国家自然科学基金(81250035)
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
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- 榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体对肿瘤Hep-2细胞克隆形成和侵袭的影响被引量：7
- 2014年
- 目的 观察榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体对人肿瘤细胞克隆形成和侵袭的影响.方法 制备榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体,采用不同浓度的榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体处理人喉癌Hep-2细胞后,以平板克隆形成方法检测癌细胞克隆形成,以Transwell方法检测肿瘤细胞侵袭能力.结果 平板克隆实验结果显示,对照组、不同浓度（2.5、5.0、10.0 mg/L）榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体处理组克隆形成数分别为（102±8）、（82 ±5）、（57±6）和（25 ±3）个.Transewell结果显示,空白对照组、不同浓度（2.5、5.0、10.0 mg/L）榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体处理组细胞穿过滤膜的细胞分别为（123 ±8）、（89±7）、（60±6）和（35 ±5）个.结论 榄香烯超顺磁性隐形纳米脂质体可抑制人喉癌细胞克隆形成和侵袭,具有潜在的应用价值.
- 范钰满昌峰徐娟沈荣
- 关键词：喉肿瘤榄香烯超顺磁性隐形纳米
- 树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对人大肠癌SW620细胞增殖和端粒酶活性的影响被引量：7
- 2013年
- 目的 探讨细胞因子从大肠癌癌患者外周血贴壁单个核细胞（PBMCs）诱导的树突状细胞（DC）与杀伤细胞（CIK）对人大肠癌SW620细胞增殖的作用及分子机制.方法 用大肠癌患者大肠癌组织裂解物（肿瘤抗原）致敏经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、肿瘤坏死因子（TNF）-α及白细胞介素（IL）-4等诱导PBMC产生的DC.用干扰素（IFN）-γ、IL-2和人CD3单克隆抗体（hCD3mAb）等诱导该PBMC的悬浮细胞产生CIK细胞.用6孔板将DC-CIK细胞与SW620细胞在同一培养体系内经分别培养24、48、72 h.以噻唑蓝（MTT）法检测癌细胞增殖；以抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）-酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测癌细胞端粒酶活性；采用Western blot法检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白.结果 大肠癌细胞经DC-CIK处理72 h后,空白对照组和DC-CIK-a 、DC-CIK-b组相对增殖率分别为（95.6±2.2）％、（73.5±1.8）％、（51.8±1.6）％；端粒酶活性检测发现,空白对照组24、48、72 h端粒酶活性分别为1.568±0.078、1.535±0.056和1.527±0.039;DC-CIK-a组24、48、72 h端粒酶活性分别为1.356±0.056、1.108±0.039和0.578±0.028；DC-CIK-b组24、48、72 h端粒酶活性分别为1.181 ±0.075、0.718±0.039、0.386±0.036.Westernblot检测发现,与空白对照组比较,DC-CIK-a组和DC-CIK-b组hTERT蛋白水平明显下调.结论 DC-CIK细胞可明显抑制大肠癌细胞增殖；抑制端粒酶活性是其重要机制之一.
- 方娜满昌峰徐娟彭辉勇蒋鹏程范钰
- 关键词：大肠癌增殖端粒酶
- RNA干扰下调假基因Cripto-3表达对大肠癌细胞增殖和侵袭的影响被引量：7
- 2013年
- 目的 观察小干扰RNA（siRNA）下调假基因Cripto-3（Cr-3）对人大肠癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 构建Cr-3 siRNA（S1、S2和S3）,分别以3个siRNA转染大肠癌SW-620细胞后,采用荧光实时定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测筛选出效果最好的siRNA.SW-620细胞分为3组：空白对照组（con-a）、空载质粒对照组（con-b）和Cr-3 siRNA组（siRNA）,其中,siRNA组以Cr-3 siRNA转染处理.用噻唑蓝（MTT）方法检测癌细胞增殖,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,并作统计学分析.结果 S1、S2和S3均能下调Cr-3 mRNA的表达,有效率分别为83.5％、61.6％和42.8％,说明S1效果最好.以S1转染大肠癌SW620细胞株后,MTT结果显示,72 h con-a、con-b和siRNA组相对增殖率分别为（0.927 ±0.037）％、（0.922 ±0.035）％、（0.663 ±0.018）％ （P ＜0.05）；Transwell结果显示,con-a、con-b和siRNA组穿膜细胞数分别为（38 ±4）、（40±3）和（8±1）个（P＜0.05）.结论 假基因Cr-3在大肠癌细胞增殖侵袭中起着重要的作用；采用RNA干扰下调Cr-3表达可抑制大肠癌细胞增殖和侵袭.
