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肠道病毒71型抗原含量检测方法的建立及初步验证被引量：1: 2009年; 目的建立肠道病毒71型（EV71）抗原含量检测方法并进行初步验证，用于疫苗研制及生产过程中抗原含量的检测。方法以抗EV71单克隆抗体为包被抗体，酶标抗EV71多克隆抗体为检测抗体，建立双抗体夹心ELISA方法，以本室自制EV71抗原参考品为定量标准，建立抗原标准曲线，确定定量限度及最佳定量范围，并对该方法的准确度、精密度和特异性进行初步验证。结果建立了双抗体夹心检测EV71抗原含量的ELISA方法，定量限度为0．23μg／ml，最佳定量范围为7．32～0．23μg／ml，相关系数为R^2=0．9976；准确性较好，回收率在90％～110％之间；精密性较好，变异系数小于10％；除与EV71样品有特异性反应外，与其他样品无交叉反应。结论建立了检测EV71抗原含量的双抗体夹心ELISA方法并进行了初步验证，为疫苗研制过程中抗原含量测定提供了简便、快捷的检测手段。; 徐静崔文禹李树香刘敬王欣怡陈蕾沈心亮; 关键词：肠道病毒属酶联免疫吸附测定

人类肠道病毒71型的研究进展被引量：9: 2010年; 肠道病毒71型是引起手足口病的主要病原体之一，其感染还可导致多种与神经系统相关的疾病，致残率及病死率较高。近年来，EV71感染在全球范围呈现上升趋势，2008年我国也有较大规模流行。本文对EV71的病原学特征、流行病学特征以及相关最新研究进展等方面作一综述。; 郭会杰王潇潇李秀玲; 关键词：肠道病毒71型受体疫苗

肠病毒71型分离株的鉴定及免疫原性研究被引量：1: 2009年; 目的在对肠病毒71型（enterovirus 71，EV71）分离株进行鉴定的基础上，对其诱导小鼠产生的免疫应答水平进行研究，拟为进一步的EV71候选疫苗研究奠定基础。方法超速离心纯化病毒后，采用磷钨酸负染法通过电镜观察病毒形态、大小；采用特异性EV71单抗通过间接免疫荧光法（IFA）检测病毒的特异性；合成EV71特异性引物，通过RT—PCR对病毒进行分子生物学鉴定；病毒的VP1基因序列测定后，与其他EV71序列进行比较，绘制种系发育树，确定病毒基因型；通过腹腔注射途径免疫小鼠，免疫后分离血清通过微量细胞病变抑制法测定血清中和抗体效价，ELISA法检测血清抗体水平和抗体亚型水平。结果电镜下可观察到典型的圆形病毒颗粒，直径为20～30nm，呈典型的肠病毒形态；085和087株病毒感染细胞中均能观察到黄绿色荧光，提示该两株病毒可与EV71单抗特异性结合；RT—PCR可以从病毒感染细胞中扩增出226bp大小的特异性产物带，而采用CA16特异性引物则不能扩增出相应大小的产物带；基于VP1基因序列的种系发育分析显示，087和085株均为c4基因型；085和087株E、EV71免疫小鼠后可诱导产生能中和包括其本身在内的多个病毒株的中和抗体，针对同一株中和病毒，实验组间差异无统计学意义；针对不同中和病毒株，各实验组中和本株、523-07T株的能力明显高于FY-02T株（P〈0．05）；ELISA法检测结果显示，接种灭活前后的EV71病毒085和087株后均能诱导小鼠产生抗EV71特异性IgG；IgG亚型为IgG1／IgG2a混合型，灭活病毒免疫组小鼠血清EV71特异性IgG、IgG1、IgG2a水平明显高于活病毒免疫组（P〈0．05）。两株病毒之间差异无统计学意义。结论本研究分离到的085和087株病毒均为EV71CA基因亚型，并具有一定的免疫原性。; 李秀玲张中洋王潇潇杨永娟郝春生赵敏何薇薇张晨沈心亮; 关键词：肠病毒71型免疫原性

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国家科技支撑计划(2008BA169D00)

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