国家自然科学基金(30800399)
- 作品数：20 被引量：55H指数：5
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- TNF-α促进大鼠胰岛β细胞系凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响。方法体外培养大鼠胰岛细胞系INS-1细胞,用CCK-8检测TNF-α(0、1、5、10和20 mg/L)的细胞存活率;确定TNF-α作用的最佳浓度和时间后,给予TNF-α(5 mg/L,24 h)处理INS-1细胞;用CCK-8与流式细胞术检测胰岛细胞的存活和凋亡;real-time PCR检测TXNIP和ChREBP mRNA表达;Western blot法检测TXNIP、ChREBP和FOXO1蛋白的表达。结果TNF-α呈浓度依赖性降低INS-1细胞存活率(P<0.05),并诱导细胞凋亡;与对照组相比,TXNIP和ChREBP mRNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05);FOXO1蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 TNF-α诱导INS-1胰岛细胞凋亡,加重细胞损伤。
- 梁男男张倩吴向征赵嘉惠王瑾焦向英
- 关键词：TNFΑFOXO1CHREBPINS-1细胞
- 白藜芦醇对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡和损伤的保护作用被引量：3
- 2013年
- 目的观察白藜芦醇对高糖诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及损伤的影响，探讨硫氧还蛋白（Trx）系统在此过程中的作用。方法使用培养的乳鼠心肌细胞，随机分为三组：正常对照组（葡萄糖5．5mmol／L）、高糖组（葡萄糖25mmol／L）和高糖＋白藜芦醇组（葡萄糖25．0mmol／L，白藜芦醇30．0umol／L）。白藜芦醇组给予白藜芦醇30umol／L预处理45min，对照组和高糖组均给予等量相应溶剂处理。各组细胞于正常糖浓度DMEM或高糖DMEM中继续培养48h后，收集上清液和细胞裂解液进行后续研究。结果与正常对照组相比，高糖组细胞乳酸脱氢酶漏出和细胞凋亡明显增加。进一步分析发现，高糖组细胞p38激酶活性、细胞内活性氧生成量，丙二醛（MDA）含量和3一硝基酪氨酸生成量明显升高，Trx活性降低，但其表达未见明显改变，其内源性抑制蛋白硫氧还蛋白相关蛋白（TXNIP）表达增加。白藜芦醇预处理显著减轻了高糖诱导的细胞凋亡及损伤，m活性得到改善，高糖引起的TXNIP表达明显下调，细胞p38激酶活性、细胞内活性氧生成、MDA含量、3一硝基酪氨酸生成量明显降低。结论白藜芦醇对高糖诱导的乳鼠心肌细胞凋亡和损伤具有明显保护作用，其机制与白藜芦醇减少Trx的硝基化，抑制高糖诱导的TXNIP表达上调，从而保护Trx的功能，减少自由基损伤和凋亡的发生有关。
- 范丽芬杨啸姚艳玲薛晓维焦向英
- 关键词：硫氧还蛋白凋亡白藜芦醇心肌细胞
- 硫氧还蛋白与糖尿病心肌损伤的研究进展被引量：3
- 2016年
- 硫氧还蛋白(Trx)是一类高度保守的低分子蛋白,具有促进细胞生长、抗自由基、抗凋亡等功能,在氧化还原调节和细胞信号转导中发挥重要作用。Trx参与了糖尿病心肌损伤的发生发展,且对心肌起保护作用。本文就近年关于Trx对糖尿病心肌损伤的相关研究进行综述。
- 赵晓琴白胜超孙君志李俊平
- 关键词：心肌硫氧还蛋白糖尿病
- 软脂酸对INS-1胰岛细胞TXNIP表达的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:2型糖尿病患者体内持续高水平的游离脂肪酸会损伤胰岛β细胞。硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)是内源性的硫氧还蛋白(Trx)抑制蛋白。已知高糖刺激可引起TXNIP表达上调,促进胰岛β细胞凋亡,而游离脂肪酸对TXNIP的影响尚不明确。本实验旨在研究软脂酸对TXNIP表达的影响及机制。方法:在使用不同浓度和不同作用时间的软脂酸充分预实验的基础上,确定使用添加0.5 mmol/L软脂酸的RPMI-1640培养基培养INS-1胰岛细胞24 h,测定细胞TXNIP的表达变化、细胞凋亡情况及可能的调控因子变化。结果:与对照组相比,软脂酸组TXNIP的mRNA水平和蛋白表达量均明显增高(P<0.01),软脂酸组凋亡明显高于对照组(P<0.01)。软脂酸组的核因子κB(NF-κB)蛋白磷酸化水平升高(P<0.01),使用不同的NF-κB抑制剂PDTC和SN50均可阻断软脂酸诱导的TXNIP表达上调。结论:饱和脂肪酸软脂酸可通过增加NF-κB磷酸化而上调TXNIP的表达,从而诱导INS-1胰岛细胞凋亡。
