天津市应用基础与前沿技术研究计划(08JCZDJC22600)
- 作品数：10 被引量：78H指数：4
- 相关作者：黄金海刘莹庄世文孙跃辉王静思更多>>
- 相关机构：天津大学中国兽医药品监察所华南农业大学更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 耐热型复合乳酸菌冻干保护剂的研究被引量：9
- 2011年
- 为获得对于混合乳酸杆菌最佳的耐热冻干保护剂配方,考察了不同冻干剂单因子添加物及5种冻干保护剂配方对冷冻干燥后乳酸菌的存活率、耐热性能,失水情况和感官指标,利用中心组合响应曲面法设计,获得以活菌率,耐热性和失水率为控制指标的保护剂组分优化的多元二次方程,并进行显著性分析。结果表明,通过初步筛选获得感官良好、复溶后相容性好的冻干介质,进一步条件优化得到最佳配方。最佳冻干保护剂配方为脱脂乳10%,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)5%,海藻糖5%,维生素C为0.5%(均为质量分数),此时冻干后活菌率的预测值可达到93.05%,37℃保存10 d后活菌率预测值可达到77.26%,具有较好的耐热性能。
- 孙盈黄金海李莹贾程坤高嵽刘阳鲁珂成
- 关键词：乳酸菌冻干保护剂耐热性
- 葡萄球菌肠毒素DAS-ELISA检测方法的建立及应用被引量：2
- 2012年
- 为筛选特异性强、亲和力高、可夹心配对单克隆抗体4A2和5C12,通过方阵试验优化工作条件,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)的双抗体夹心-酶联免疫吸附试验定量检测方法。结果表明:该方法标准曲线为y=4.074x-1.1888,R2=0.9892,检测下限为0.307μg/mL,批内和批间变异系数均小于10%,脱脂乳粉中SEs掺入试验测定回收率为103%～107%,特异性、重复性和稳定性良好;应用所建双抗体夹心-酶联免疫吸附试验方法,对数株葡萄球菌分离株体外培养上清中SEs产生的动态变化进行分析表明,不同菌株SEs分泌能力不同,且0～20h分泌量不断增加,对鲜牛乳和猪淋巴组织匀浆中的SEs进行检测,检出率分别为51.7%和59.1%,并与进口商品化试剂盒检测结果比对,一致率达92.5%,表明食品中SEs污染的普遍存在。所建方法灵敏高效,可为食源性污染监控提供有效手段。
- 刘鹏翀黄金海刘莉刘莹刘壮孙盈
- 关键词：葡萄球菌葡萄球菌肠毒素
- 葡萄球菌肠毒素O表达及其生物学活性的初步分析被引量：1
- 2009年
- 目的克隆葡萄球菌肠毒素O（seo）基因，构建其两种原核表达载体，表达、纯化重组蛋白SEO，并对其生物活性进行初步研究。方法设计引物PCR获得seo成熟肽基因，将其分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1、pET28a，转化E．coli BL21、E．coli BL21（DE3），重组蛋白分别经GST亲和层析、镍螯合层析纯化，利用Westernblot验证重组SEO的免疫原性，MTT法测定重组SEO对ICR小鼠脾淋巴细胞的增殖作用，Caspase3酶活及DNA电泳分析重组SEO诱导细胞凋亡的能力。结果克隆的seo基因序列与报道的序列完全相同。纯化获得重组蛋白GST—SEO和P28-SEO的表达量分别占菌体蛋白的25％和22％。免疫印迹表明两种蛋白均具有良好的免疫原性。生物活性检测表明，低剂量的肠毒素对小鼠脾淋巴细胞有刺激增殖作用，较高剂量则会导致细胞凋亡。结论两种重组的SEO仍具有超抗原的活性，对小鼠脾淋巴细胞具有诱导凋亡的能力。
- 刘莹黄金海孙跃辉张丽霞王建华庄世文王静思李琳徐丹丹
- 关键词：葡萄球菌生物学活性
- 不同食品来源酵母分离株的生物学特性比较
- 2009年
- 以7类不同食品来源的14株酵母分离株为试验对象,从形态学观察、生理生化反应、抗性试验进行鉴定,分析了各酵母分离株的生物学特性及其生产应用潜力。将14株酵母菌分别归类为毕赤氏酵母属、类酵母属、丝孢酵母属、丝孢毕赤氏酵母属和接合酵母属等5个属。根据其发酵特性可作为不同食品的工业生产发酵菌种。
- 庄世文黄金海孙跃辉王静思刘莹
- 关键词：酵母菌生物学特性
- 葡萄球菌肠毒素基因分型PCR检测技术的研究被引量：19
- 2008年
- 通过生物信息学分析,设计了不同基因型肠毒素检测引物;应用含溶菌酶的碱裂解法提取葡萄球菌DNA及梯度PCR方法提高了肠毒素检出率和特异性。从国内28株葡萄球菌分离株中共检测出14种不同型的肠毒素基因(sea-see、tsst-1、seg-sei、sek-sel、sen-seo、seq-ser和seu),未检测到sej和sem基因。毒素基因携带率为16.67%,同时携带4种及以上毒素基因的菌株有11株,占39.29%,其中sek、seq和sea毒素基因在所研究菌株中分布最广,分别占到15.50%、14.30%和10.70%。结果表明不同葡萄球菌菌株间毒素型的关联度不同,sek与seq,seb和sed,sec、sei、sen和seu基因型呈现密切相关,各型肠毒素的分布还与菌株分离来源有着密切联系。所建立的PCR方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型和分布的研究。
