上海市现代生物与新药产业发展基金(024319115)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：孙铭娟焦炳华王梁华宗英董晓毅更多>>
- 相关机构：第二军医大学江苏大学江南大学更多>>
- 发文基金：上海市现代生物与新药产业发展基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 融合蛋白Kininogen D5_(60-148)-TRAIL_(114-281)的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用被引量：2
- 2009年
- 目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL114-281(pMAL-TRAIL)和pMAL-Kininogen D560-148-TRAIL114-281(pMAL-KT),重组质粒分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT,并经亲和层析纯化。MTT法检测细胞的增殖,管状形成实验检测内皮细胞血管形成,流式细胞仪和电镜检测细胞凋亡。结果:成功构建原核表达载体pMAL-KD5、pMAL-TRAIL和pMAL-KT,并获得纯化的融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT。融合蛋白MBP-KT与MBP-KD5、MBP-TRAIL相比可显著抑制内皮细胞ECV304和胰腺癌细胞SW1990的增殖、明显抑制ECV304细胞体外管腔的形成,同时,MBP-KT剂量依赖性地诱导SW1990细胞凋亡。结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。
- 宗英王梁华孙铭娟董晓毅王燕陆国才焦炳华
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体血管生成抑制因子
- 人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定
- 2008年
- 目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptideⅡ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法:采用pMAL-p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ_(147-312),对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAP-Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性;以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性;以MTF法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体,经诱导表达、纯化,获得重组EMAP-Ⅱ产物,每克菌体(湿重)可获得约500μg的重组蛋白,纯度为电泳纯。重组EMAP-Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子;并可增强ECV-304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性,使凋亡率明显增加[(16.6±2.5)% vs(25.6±2.3)%,P<0.01];在一定的质量浓度(1μg/ml)下,EMAP-Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ,该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。
- 高云王梁华任娜孙铭娟郭爱云焦炳华
- 关键词：克隆表达抗肿瘤增殖抑制
- 四环素类药物新型释药系统研究进展被引量：4
- 2008年
- 综合国内外文献报道,对四环素类药物新型释药系统相关研究进行综述,旨在为新型四环素类药物释药系统的研究提供思路和方法。四环素类药物为广谱抗生素,通常应用的有四环素、地美环素、米诺环素、土霉素、多西环素,其制剂形式一般为胶囊、片剂、溶液、注射剂等。新型释药系统包括脂质体、微球、漂浮片、凝胶剂、药物-载体复合物、线剂等在四环素类药物中的研究应用逐渐成为热点,进一步研究开发四环素类药物新型释药系统,促进老药新用,将有重要意义。
- 王延松徐希明余江南
- 关键词：四环素类药物释药系统
- 庆大霉素优良高产菌株的诱变选育研究被引量：1
- 2008年
- 为得到优良的庆大霉素(GM)高产菌,以Micronozpora Echinozpora07-1为出发菌,经硫酸二乙酯(DES)和微波诱变处理,以自身代谢终产物为筛子,采取抗性平板以及摇瓶动态选育两种方式,结合薄板层析(TLC)检测进行优良突变菌株的筛选。筛选得到的产C1组分比例较高的优良突变菌株突变菌株D15,其发酵液中C1含量达到GM中的45.94%,生物效价为1400U/ml,较出发菌株提高了66.8%,并且具有良好的遗传稳定性。
- 张家骊杨绪明李江华房峻
- 关键词：庆大霉素微波诱变
- Kininogen D5和TRAIL融合蛋白的克隆表达及生物学活性的研究被引量：3
- 2008年
- 用重组PCR技术得到Kininogen D5和TRAIL的融合编码序列,将该DNA片段克隆到原核表达载体pMAL-c2,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,得到MBP-KT和MBP-TK,经AmyloseResin亲和层析柱层析,得到初步纯化的融合蛋白。结果表明MBP-KT对胰腺癌细胞1990有明显的杀伤作用其作用的ED50为20 ng/ml,而MBP-TK对1990的抑制作用不明显;同时,MBP-KT和MBP-KD5对内皮细胞ECV304有明显的抑制作用,MBP/KT作用于ECV304的ED50为0.1μg/ml,MBP/KD5作用于ECV304的ED50为9.5μg/ml,但是MBP-TK和TRAIL几乎无作用,表明融合蛋白KT既具抗肿瘤作用又有抗新生血管的作用。本研究为进一步开发靶向性杀伤肿瘤药物奠定了基础。
- 宗英孙铭娟董晓毅高云王梁华焦炳华
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体增殖抑制血管生成抑制因子