- 张倩梁男男吴向征王瑾赵嘉惠焦向英
- 关键词：软脂酸INS-1细胞硫氧还蛋白相互作用蛋白核因子ΚB
- 血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体通过上调自噬诱导INS-1胰岛β细胞凋亡被引量：2
- 2018年
- 目的:本研究旨在探究血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)能否引起胰岛β细胞的凋亡,自噬是否参与其中以及其所发挥的作用。方法:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h后,用流式细胞术、Western blot及Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡水平;Western blot检测自噬相关蛋白LC3和beclin 1的蛋白水平。使用血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂替米沙坦以及经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理细胞1 h之后再加入AT1-AA处理24 h,检测细胞凋亡、自噬及存活率的变化情况。结果:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h可明显降低细胞存活率(P<0.05)。与阴性Ig G对照组相比,AT1-AA分别处理细胞12 h、24 h和36 h后细胞凋亡水平明显增高(P<0.05);此外,LC3及beclin 1的蛋白水平也随处理时间的延长逐渐升高,且凋亡和自噬水平的升高均可被替米沙坦所阻滞。使用自噬抑制剂3-MA预处理之后,细胞的凋亡率较单独给予AT1-AA处理组明显降低(P<0.05)。结论:AT1-AA可通过血管紧张素Ⅱ1型受体上调自噬来诱导INS-1胰岛β细胞凋亡。
- 李丹王瑾何金玲冯艳金曹竹杰焦向英
- 关键词：INS-1细胞细胞凋亡自噬
- GLP-1对高糖诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制分析被引量：2
- 2014年
- 目的 以高糖刺激的乳鼠心肌细胞模拟糖尿病诱导心肌细胞损伤,给予胰高血糖样多肽-1（GLP-1）预处理,观察其对高糖引起的心肌细胞凋亡的影响,以及细胞内硫氧还蛋白（Trx）系统的变化.方法 将分离培养48 h的大鼠乳鼠心肌细胞分为3组：①正常对照组：使用含葡萄糖5.5 mmol/L的DMEM培养基加入甘露醇20 mmol/L作为对照培养基进行培养;②高糖组：使用含葡萄糖25 mmol/L的DMEM培养基作为高糖培养基进行培养模拟糖尿病;③高糖＋ GLP-1组：以含葡萄糖25 mmol/L的DMEM培养基加入终浓度10 nmol/L的GLP-1继续培养模拟糖尿病GLP-1干预.心肌细胞分别在三种培养基中培养24h后测定指标.结果 ①与正常组比较,高糖组细胞乳酸脱氢酶活性、细胞凋亡率、p38激酶活性均显著升高,Trx活性明显降低（P＜0.05）;硫氧还蛋白表达无明显变化,但细胞内蛋白硝基化的标志物3-硝基酪氨酸生成量增加,Trx的内源性抑制蛋白硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）表达明显上调,活性氧（ROS）生成和丙二醛（MDA）的含量均明显升高（P均＜0.05）.②与高糖组比较,高糖＋GLP-1组乳酸脱氢酶活性、细胞凋亡率、p38激酶活性明显降低,Trx活性明显恢复（P＜0.05）,3-硝基酪氨酸生成、TXNIP表达、活性氧生成和丙二醛的产生量均明显降低（P均＜0.05）.结论 高糖可引起培养的乳鼠心肌细胞发生损伤和凋亡,这种损伤与高糖引起的Trx活性和功能下降有关.蛋白的硝基化、TXNIP的表达上调均可抑制Trx的活性,使其抗自由基和抗凋亡功能减弱,自由基生成增加,p38激酶介导的凋亡途径加强,进而引起心肌细胞损伤和凋亡.GLP-1处理可使高糖引起的TXNIP表达明显下调,蛋白硝基化减轻,Trx活性得到改善,细胞自由基损伤和凋亡减轻,通过对Trx系统的保护而逆转高糖引起的细胞损伤和凋亡.