- 李琳黄金海赵耘王聪明董艳娇王静思刘莹
- 关键词：金黄色葡萄球菌PCR
- 重组葡萄球菌肠毒素SEQ的生物活性及其结构关系分析被引量：1
- 2010年
- 采用原核表达系统表达、亲和纯化重组蛋白、Western-blot、MTT比色法及同源模建的方法,分析了新型葡萄球菌肠毒素SEQ的生物学活性及其与结构的关系,预测了发挥超抗原活性的功能位点。结果表明,表达纯化的可溶性重组GST-SEQ、His-SEQ蛋白表达量分别占菌体蛋白的20%和25%,且均具有良好的免疫原性以及诱导小鼠脾淋巴细胞分化增殖的能力,SEQ成熟肽中α-螺旋、β-折叠、无规则蜷曲分别约32,68,116aa;SEQ毒素潜在的与MHCⅡVβ链结合的关键位点为H169、H207、D209,而与TCR的结合域位于α3-β8环区域。2种重组SEQ肠毒素均具有超抗原活性,这与其存在于细胞MHCⅡVβ链及TCR作用的结合域有关。
- 曾琳姣黄金海刘莹庄世文薛照辉
- 关键词：葡萄球菌生物活性
- 酵母菌合成酯类化合物关键酶基因的研究进展被引量：8
- 2012年
- 酯类化合物是发酵食品的重要香气成分之一,酵母发酵是酯类化合物产生的主要来源。在分析酵母菌酯类生物合成途径的基础上,对合成途径中的关键酶基因,包括脂肪酶/酯酶基因、醇酰基转移酶基因和醇脱氢酶基因及其酶作用进展作了综述。
- 庄世文付俊淑黄金海
- 关键词：酵母酯类化合物关键酶基因
- 食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立被引量：38
- 2012年
- 食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术(LAMP),分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.
- 黄金海孙跃辉陈瑞庄世文刘莹王静思
- 关键词：沙门氏菌环介导等温扩增技术
- 葡萄球菌A型肠毒素检测竞争ELISA方法的建立被引量：3
- 2010年
- 为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST-SEA,以HIS-SEA为包被抗原,以GST-SEA、天然SEA肠毒素为竞争抗原,确立了SEA型肠毒素ELISA检测的工作条件:包被浓度为2.5μg/mL,阳性血清稀释度为1∶50,辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡免疫球蛋白工作浓度为1∶2000。建立了以重组肠毒素GST-SEA作为竞争抗原检测葡萄球菌肠毒素SEA的间接竞争ELISA(ciELISA)方法,竞争肠毒素GST-SEA蛋白浓度x与P/N值y的关系式:x(GST-SEA)=1.99-y/0.34,R2(GST-SEA)=0.9964,线性检测范围均为1～62.5ng/mL,最低检测量为1ng/mL,此方法丰富了食品中A型肠毒素的检测手段。
- 徐丹丹黄金海刘莹孙跃辉周凤娟
- 关键词：重组蛋白
- 葡萄球菌分离株肠毒素sek基因的分布及其蛋白的表达纯化
- 2010年
- 目的:了解国内葡萄球菌分离株携带肠毒素sek基因的分布情况,获得纯化的重组SEK蛋白并初步了解其生物学活性。方法:应用PCR方法检测葡萄球菌属122株分离株sek分布,克隆了葡萄球菌PTJ-2分离株的sek成熟肽基因,构建了重组质粒pGEX-6P-sek、pET28-sek重组表达载体,经GST亲和层析、镍螯合层析,制备纯化的重组蛋白GST-SEK、P28-SEK。通过Western blot检测重组蛋白的免疫原性及其诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡的能力。结果:122株葡萄球菌属分离株sek基因的检出率为23%(28/122);PTJ-2分离株与已报道sek基因的同源性在97.62%以上。获得2种具有良好免疫原性,表达量占菌体蛋白的24%、17%的可溶性重组蛋白。结论:除已报道的金黄色葡萄球菌外,国内非致病性葡萄球菌分离株也可携带sek基因。PTJ-2国内分离株SEK蛋白与已报道同型肠毒素存在3个氨基酸变异。重组的SEK蛋白可诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡。
- 黄金海刘业兵刘莹孙跃辉李琳张丽霞
- 关键词：葡萄球菌纯化
