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液氮冷冻兔股骨头坏死模型制备新方法及可靠性评价被引量：9: 2012年; 目的建立一种可靠的并可用于治疗和研究新的液氮冷冻法制成的兔股骨头坏死动物模型。方法采用成年新西兰大白兔21只,无菌条件下手术分离臀肌,切断股骨头圆韧带,显露股骨头。用医用棉签蘸取液氮,对股骨头进行3次冷冻3次复温,制备兔双侧股骨头坏死模型。于术后3、7d及2、4、6、8周进行X线摄片,股骨头大体形态和组织病理学观察。结果 X线摄片结果显示,制模2周时股骨头密度增高;4周时出现密度不均影像;6周时外形出现不规则变化,边缘有透亮区;8周时开始塌陷,关节间隙增大,骺板模糊。股骨头大体形态随时间推移,其受损程度呈加重演变特点。制模3 d的股骨头组织切片可见软骨细胞和骨细胞坏死;2周见骨小梁断裂、排列紊乱;4周见髓腔脂肪细胞坏死,内有新生血管及增生纤维组织;6周时出现匍行附着;而8周可见新骨沉积性生长,骺板处细胞挤压、变形。结论本实验中建立的液氮冷冻股骨头坏死模型新方法具有创伤性小、贴近人股骨头坏死病理演变规律的优点,为干细胞移植等治疗和研究提供了一种新的模型制备方法。; 周正丽张潜彭笳宸黄跃汤宁宁章涛; 关键词：疾病模型股骨头坏死冷冻组织病理学

兔动员外周血间充质干细胞集落形成能力与神经元诱导分化研究被引量：2: 2014年; 目的研究动员后兔外周血间充质干细胞(PBMSCs)的存在频率,并对PBMSCs进行神经元诱导分化鉴定。方法采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)皮下注射动员,结合密度梯度离心和贴壁培养法分离、培养兔外周血样品中的PBMSCs,利用集落形成率分析动员兔PBMSCs的存在频率,并对PBMSCs的神经元分化能力进行体外诱导鉴定。结果动员后的PBMSCs原代培养24h后,可见较多短梭形及多角形贴壁细胞,3～4d后出现集落样生长,传代培养的PBMSCs形态均一、呈长梭形漩涡状生长;未动员的外周血样品中的贴壁细胞少,集落形成少,且易老化,无法传代。集落形成率实验显示,动员后的PBMSCs在每百万外周血单个核细胞中有2.8～10.8个;而未动员组PBMSCs仅有0～3个。免疫细胞化学染色显示,PBMSCs经神经诱导7d后其神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元特性核蛋白(NeuN)染色阳性。结论动员剂可提高兔外周血中的PBMSCs含量,所获取的PBMSCs具备神经元分化能力。; 刘小慧章涛张潜刘金伟刘祖林汤宁宁; 关键词：神经元诱导分化

确证家兔外周血中存在具有多向分化能力的间充质干细胞被引量：2: 2013年; 本研究确证家兔外周血中存在具有多向分化潜能的间充质干细胞(MSC)。取成年新西兰大白兔,经每日皮下注射粒细胞集落刺激因子30μg/kg动员6 d后采集外周血样品,用Ficoll密度梯度离心和贴壁培养法分离纯化外周血间充质干细胞(PBMSC),镜下观察其生长形态并绘制增殖曲线;流式细胞术分析其表型特征;并分别对培养的PBMSC进行成骨、成软骨及成脂细胞诱导分化能力鉴定。结果表明:①原代培养24 h后,可见较多短梭形及多角形贴壁细胞,3-4 d后出现集落样生长,传代培养的PBMSC形态均一、呈长梭形漩涡状生长;②PBMSC增殖能力旺盛,培养2 d后进入对数生长期,细胞倍增时间为37.4 h;③流式细胞术检测显示,培养的PBMSC高表达CD29,不表达CD14;④PBMSC经成骨诱导培养21 d后,茜素红染色显示有明显的钙结节形成;经微团无血清软骨培养体系诱导培养21 d后,细胞团切片,阿利新蓝染色呈强阳性反应;经成脂诱导培养21 d后,油红染色显示诱导细胞胞浆内有大量脂滴。结论:成功从兔外周血中分离培养了PBMSC,在适宜诱导培养条件下具有向成骨、成软骨、成脂分化的能力。; 刘小慧章涛方宁张潜黄跃刘金伟汤宁宁; 关键词：外周血间充质干细胞诱导分化成骨细胞成软骨细胞

液氮冷冻致兔股骨头坏死病理学特征研究被引量：1: 2011年; 目的探讨液氮冷冻法制备兔股骨头坏死动物模型的病理学特征。方法采用成年新西兰大白兔,无菌条件下手术显露股骨头;采用棉签蘸取液氮,对股骨头软骨面负重区冷冻、复温以制备股骨头坏死模型。于制模后第3、7天及第2、4、6、8周随机选择模型兔,手术取下股骨头,进行股骨头纵切面肉眼观察,常规石蜡包埋、切片,经HE染色后光镜观察。结果股骨头纵切面4周前各观察时间点,股骨头局灶性坏死区域渐增。制模术后第3天兔股骨头组织切片镜下可见软骨细胞及骨细胞坏死;术后第7天见坏死区空骨陷窝较多;术后第2周见关节软骨缺损,软骨下区域小血管充血,骨小梁开始断裂、排列紊乱;术后第4周见关节软骨剥脱,髓腔内脂肪细胞坏死,并现增生纤维组织;术后第6周见股骨头塌陷,并出现纤维化骨的匍伏附着;术后第8周见新骨沉积性生长,骺板细胞挤压、变形。结论本研究建立的液氮冷冻致兔股骨头坏死模型具有典型的病理演变特征,贴近已知人类股骨头坏死病理演变规律,是干细胞移植等治疗研究的理想模型。; 周正丽张潜周正平黄跃彭笳宸汤宁宁章涛; 关键词：股骨头坏死疾病模型病理学

间充质干细胞移植治疗股骨头坏死研究进展被引量：1: 2013年; 股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,ONFH）又称为股骨头无菌性坏死或股骨头缺血性坏死,多见于35～55岁青壮年,发病率和致残率高,是骨科临床常见难治症之一[1]。ONFH是源于不同病因引发的股骨头供血不足,致软骨下骨细胞和骨髓坏死,最终导致骨小梁吸收、股骨头塌陷、关节功能障碍的疾病。对于晚期（Ⅲ期及以后）股骨头塌陷并伴严重骨性关节炎患者,; 汤宁宁章涛; 关键词：股骨头坏死间质干细胞移植

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国家自然科学基金(81060148)