- 范钰满昌峰徐娟彭辉勇张恒祁卫东蒋鹏程
- 关键词：大肠肿瘤RNA干扰
- 超顺磁性纳米榄香烯对大肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭及微小RNA-155表达的影响被引量：10
- 2013年
- 目的 观察超顺磁性纳米榄香烯对人大肠癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法 制备超顺磁性纳米榄香烯,采用不同浓度的超顺磁性纳米榄香烯处理人大肠癌HCT116细胞后,以噻唑蓝（MTT）法检测癌细胞增殖,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法检测癌细胞微小RNA（miR）-155 mRNA水平.结果 超顺磁性纳米榄香烯对人大肠癌HCT116细胞增殖具有一定的抑制作用.在2.5～25.0 mg/L浓度范围内,超顺磁性纳米榄香烯对癌细胞的抑制与浓度呈正相关（r =0.685）;Transewell结果显示,空白对照组、不同浓度（5、10、20 mg/L）超顺磁性纳米榄香烯处理组细胞穿过滤膜的细胞分别为（44.8±1.5）、（32.2±1.3）、（18.2±1.5）和（8.6±1.2）个.FQ-PCR结果显示,与空白对照组比较,超顺磁性纳米榄香烯组miR-155 mRNA水平明显下调,且呈浓度依赖性（P＜0.01）.结论 超顺磁性纳米榄香烯可降低人大肠癌细胞增殖、侵袭能力,下调miR-155是其重要机制之一.
- 范钰徐娟满昌峰彭辉勇单秀红沈荣祁卫东
- 关键词：大肠肿瘤纳米榄香烯
- siRNA下调叉头框M1基因表达对大肠癌细胞化疗敏感性的影响
- 2013年
- 目的:观察叉头转录因子M1(forkhead box protein M1,FoxM1)基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对大肠癌细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法:设计合成3个FoxM1 siRNA,转染人大肠癌SW620细胞后,采用定量PCR方法筛选下调FoxM1 mRNA效果最好的siRNA,然后以不同浓度(3.125,6.25,12.5nmol/L)的该siRNA转染处理大肠癌细胞,用RPMI 1640代替FoxM1 siRNA作为空白对照组(Con-A);48 h后,各组细胞分别用伊立替康(Irinotecan,CPT-11,7.5μmol/L)处理,以MTT法检测siRNA转染对各组细胞增殖及对伊立替康敏感性的影响;以蛋白质印迹方法检测Akt磷酸化情况。结果:MTT结果显示,空白对照组、siRNA 3.125 nmol/L组、siRNA 6.25 nmol/L组和siRNA 12.5 nmol/L组SW620细胞生长抑制率分别为18.36%,39.78%,58.18%,78.28%。统计学分析显示,抑制率呈浓度依赖性(r=0.775,P<0.05)。蛋白质印迹结果表明,siRNA转染组Akt磷酸化水平明显下调。结论:FoxM1基因siRNA可提高大肠癌细胞化疗敏感性;下调Akt磷酸化水平是其重要机制之一。
- 何亚龙王晓燕张尤历范钰
- 关键词：大肠肿瘤化疗敏感性
- RNA干扰假基因Cripto-3表达对大肠癌细胞增殖和侵袭的影响
- 2013年
- 目的:探讨RNA干扰下调假基因Cripto-3(Cr-3)对人大肠癌细胞SW480增殖和侵袭的影响。方法:将大肠癌细胞随机分为5组:空白对照组,空载对照组,siRNA转染组(5 nmol/L组、10 nmol/L和20 nmol/L组)。将Cr-3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人大肠癌SW480细胞后,采用实时荧光定量PCR检测Cr-3表达水平;分别采用平板克隆形成实验和Transwell法检测大肠癌细胞的增殖和侵袭能力。结果:与空白对照组和空载对照组比较,siRNA转染组Cr-3表达水平均明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.05),癌细胞克隆形成和穿过滤膜的细胞均明显减少,且与浓度相关(P<0.05)。结论:假基因Cr-3在大肠癌细胞增殖侵袭中起着重要的作用,可能是大肠癌诊疗中的一个重要靶点。
- 朱灵蒋鹏程满昌峰彭辉勇徐娟范钰
- 关键词：大肠癌小干扰RNA
- RNA干扰下调FoxM1基因表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响
- 2013年