- 杨啸范丽芬姚艳玲焦向英
- 关键词：硫氧还蛋白心肌细胞
- 香草乙酮对大鼠心肌再灌注损伤的保护作用被引量：2
- 2010年
- 目的为明确烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶在心肌再灌注损伤中的作用,并探索治疗再灌注损伤的新途径,使用香草乙酮(apocynin)这一特异的NADPH氧化酶抑制剂对心肌再灌注损伤进行干预,并对其效果和机制进行了观察分析。方法使用在体大鼠心脏缺血再灌注模型,给予30 min左前降支结扎造成缺血,随后松扎进行3 h再灌注。Apocynin干预组于再灌注前10 min给予不同剂量的apocynin,观察其剂量与心脏保护效应关系,并测定心功能、梗死面积、心肌细胞凋亡、NADPH氧化酶活性和自由基生成等指标。结果再灌注后心肌NADPH氧化酶活性明显升高,自由基生成也显著增加。给予apocynin可剂量依赖性地减轻心肌再灌注引起的细胞凋亡和自由基生成,apocynin 10 mg/kg剂量可以改善再灌注后的心脏功能,缩小梗死面积,减少心肌凋亡的发生,抑制NADPH氧化酶的活化,从而减少超氧阴离子和过氧化亚硝酸盐自由基的生成及其损伤,但对一氧化氮的生成无明显影响。结论NADPH氧化酶在心肌再灌注损伤中发挥重要作用,apocynin可以对再灌注大鼠心肌发挥保护作用,这种保护与其抑制NADPH氧化酶的活性,减少其介导的超氧阴离子和过氧化亚硝酸盐自由基生成有关。
- 焦向英赵晓琴张燕赵荣瑞
- 关键词：再灌注损伤NADPH氧化酶过氧化亚硝酸盐
- 腺病毒过表达TXNIP对INS-1胰岛细胞损伤和凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 观察TXNIP过表达是否可以引起正常培养条件下的胰岛细胞发生损伤和凋亡,分析TXNIP引起细胞损伤和凋亡的下游途径,以进一步明确TXNIP在糖尿病中引起各器官细胞损伤的机制.方法 将使用正常糖脂浓度培养的胰岛细胞分为4组：正常培养组、Ad-eGFP空病毒组、Ad-TXNIP过表达组和Ad-TXNIPC247S点突变过表达组.结果 与Ad-eGFP空病毒组相比,两个过表达组的TXNIP mRNA水平、TXNIP蛋白水平均显著升高,表明病毒转染成功,TXNIP成功过表达.与空病毒组相比,Ad-TXNIP过表达组TXNIP与Trx的结合量升高（1.67±0.08比1.06±0.05,P＜0.05）,而Trx活性显著降低（0.42±0.11比1.13±0.14,P＜0.01）;LDH活性[（498.8±55.62）U/L比（266.2±36.49）U/L,P＜0.01]、caspase-3活性[（3.799±0.330）nmol·h-1·mg-1 pro比（0.979±0.100）nmol·h-1·mg-1 pro,P＜0.01]及p38激酶活性（2.45±0.22比1.10±0.08,P＜0.01）均显著增高.与Ad-TXNIP过表达组相比,C247S点突变的TXNIP过表达组TXNIP与Trx的结合量减少,Trx活性明显升高,LDH活性[（421.6±41.31）U/L比（498.8±55.62）U/L,P＜0.05]和caspase-3活性[（3.377±0.290）nmol·h-1·mg-1 pro比（3.799±0.330）nmol·h-1·mg-1 pro,P＜0.01]较低,p38激酶活性（0.80±0.07比2.45±0.22,P＞0.05）明显降低.结论 单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养条件下的胰岛细胞发生损伤和凋亡.TXNIP介导细胞损伤和凋亡的机制一方面与其抑制Trx活性、增加自由基损伤、增加ASK1-p38激酶依赖的凋亡途径有关,同时也有不依赖结合抑制Trx的途径存在.TXNIP的表达上调是糖尿病引起胰岛细胞损伤和凋亡的重要原因.
