青年科技基金(10040606Y13)
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 相关作者：吕合作胡建国赵保明郭术俊朱海更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院蚌埠医学院第二附属医院安徽医科大学更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金青年科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒的构建及其在活细胞内的相互作用被引量：2
- 2011年
- 目的构建pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察Olig2与Id4的相互作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增Olig2和Id4基因,分别定向克隆到pBiFC-VN173和pBiFC-VC155载体中,获得pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序;用脂质体方法共转染pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4质粒到人结肠癌细胞系SW-1116细胞中,在荧光显微镜下观察Olig2与Id4之间的相互作用。结果通过酶切鉴定和测序表明成功构建了pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒;该质粒能够有效地共同转染到靶细胞,Olig2和Id4在靶细胞中能够高效表达,并可以相互结合出现BiFC荧光信号,且该信号主要分布于胞质中。结论成功构建了用于BiFC技术的真核表达载体,并在活细胞内检测到Olig2和Id4分子的相互结合。
- 郭术俊赵保明唐洁胡建国吕合作
- 关键词：OLIG2重组质粒细胞定位
- 用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定
- 2010年
- 目的:构建pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,并进行鉴定。方法:以pEGFP-N3-Olig1真核表达质粒为模板扩增出Olig1基因,与pBiFC-VN173载体连接,构建pBiFC-VN173-Olig1真核表达质粒;利用RT-PCR方法从新生大鼠脊髓中提取Id2基因片段,与pBiFC-VC155载体连接,构建pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序。结果:通过酶切鉴定、测序,证明pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2重组质粒序列和编码框均正确构建成功。结论:成功构建了pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,为进一步在活细胞内研究Olig1和Id2的相互作用提供了实验基础。
- 郭术俊赵保明吕合作胡建国
- 关键词：基因ID2克隆酶切
- Bhlha15转录因子的研究进展
- 2011年
- Bhlha15（basic helix-loop-helix family,member a15）也称Mist1（muscle intestine and stomach exprssion 1）,或Bhlhb8（basic helix-loop-helix family,member b8）,属于碱性螺旋-环-螺旋（basic helix-loop-helix,bHLH）转录因子家族。bHLH转录因子的名称来自其结构中的bHLH基序,该基序约含60个氨基酸,由一个能与DNA结合的碱性区域（basicregion）和螺旋-环-螺旋模体（helix1-loop-helix motif）组成。
- 徐成岭吴俊英吕合作
- 关键词：基因表达转录因子
- SD大鼠脊髓损伤前后外周血T淋巴细胞亚群的变化被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨SD大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)前后外周血T淋巴细胞亚群的动态变化。方法:取22只健康SD大鼠(雌雄各半),采用NYU脊髓损伤仪制作重物坠落SCI模型。于SCI前、SCI后1、3、5、7和14 d采外周血,用流式细胞术检测外周血淋巴细胞中CD3+T、CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞比例的变化。结果:SCI前与SCI后1、7和14 d CD3+CD8+T细胞比例均无明显变化(P>0.05),而SCI后第3、5 d均高于SCI前14 d(P<0.01)。SCI后1、3、5 d及7 d的CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞比例,以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均明显低于SCI前(P<0.01)。在SCI后14 d,上述各T细胞亚群的比例均恢复到术前水平,两时间点之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:SCI后,SD大鼠总T细胞和CD4+T细胞明显降低,CD3+CD4+/CD3+CD8+下降。提示SCI后的早期阶段,可能存在T细胞功能的异常。
- 骆二红胡建国吕合作
- 关键词：脊髓损伤淋巴细胞亚群流式细胞术SD大鼠
- Olig2过表达对神经干细胞向少突胶质细胞分化的影响被引量：1
- 2010年
- 目的：构建大鼠olig2真核表达载体,观察其过表达对大鼠神经干细胞（NSCs）向少突胶质细胞分化的影响.方法：采用 RT-PCR,以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增olig2基因,定向克隆到pEGFP-N3载体中.用电穿孔方法转染pEGFP-N3-olig2表达载体至NSCs中.用RT-PCR鉴定olig2的表达,用免疫荧光显色鉴定NSCs向少突胶质细胞的分化情况.结果：成功构建了pEGFP-N3-olig2真核表达载体;olig2在重组质粒转染的NSCs中能够高效表达;重组质粒转染的NSCs在体外诱导分化后,能够较空质粒转染的NSCs产生更多的受体相互作用蛋白（RIP）阳性细胞.结论：olig2过表达能够促进大鼠NSCs向少突胶质细胞方向分化.
- 吕合作陈治文胡建国
- 关键词：少突胶质细胞克隆
- Olig1转录因子在大鼠脊髓发育过程中的表达
- 2012年
- 目的:检测Olig1转录因子在大鼠脊髓发育过程中的表达情况。方法:选取胚胎14.5 d、18.5 d和出生后当天、出生后3 d、7 d、2周、4周及成年的大鼠脊髓,采用免疫荧光法和RT-PCR检测Olig1在脊髓的表达。结果:从胚胎14.5 d到成年大鼠的脊髓中Olig1均有表达。结论:Olig1在少突胶质细胞不同发育时期均有表达。
- 齐琦张玉心赵保明胡建国吕合作陈晓蓉
- 关键词：脊髓少突胶质细胞
- 流式细胞术检测脊髓损伤大鼠局部浸润的巨噬细胞亚群被引量：2
- 2013年
- 目的:建立检测脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠局部浸润巨噬细胞亚群的流式细胞术方法。方法:取5只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学SCI撞击仪系统制作重物坠落SCI模型为SCI组;另设5只假手术大鼠为假手术组。SCI术后7 d收集损伤的脊髓,制备单细胞悬液,采用Percoll原液密度梯度离心法浓缩浸润的巨噬细胞。分别以CD68与CD86或CD163的不同荧光标记抗体组合作为鉴定M1和M2型巨噬细胞的标志,用流式细胞术检测损伤局部巨噬细胞亚群的变化。结果:假手术组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞占细胞总数的(0.07±0.02)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(9.90±3.28)%和(4.95±0.17)%;而SCI组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞的百分比为(0.21±0.09)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(18.71±0.49)%和(27.07±3.74)%,差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01)。结论:以小鼠抗大鼠CD68、小鼠抗大鼠CD86、小鼠抗大鼠CD163为标志,采用流式细胞术可以成功检测SCI局部浸润的M1和M2型巨噬细胞亚群。
- 朱海胡建国吕合作
- 关键词：脊髓损伤流式细胞术
- 大鼠Olig2基因慢病毒表达载体的构建及其转染后对少突胶质前体细胞分化的影响
- 2012年
- 目的构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响。方法设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段,将其插入到pLenti6.3慢病毒表达载体中,形成pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体。将其与包装质粒混合后共转染293T细胞,包装产生慢病毒后感染培养的OPCs,观察Olig2在感染细胞中的表达并鉴定其表达对OPCs向OLs分化的影响。结果成功将大鼠Olig2-EGFP片段克隆入pLenti6.3慢病毒表达载体,构建的pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体能够高效表达。与空质粒转染的OPCs相比,重组质粒转染的OPCs体外诱导分化后产生更多的OLs(n=5,P<0.01)。结论成功建立大鼠pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达系统,慢病毒介导的Olig2过表达促进大鼠OPCs向OLs分化。
- 王凤超葛鑫张伦军郭晖朱安友吕合作胡建国
- 关键词：少突胶质前体细胞少突胶质细胞慢病毒表达载体转染