- 目的探讨RNA干扰下调叉头转录因子M1（Forkheadboxprotein M1，FoxMl）基因小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）对胰腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及分子机制。方法设计合成3个FoxM1siRNA，转染人胰腺癌Panc-1细胞后采用定量PCR方法筛选下调FoxM1mRNA效果最好的siRNA；然后以该siRNA转染Panc-1细胞后，分别以实时定量PCR检测各组细胞FoxM1mRNA表达情况；以不同浓度siRNA转染胰腺癌细胞后，分别以MTT法检测吉西他滨（20nM，Gemcitabine）对各组细胞生长和化疗敏感性的影响；以蛋白质印迹方法检测Akt磷酸化情况。结果3个siRNA均明显下调FoxM1mRNA水平，以S3效果最好。MTT结果显示，Con-A＋Gem组、Con—B＋Gem组、siRNA（3．125nM）＋GemsiRNA、siRNA（6．25nM）＋Gem、siRNA（12．5nM）＋Gem组抑制率分别为17．78％、17．56％、35．39％、52．81％及70．98％。蛋白质印迹检测发现，siRNA转染组Akt磷酸化水平明显下调。结论FoxM1基因siRNA可促进胰腺癌细胞化疗敏感性，通过下调Akt磷酸化水平可能是其重要机制之一，但其内在的分子机制尚需进一步探讨。
- 满昌峰彭辉勇徐娟陈培勤范钰
- 关键词：化疗敏感性AKT
- 小干扰RNA下调畸胎瘤衍生生长因子-1基因表达对黑素瘤细胞黏附、侵袭和尿激酶纤溶酶原激活物的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察畸胎瘤衍生生长因子-1（TDGF-1）基因小干扰RNA对黑素瘤细胞黏附和侵袭的影响。方法培养人黑素瘤A-375、C-918及M14细胞株，以实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法检测TDGF—1基因mRNA水平，筛选出TDGF-1表达最高者。采用TDGF-1基因小干扰RNA（siRNA）转染黑素瘤细胞株，分别以FQ—PCR和免疫荧光方法观察TDGF-1基因mRNA和蛋白水平，然后以噻唑蓝（MMT）法检测细胞黏附，以Boyden方法检测癌细胞侵袭力。结果FQ-PCR方法显示，A-375、C-918及M14细胞株TDGF-1 mRNA水平分别为0．589±0．081、0．712±0．065、1．517±0．085；以TDGF-1 siRNA转染黑素瘤M14细胞后，癌细胞TDGF-1基因mRNA和蛋白表达明显下降，且呈浓度依赖性（P〈0．01）；细胞黏附结果显示，Con-A、Con—B、3．125nmol／L、6．250nmol／L和12．500nmol/L组吸光度A值分别为0．89±0．15、0．85±0．12、0．62±0．09、0．51±0．08、0．33±0．06。Boyden小室试验结果显示，Con-A、Con-B、3．125nmol／L、6．250nmol／L和12．500nmol／L组穿膜细胞数分别为（37．8±1．6）、（36．9±1．5）、（21．8±1．2）、（11．6±0．8）和（5．6±0．5）个。酶联免疫吸附试验（ELISA）结果显示，Con—A、Con-B、3．125nmol／L、6．250nmol／L和12．500nmol／L组尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）含量分别为（85．2±1．8）、（84．8±1．5）、（51．6±1．2）、（35．6±0．8）、（17．8±0．6）ng／L。结论TDGF-1基因在黑素瘤细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用；以siRNA转染黑素瘤细胞，可抑制黑素瘤细胞黏附和侵袭能力，抑制uPA是其重要机制之一。
- 方娜丁克云范钰
- 关键词：黑素瘤尿激酶纤溶酶原激活物
- 假基因Cripto-3 mRNA在人大肠癌组织中的临床意义被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨假基因Cripto-3（Cr-3）在人大肠癌组织中的临床意义.方法 收集人大肠癌和正常大肠黏膜组织,采用荧光实时定量聚合酶链反应法检测组织中mRNA水平,分析其表达与患者性别、肿瘤发生部位、分化程度、浆膜侵袭、淋巴结转移及Duke＇s分期的相关性,并作统计学处理.结果 在大肠癌组织中Cr-3阳性率为75.0％ （27/36）,在正常大肠黏膜组织中,Cr-3阳性率为0％ （0/36,P＜0.05）.进一步发现Cr-3阳性率分别与浆膜层侵袭、淋巴结转移和Duke＇s分期有关（P＜0.05）;而与患者性别、肿瘤发生部位和分化程度无关（P＞0.05）.结论 假基因Cr-3可能是大肠癌基因诊断和治疗中重要靶点之一.
- 范钰徐娟满昌峰彭辉勇祁卫东蒋鹏程
- 关键词：大肠肿瘤
