国家高技术研究发展计划(2006AA100108-4-7)
- 作品数：15 被引量：112H指数：7
- 相关作者：张鲁刚张明科惠麦侠贾晋张少丽更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学内蒙古科技大学甘肃省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划陕西省“13115”科技创新工程国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生被引量：21
- 2010年
- 以15个大白菜[Brassica campestris ssp. Pekinensis （Lour.） Olsson]自交系和杂交种为试材进行游离小孢子培养,研究了影响胚状体发生及植株再生的几个主要因素。结果表明,有12个品种的游离小孢子在NLN-13液体培养基上诱导出胚;各品种间小孢子胚产量差别很大,每个花蕾产胚在0.25~65.4个之间;将成熟的子叶形胚及时转移至再生培养基上,对提高植株获得率至关重要;在NLN-13液体培养基上附加0.2mg.L-1的6-BA对胚状体的发生和发育有促进作用;B5＋0.2 mg.L-16-BA＋0.02 mg.L-1NAA的培养基有利于小孢子胚发育成植株;1/2 MS＋0.1 mg.L-1NAA为小孢子植株生根最适宜的培养基。
- 付文婷张鲁刚胥宇建张立志牛娜
- 关键词：大白菜小孢子胚状体再生植株
- 大白菜苹果酸脱氢酶基因的克隆及序列分析被引量：8
- 2009年
- 首先以一个用cDNA-AFLP分析大白菜[Brassica campestris L.ssp.pekinensis(Lour.)Olsson]雄性不育花蕾败育得到的差异表达片段(TDF,Transcript Derived Fragments)EST54-1为信息探针,在Gen-Bank数据库中进行同源EST序列检索,并对亲缘关系近的同源EST序列进行拼接,获得长度为1574bp的虚拟序列。然后设计引物,经RT-PCR扩增、测序,获得了大白菜苹果酸脱氢酶基因的cDNA全长序列,并已将其登录到GenBank,登录号:FJ208590,该cDNA全长1209bp,编码403个氨基酸。同源分析显示该cDNA与电子克隆获得的核酸序列99%同源,该cDNA序列推导的氨基酸序列与拟南芥苹果酸脱氢酶同源性100%。虽然在大白菜花蕾败育过程中苹果酸脱氢酶基因mRNA表达量下降,但其与大白菜花蕾败育的关系还需通过RNA干扰等技术进行验证。
- 贾晋张鲁刚
- 关键词：大白菜电子克隆RT-PCR苹果酸脱氢酶
- 萝卜DDRT-PCR技术体系的优化被引量：6
- 2008年
- 【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法（异硫氰酸胍法）与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg^2＋、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8-2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求；确定的最佳DDRT-PCR反应体系（20μL）为：10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg^2＋2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq酶1.5 U,锚定引物2.5μmol/L,随机引物1.25μmol/L,cDNA用量0.5μL。mRNA差异显示结果表明,高分辨率的片断为100-1 000 bp。经验证,该体系也适用于大白菜和油菜mRNA差异显示研究。【结论】通过两种RNA提取方法比较和DDRT-PCR体系优化,获得了萝卜最佳RNA提取方法及mRNA差异显示反应体系。
- 贾晋张鲁刚
- 关键词：萝卜RNA提取DDRT-PCR
- 大白菜orf224基因植物表达载体的构建及遗传转化被引量：8
- 2008年
- 为了创制新的大白菜雄性不育材料,双酶切重组质粒pMD18-T-CMS7311-orf224和表达载体pWR306后,将CMS7311-orf224基因与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了细胞质雄性不育线粒体基因CMS7311-orf224的植物表达载体pWR-CMS7311-orf224,通过酶切和PCR验证pWR-CMS7311-orf224载体构建正确.采用快速冻融法,将表达载体导入农杆菌EHA105,转化大白菜材料06J28,对转化植株的GUS、PCR和RT-PCR检测表明,获得了2个大白菜转基因植株.
