转化入大肠杆菌 ,成功构建老年性白内障消减cDNA文库 .共获得 4 0 0 0余个克隆 ,随机挑取的 2 2个克隆中 ,≥ 10 0 0bp的片段有 7个 ,占 31 8% ,≥ 75 0bp有 15个 ,占 6 8 2 % .将≥ 75 0bp的 15个克隆进行反向点杂交 ,排除其中假阳性克隆 ,阳性克隆经测序并与GenBank比较 ,得到 6个已知基因、1个新基因 ,6个已知基因中 4个为全长基因 ,说明所得cDNA片段较大 ,文库质量较高 .改良消减杂交法结合选择性PCR法可以快速有效地获得大片段高质量的消减cDNA文库 ,为进一步筛选。; 刘燕刘新平药立波周健王吉村苏景宽惠延年; 关键词：消减杂交老年性白内障

Ⅰ型胶原基因的克隆及其在正常及年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的表达被引量：2: 2005年; 目的:克隆Ⅰ型胶原基因并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的表达,并比较二者表达的差异.方法:用改良的消减杂交法克隆Ⅰ型胶原基因,地高辛标记Ⅰ型胶原cDNA片段制作探针,用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达,并作统计学处理.结果:克隆到了Ⅰ型胶原基因的cDNA片段,长约600bp,Ⅰ型胶原在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;阳性细胞百分率分别为(73.0±14.9)%和(75.0± 16.3)%,阳性表达的积分指数分别为(0.60±0.15)和 (0.73±0.16),经统计分析,P>0.05,其在年龄相关性白内障晶体上皮细胞的表达与在正常晶体上皮细胞的表达未见明显差异.结论:Ⅰ型胶原在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中均有表达;在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中,其Ⅰ型胶原的表达较正常晶状体未见减少,提示?; 刘燕周健刘新平药立波苏景宽惠延年; 关键词：胶原白内障上皮细胞

稳定表达MRG15基因的人晶状体上皮细胞株的建立被引量：1: 2006年; 目的:克隆人15号染色体上死亡相关因子(MORF4-re-latedgeneonchromosome15,MRG15)基因的编码区全长,构建真核表达载体,建立稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株,为MRG15在年龄相关性白内障(agerelatedcataract,ARC)发生中相关功能的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR由人ARC晶状体前囊膜标本中扩增MRG15的编码区全长,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,采用脂质体法对培养人晶状体上皮细胞进行稳定转染,挑取单克隆,用Westernblot进行MRG15表达的鉴定。结果:测序证实,由ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码区全长序列正确。重组质粒pcDNA3.1(+)-MRG15经酶切后释放出与理论长度相符的片段。培养人晶状体上皮细胞稳定转染挑取单克隆后,经Westernblot检测,30个克隆中有19个MRG15的表达量明显增高。结论:克隆了人MRG15的编码区全长,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MRG15,并建立了稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株。; 张自峰张健周健惠延年惠玲刘新平药立波王雨生崔志利; 关键词：年龄相关性白内障晶状体上皮细胞克隆

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国家自然科学基金(30000185)

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