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国家高技术研究发展计划(2001AA213141): 作品数：14 被引量：82H指数：5; 相关作者：扈荣良蔡宏朱玉贤周井祥袁宝更多>>; 相关机构：军事医学科学院北京大学吉林大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗田间免疫效果评定被引量：3: 2007年; 以狂犬病病毒糖、核蛋白'二价'DNA疫苗pVGN免疫3月龄至8岁龄家犬302条,分为2组:Ⅰ组201条,两侧股内侧肌注;Ⅱ组101条,单侧股内侧肌加单侧耳廓皮内联合注射.免疫3次,剂量为每条犬每次300μg,于试验的0d和35d分别进行.三免后21d用间接ELISA检测特异性抗体,Western-blot分析抗体组成,间接免疫荧光和小鼠中和试验测定抗体中和效价.结果显示,三免后抗体阳转率为58%,组间抗体水平差异不显著(P＞0.05),机体产生了抗糖蛋白、核蛋白2种特异性抗体,抗体稀释8～512倍后,每50μL可以中和100TCID50狂犬病病毒SRV9,个别稀释到2048倍仍具有中和作用,抗体稀释8～16倍后每15μL可中和120MICLD50狂犬病病毒CVS,少部分犬三免后抗体稀释16～32倍后能中和300MICLD50狂犬病病毒CVS.说明该疫苗具有良好的免疫原性,且诱生的抗体能发挥病毒中和作用.; 肖跃强李海涛刘澜张守峰扈荣良; 关键词：狂犬病 DNA疫苗田间免疫间接免疫荧光

狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗安全试验与田间免疫研究: 本研究应用RV糖,核蛋白"二价"DNA疫苗免疫40和301条无狂犬病疫苗免疫史家犬,分别开展安全试验与田间免疫研究。通过观察受试犬的临床表现,监测抗性基因的转移,检测质粒及其主要元件在主要脏器和注射组织的分布、存留及整合...; 肖跃强张守峰扈荣良沈志强; 关键词：DNA疫苗田间免疫; 文献传递

猪瘟病毒E2基因在昆虫细胞中的分泌表达及活性检测被引量：7: 2005年; The glycoprotein E2 contains major antigenic determinants and involved in inducing neutralization antibodies.A truncated form of the CSFV glycoprotein E2 was expressed in baculovirus.The signal sequences of E2 gene were replaced with the honeybee melittin signal sequence,allowing efficient entrance into the secretory pathway in insect cell.In addition,the hydrophobic transmembrane anchors at the carboxyl termini of E2 proteins were removed to enable secretion rather than maintenance in the cellular membranes.Recombinant E2 protein was purified from the supernatant of infected cells by employing Ni2+ affinity chromatography.Protein purified was recognized by at least three anti-E2 pig sera and WH211 monoclonal antibody.WH211 monoclonal antibody couldn′t recognize the protein expressed in E.coli,indicating that it retain native structure.Thus,E2 expressed in insect cells can be used as a tool for diagnostic tests as well as obtaining material that could be suitable for X-ray crystallography studies.; 查云峰徐兴然肖昌余兴龙涂长春; 关键词：猪瘟病毒 E2基因杆状病毒表达系统分泌表达

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒的构建及其免疫原性被引量：4: 2009年; 目的构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒,并检测其免疫原性。方法用RT-PCR法扩增PRRSV的GP5和M蛋白基因片段,克隆至真核表达载体pIRES-neo中,构建真核表达质粒pIRES-G和pIRES-M,制备核酸疫苗,以其单独或联合免疫小鼠,检测其免疫原性。结果真核表达质粒pIRES-G和pIRES-M经酶切鉴定证明构建正确。第1次免疫后4周,各重组质粒免疫组小鼠血清ELISA抗体水平均显著升高,其中pIRES-G + pIRES-M组抗体水平最高;第1次免疫后9周,pIRES-G + pIRES-M组小鼠血清中和抗体效价(1∶16)高于pIRES-G组(1∶8)和pIRES-M组(1∶4),但均低于灭活疫苗组(1∶64);第1次免疫后9周,与pIRES-neo组相比,各组免疫小鼠脾细胞经特异性(PRRSV)和非特异性(ConA)抗原刺激后,均有明显的增殖,对非特异性刺激反应比特异性刺激反应略强。结论已成功构建PRRSV GP5、M蛋白基因核酸疫苗表达质粒,二者联合免疫效果更好。; 周井祥薛江东张嘉保刘殿峰袁宝扈荣良; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 M基因核酸疫苗免疫原性

结核分枝杆菌多价核酸疫苗的构建及免疫原性被引量：18: 2002年; 将编码结核分枝杆菌MPT-64,Ag85B和ESAT-6分泌蛋白的结构基因或包括信号肽的全基因序列定向克隆到真核表达载体pJW4303中,转化到TOP10大肠杆菌,提取质粒DNA,经限制性核酸内切酶鉴定及序列分析证实含有正确的上述3种分泌蛋白的结构基因（包括信号肽）全序列.用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并进行瞬时表达,收集表达细胞或浓缩上清液,12％或15％的 SDS-PAGE电泳分离,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹杂交,证明上述3种重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白.3种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠21d后,Ag85B抗体的平均滴度即达到 1:3200,第2次免疫21d后达到1:102400.MPT-64抗体的平均滴度在首免21d后为1:50.第2次免疫21后为1:200.两次免疫21d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体.三免21后Ag85B的特异性细胞因子γ-干扰素的浓度为110pg/mL;而 MPT-64和ESAT-6的γ-干扰素浓度未检测到.实验在国内首次用结核杆菌多价DNA疫苗对小鼠进行了免疫实验,二免后的抗体水平已达到或超过国内外已报道的单价苗最高抗体水平,表明多价核酸疫苗和分泌型蛋白载体有利于增强疫苗的保护性应答.; 蔡宏潘怡朱玉贤李国利庄玉辉; 关键词：结核分枝杆菌免疫原性细胞应答结核病体液免疫应答