- 刘晓波杨啸姚艳玲张倩焦向英
- 关键词：硫氧还蛋白硫氧还蛋白相互作用蛋白胰岛细胞凋亡
- 链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠的心肌损伤观察及机制初探被引量：5
- 2010年
- 目的观察链脲佐菌素（STZ）诱导2型糖尿病后不同时期大鼠心肌损伤及凋亡的程度，并对其机制进行分析。方法使用高糖、高脂加STZ注射造成大鼠2型糖尿病模型，于STZ注射后不同时间点分批处死动物，对心肌损伤及凋亡指标进行测定。结果糖尿病大鼠经STZ处理1周后，与对照组大鼠相比，空腹血糖明显升高（FBG≥16．7mmol／L），而血清胰岛素含量升高或无明显变化，提示2型糖尿病造模成功。糖尿病大鼠第12周起LVSP、＋dp／dtmax、-dp／dtmax显著降低，提示糖尿病可引起心功能下降。糖尿病大鼠第2周、4周和12周CK—MB明显增高，第12周和24周cTnI明显增高，提示糖尿病第2周即可诱发心肌损伤，并随着病程的发展加重。凋亡指标测定表明，糖尿病大鼠在第4周和12周时，caspase-3和caspase-8活性显著增高，第12周和24周时caspase-9活性显著增高，提示糖尿病第4周即可造成心肌细胞凋亡，且可能依赖caspase-8途径早于依赖caspase-9途径。结论糖尿病可以引起心肌损伤和细胞凋亡，并随病程的延长而加重，这种凋亡与caspase-8和caspase-9依赖的凋亡途径有关。
- 赵晓琴赵俊杰张燕李晓宇王可焦向英
- 关键词：心肌细胞凋亡
- 慢性异丙肾上腺素刺激引起心肌细胞凋亡的机制研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨异丙肾上腺素(ISO)长期刺激其受体对心肌细胞凋亡的影响。方法实验用雄性小鼠30只,分为3组,盐水对照组、ISO刺激组和ISO+SB203580干预组,分别通过埋植渗透给药泵持续给予盐水、ISO[30 mg/(kg.d)]或ISO+p38抑制剂SB203580[10 mg/(kg.d)],共7 d,随后取血清及心肌组织测定指标。结果慢性ISO刺激引起明显的心肌肥厚和细胞凋亡,增加血清和心肌中炎症因子白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成(P<0.01),增加诱生型一氧化氮合酶(i NOS)的表达(63%)、一氧化氮(NO)及过氧化亚硝酸盐的生成(P<0.01)。SB203580干预后,p38激酶活性抑制,血浆和心肌中IL-6和TNF-α等炎症因子生成减少[干预组与ISO组比较,IL-6:(22.26±6.38)ng/Lvs(51.32±9.20)ng/L,TNF-α:(11.75±1.09)ng/Lvs(8.64±1.01)ng/L,P<0.01],i NOS的表达及其介导的NO生成和过氧化亚硝酸盐损伤减少[干预组与ISO组比较,NO:(38.60±6.60)μmol/g蛋白vs(58.80±13.28)μmol/g蛋白;硝基酪氨酸:(2.86±0.43)μg/g蛋白vs(4.20±0.47)μg/g蛋白,P<0.01],超氧阴离子生成也减少。结论本研究表明,慢性异丙肾上腺素刺激可以引起心肌细胞凋亡,这种致凋亡损伤可能是通过激活p38激酶,促进炎症因子生成,激活i NOS,增加自由基生成和损伤造成的。
- 焦向英赵晓琴张燕孙建忠
- 关键词：P38激酶SB203580异丙肾上腺素心力衰竭凋亡