- 范爱丽张鲁刚惠麦侠张明科张战凤
- 关键词：大白菜植物表达载体
- 植物细胞程序化死亡的研究进展被引量：1
- 2009年
- 细胞程序化死亡是普遍发生于植物生长发育的各个阶段的1种现象。本文对植物器官发生了细胞程序化死亡现象、植物细胞程序化死亡相关的基因、研究方法以及其与育种的关系等方面进行了简要概述。
- 贾晋王国泽潘建刚张鲁刚
- 关键词：基因研究方法育种
- 提高籼稻花药培养二倍体得苗率的初步研究被引量：1
- 2009年
- 为了更好地利用花药培养为杂交水稻遗传研究和育种服务,必须得到较大群体的二倍体花粉绿苗,通过改良培养基来提高花粉绿苗的加倍率是最主要的途径。为了评价改良培养基的效果,笔者引入一个新概念:二倍体得苗率(二倍体得苗率=移栽成活率×二倍体率=移栽成活的二倍体绿苗数/总试管苗数)。本试验在生根培养基中加入2.5mg/L多效唑和4mg/L秋水仙碱得到的二倍体得苗率显著高于加入4mg/L秋水仙碱的生根培养基和基本的生根培养基。结果表明,多效唑对秋水仙碱染色体加倍有增效作用。
- 赵慧霞张鹏陈勇张仁沈久淑曾莉肖培村
- 关键词：秋水仙碱多效唑
- 大白菜带柄子叶离体不定芽再生过程中的组织学观察被引量：5
- 2008年
- 以普通大白菜品种秋早55和彩色大白菜材料06J28的带柄子叶为试验材料,对离体带柄子叶不定芽再生过程中的组织学变化进行了观察研究。结果表明,在带柄子叶离体培养过程中,培养2-3 d,子叶柄切口端皮层及维管束薄壁细胞开始启动,细胞迅速分裂形成分生细胞团,秋早55和06J28分别在培养5 d、6 d时出现明显芽原基,不定芽的产生方式为直接出芽,在秋早55中还观察到有个别芽再生发生于愈伤组织内部,为内起源。
- 邓永玲张鲁刚董美云吴洋惠麦侠张明科
- 关键词：大白菜带柄子叶不定芽再生组织学变化
- 白菜紫色性状RAPD连锁标记的筛选与染色体定位研究被引量：28
- 2008年
- 以紫菜薹自交系95T2-5、大白菜自交系94S17-1及其F1、F2、BC1植株为材料,进行RAPD分析,从640个随机引物中筛选出2个引物S79和S123,分别能扩增出与紫色性状连锁的条带S79-934和S123-750。连锁分析发现,标记S79-934和S123-750与紫色基因间的遗传距离分别为13.73cM和18.65cM,并且位于紫色基因的两边。回收S79-934特异带,克隆转化并测序,比较分析表明其与大白菜1号染色体上已知克隆KBrH077A05的全序列(113253bp)有99%的相似性,初步推断控制紫色性状的主基因位于大白菜1号染色体上。
- 张明科张鲁刚巩振辉惠麦侠
- 关键词：RAPD标记同源性分析染色体定位
- 大白菜雄性育性转化相关β-酯酶同工酶双向电泳分析被引量：1
- 2008年
- 以大白菜温敏雄性不育系TsCMS7311（A）及其保持系7311（B）的小花蕾（长度大约1．5mm）为材料，活性凝胶电泳分析发现：β-酯酶同工酶与育性转化关系密切，正常不育系比保持系缺少迁移率为0．683、0．718和0．742的3条酶带；随着育性的转化，酶谱接近保持系带型；当育性回复到正常的不育状态时，其同工酶酶谱也随之回复到正常的不育系带型。在低温处理后的不育系TsCMS7311（A^T）育性转化期间，回收与雄性育性转化相关的β-酯酶带区，双向凝胶电泳分析，结果表明，保持系B和转化后的不育系A^T的双向电泳图谱相似，第1向IEF电泳中各获得了2条特异谱带，等电点在7．7附近；第2向SDS电泳中各得到了6种β-酯酶多肽，分子量在55～62kD之间。
- 张少丽张鲁刚张明科
- 关键词：大白菜双向电泳
- 大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生
- 以15个大白菜(Brassica campestris ssp.Pekinensis(Lour.)Olsson)自交系和杂交种为试材进行游离小孢子培养,研究了影响胚状体发生及植株再生的几个主要因素。结果表明:有12个品种...
- 付文婷张鲁刚胥宇建张立志牛娜
- 关键词：大白菜小孢子胚状体再生植株
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