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验被引量：11: 2006年; 从PRRSV野毒株细胞培养上清提取RNA,用RT-PCR的方法扩增出M蛋白基因片段(525 bp),并将该基因克隆到pMD18-T载体,测序结果与PRRSV BJ-4等株同源性最接近.以pIRES-neo为载体,构建表达PRRSV M蛋白的基因疫苗,按100μg/只的DNA量免疫小鼠,二免后二周抗体水平显著高于同期免疫空载体pIRES-neo组,于免疫后14、28、42天后均能检测到较高的细胞免疫水平.这说明表达M蛋白的基因疫苗能够刺激机体产生免疫应答.; 薛江东马国文袁宝周井祥扈荣良; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白基因疫苗免疫

结核分支杆菌MTB41 DNA疫苗的构建及原核表达被引量：2: 2005年; 为了构建结核分支杆菌MTB41DNA疫苗,同时将其克隆到原核表达载体中进行表达。用结核分支杆菌H37RV 株基因组DNA为模板,用PCR法对基因MTB41进行扩增,克隆到真核表达载体pJW4303 中,构建MTB41 重组真核质粒(DNA疫苗),进行了酶切鉴定和序列分析;克隆到原核表达载体pET22b 中,酶切和测序鉴定正确后转入E.coli BL21(DE3)PLysS 宿主菌株内中,诱导表达,进行SDS PAGE电泳分析。电泳发现转化了重组质粒的菌株有蛋白表达,所表达的蛋白质相对分子质量为41 ku,MTB41 DNA疫苗酶切鉴定和序列分析完全正确,确定含有正确的读码框,疫苗制备成功。DNA 疫苗的成功构建, 重组蛋白MTB41的成功表达,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及抗原、抗体的大规模制备打下了基础。; 顾田园蔡宏朱玉贤; 关键词：结核分枝杆菌 DNA疫苗克隆

结核分枝杆菌抗原MPT83和MPT64二价基因疫苗的研究被引量：2: 2005年; 目的探讨结核杆菌两种抗原MPT83和MPT64基因疫苗的免疫原性和免疫保护性。方法用成对引物扩增MPT83和MPT64两种抗原基因,构建到同一载体pJW4303中,测序正确和体外表达验证后免疫小鼠,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定3次免疫后小鼠的抗体滴度。对3次免疫后的小鼠脾细胞进行培养,抗原刺激,用夹心ELISA方法测定细胞因子IFN-γ和IL-4的含量。免疫小鼠攻毒,进行细菌培养,检测肺脏和脾脏的载菌量。结果每次免疫后抗原的滴度分别为1∶200、1∶800、1∶6400,而卡介苗(BCG)组的抗体滴度为1∶800,空载体组未检测到抗体滴度。融合的二价基因疫苗免疫小鼠,主要诱发Th1型细胞因子,IFN-γ占优势,二价组中的含量为7520pg/ml,IL-4的含量仅为ng级。H37Rv攻毒后,二价组小鼠的肺脏载菌量为(2.21±0.03)×105,比空载体免疫小鼠低103倍,比BCG免疫小鼠低10倍。结论抗原MPT83和MPT64二价基因疫苗有效提高了机体保护效力,对于结核病的防治具有一定的借鉴价值。; 田霞蔡宏朱玉贤; 关键词：结核分枝杆菌抗原 MPT64 基因疫苗免疫保护性免疫原性

猪IL-6 cDNA的克隆及在大肠杆菌中的高效表达被引量：5: 2003年; 运用 RT- PCR方法 ,从经刀豆球蛋白 A(Con A)诱导的猪外周血单核细胞 (PMBCs)总 RNA中扩增得到了猪 IL -6 (porcine IL- 6 ,p IL- 6 )的 c DNA,并将其克隆到 p GEM- T载体上。DNA序列测定表明 ,克隆得到的 p IL- 6 c DNA与国外报道的完全一致 ,包括终止密码子在内其编码区的长度为 6 39bp,编码 2 12个氨基酸残基的蛋白质。将 p IL - 6成熟肽段编码区亚克隆至 p ET- 2 8(a)中 ,构建成原核表达质粒 p ETPIL6。该质粒的 BL2 1(DE3) L ys S转化菌在 IPTG的诱导下可高效表达 p IL- 6 ,表达量占菌体总蛋白的 30 .6 0 %～ 38.35 %。; 余兴龙涂长春徐兴然李作生张茂林李吉平; 关键词：白细胞介素6 IL-6 CDNA克隆大肠杆菌

不同组合及组分结核杆菌多价DNA疫苗的保护效率比较研究: 牛结核病是一种慢性消耗性传染病,人、畜结核病的交叉感染是造成结核病不断流行的重要原因,尤其是在畜牧业发达的地区,人、畜间结核病的交叉传播,不仅对人类的身体健康造成威胁,且也严重影响了畜牧业的快速发展。本研究针对市场需求,...; 蔡宏余大海田霞呼西旦李淑霞朱玉贤; 关键词：DNA疫苗结核杆菌多价疫苗; 文献传递

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